一种富含ω-3多不饱和磷脂酰丝氨酸的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种富含ω

【技术实现步骤摘要】
一种富含
ω
‑
3多不饱和磷脂酰丝氨酸的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物工程
，特别涉及一种富含ω
‑
3多不饱和磷脂酰丝氨酸的制备方法。

技术介绍

[0002]磷脂酰丝氨酸(PhosPhatidylserine,简称PS)又称丝氨酸磷脂，二酰甘油酰磷酸丝氨酸，能够通过提升脑神经刺突的数量、细胞膜的流动性以及葡萄糖代谢循环速度，对很多细胞代谢过程起到十分重要的调节作用。具有直接或间接响大脑内化学信息的传递以及脑细胞信号的贮存功能。经临床试验验证，PS的摄入对阿尔兹莫氏症具有很好疗效。PS能够调节脑内情绪神经传输递质的激素水平，同时可以抑制血清中促肾上腺皮质激素和可的松等的水平，有临床案例研究，PS对抑郁症病人情绪紊乱、行为异常、焦虑及易怒等症状具有明显改善效果。PS是神经系统中一种重要营养物质，不仅可以激活神经传输过程各种酶的活性能力，减缓神经递质的减少，还可以修复多种脑部损伤，清除多数有害物质，对因为脑营养不良、脑部损伤或遗传性神经递质数量下降所造成的小儿多动症均有着优越的治疗效果。
[0003]目前PS的取得有两种途径，一是从植物体内直接提取分离(常见原料为大豆)，分离方法有：吸附分离法、低级醇分离法、CO2超临界萃取法、膜分离法等，二是以大豆磷脂为原料，通过酶催化法制得。2010年，我国将PS列入新资源食品名单，就是大豆卵磷脂和L
‑
丝氨酸为原料，采用磷脂酶转化反应后，经分离纯化、干燥后制得。
[0004]目前商品化的PS主要是以大豆卵磷脂(即磷脂酰胆碱：1,2
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二酰基
‑
sn
‑
甘油
‑3‑
磷酰胆碱，简称PC)为原料利用酶催化法制备而成，其C1，C2上是饱和的脂肪酸链。由于南极磷虾油中EPA、DHA主要是以磷脂的形式存在即EPA/DHA型PC，其脂肪酸链是不饱和的，相比于以大豆卵磷脂为原料，以南极磷虾油中EPA/DHA型PC制备的PS，其含有大量的不饱和脂肪酸链，这种特殊的结构具有更高的生物利用度，从而发挥更好的生理功能及营养特性。本专利技术针对南极磷虾油中磷脂优越的结构特点，以此为原料利用酶催化法制备的PS，以期得到具有PUFAn
‑
3和PS双重生物活性的磷脂酰丝氨酸。
[0005]秦鑫鑫等人，利用超临界CO2体系制备富含DHA的南极磷虾磷脂酰丝氨酸以超临CO2为非水反应介质,以南极磷虾中提取的磷脂酰胆碱为原料，在磷脂酶A1的作用下使游离的DHA结合到磷脂酰胆碱上，制备富含DHA的磷脂酰胆碱(DHA
‑
PC),再通过磷脂酶D改性成富含DHA的磷脂酰丝氨酸(DHA
‑
PS)；此方法制备工艺较为复杂，在制备过程中涉及丙酮等有毒物质，DHA的提取纯度不高、DHA
‑
PC制备过程中会有较多的副产物。张芹等人，以鱿鱼卵磷脂和L
‑
丝氨酸为原料,对磷脂酶D催化酰基转移反应制备富含二十二碳六烯酸的磷脂酰丝氨酸，购买的磷脂酶D价格昂贵，成本极高。CN201710498577.3公开了一种利用固定化磷脂酶D生产磷脂酰丝氨酸的方法,配制表面活性剂水溶液,室温下边搅拌边滴加游离酶水溶液至澄清,得混合液；将混合液滴加至金属离子盐溶液中,室温下搅拌反应0.5
‑
2h后得固定化的酶溶液；离心,干燥得到固定化的磷脂酶催化剂；将溶于有机相中的卵磷脂、丝氨酸溶液与固
定化酶进行转化反应,温度0
‑
40℃,时间1
‑
24h；该方法中使用金属离子、干燥等步骤都会对酶活有较大的损失，且工艺复杂。
[0006]采用游离酶的方法可以避免上述问题，但是游离酶在使用过程中通常是一次性加入，催化反应完成后，由于回收难度大而废弃了剩余仍有活性的酶，造成酶的利用率较低，酶试剂成本增大。此外，游离酶混合在反应体系中，也会给产物的分离纯化也带来了相当的挑战。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种富含ω
‑
3多不饱和磷脂酰丝氨酸的制备方法，同时具备磷脂酰丝氨酸、EPA及DHA的生物功效，蕴含巨大的开发价值。同时，延伸了南极磷虾产业链，推动南极磷虾产业的转型升级，对我国充分利用南极渔业资源，占领南极生物战略资源加工利用制高点，争取我国南极资源开发利用长远权益具有重要的战略意义。
[0008]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种富含ω
‑
3多不饱和磷脂酰丝氨酸的制备方法，包括以下步骤：(1)制备有机相：将南极磷虾油加入有机溶剂中混匀，得有机相；(2)制备水相：将四氧化三铁纳米颗粒加入pH＝8
‑
9、浓度10
‑
15mmol/mL的Tris
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HCL缓冲液中，同时快速搅拌，接着加入盐酸多巴胺，30
‑
40℃下搅拌聚合20
‑
25小时，离心过滤，干燥后得到聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒；将聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒加入到磷脂酶D溶液中，25
‑
30℃下200
‑
300r/min恒温振荡1
‑
3小时，过滤，醋酸
‑
醋酸钠缓冲液清洗后，甩干，得到负载磷脂酶D的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒；将负载磷脂酶D的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒、丝氨酸加入醋酸
‑
醋酸钠缓冲液中搅拌均匀得到水相；(3)混合反应：将水相和有机相按照1:0.5
‑
3的体积比混合，38
‑
40℃下100
‑
150r/min恒温振荡5
‑
8小时，向反应体系中加入磁体吸附负载磷脂酶D的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒，然后静置分层，取有机相进一步处理；取出磁体清洗，收集负载磷脂酶D的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒后循环使用；(4)提取产物：取有机相，加入2
‑
3倍体积的氯仿，混匀后静置分层，取氯仿层，减压蒸馏得富含ω
‑
3多不饱和磷脂酰丝氨酸的产物。
[0009]固定化酶具有优于游离酶的稳定性和可操作性，以及独有的重复使用性能，能够明显提高酶的使用效率，降低酶的使用成本。常规的交联固定法，固定化过程不易控制，重现性较差，最明显的缺点是固定化酶的机械强度不足，极易破碎，且亲水性也不佳，难以在水相中均匀分布，化学交联剂的使用也会给食品安全带来潜在的隐患。
[0010]多巴胺在碱性缓冲液中进行氧化自聚可以在四氧化三铁表面沉积一层聚多巴薄膜，赋予载体表面良好的亲水性和活泼的化学反应活性，然后以共价键的方式将磷脂酶D进行固定。这样形成的固定化酶机械强度好，亲水性好，不使用化学交联剂，安全性好，通过磁性吸附能简单回收利用。
[0011]在单一水相中磷脂酶有很高的水解活性而转酯活性较低，因此，单一水相中不适
合用磷脂酶进行转酯反应来本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种富含ω
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3多不饱和磷脂酰丝氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备有机相：将南极磷虾油加入有机溶剂中混匀，得有机相；(2)制备水相：将四氧化三铁纳米颗粒加入pH＝8
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9、浓度10
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15mmol/mL的Tris
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HCL缓冲液中，同时快速搅拌，接着加入盐酸多巴胺，30
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40℃下搅拌聚合20
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25小时，离心过滤，干燥后得到聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒；将聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒加入到磷脂酶D溶液中，25
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30℃下200
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300r/min恒温振荡1
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3小时，过滤，醋酸
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醋酸钠缓冲液清洗后，甩干，得到负载磷脂酶D的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒；将负载磷脂酶D的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒、丝氨酸加入醋酸
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醋酸钠缓冲液中搅拌均匀得到水相；(3)混合反应：将水相和有机相按照1:0.5
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3的体积比混合，38
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40℃下100
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150r/min恒温振荡5
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8小时，向反应体系中加入磁体吸附负载磷脂酶D的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒，然后静置分层，取有机相进一步处理；取出磁体清洗，收集负载磷脂酶D的聚多巴胺包裹的四氧化三铁纳米颗粒后循环使用；(4)提取产物：取有机相，加入2
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【专利技术属性】
技术研发人员：廖妙飞，付万冬，孙继鹏，周宇芳，马明珠，王家星，姚玮，胡诗琦，
申请(专利权)人：浙江省海洋开发研究院，
类型：发明
国别省市：