RNA指导的千碱基规模基因组重组工程制造技术

本公开提供了使用CRISPR和重组酶的重组工程编辑系统及其方法、载体、核酸组合物和试剂盒。该方法和系统提供用于在宿主细胞中改变靶DNA(包括基因组DNA)的手段。靶DNA(包括基因组DNA)的手段。靶DNA(包括基因组DNA)的手段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】RNA指导的千碱基规模基因组重组工程
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年3月3日提交的美国临时申请第62/984,618号，和2021年2月5日提交的美国临时申请第63/146,447号的权益，其各自的全部内容通过引用并入本文。


[0003]本专利技术涉及使用噬菌体重组酶的RNA指导的重组工程编辑系统及其方法、载体、核酸组合物和试剂盒。

技术介绍

[0004]成簇规则间隔短回文重复序列(CRISPR)系统，最初发现于细菌和古菌中，作为免疫系统的一部分，以抵御入侵病毒，形成了基因组编辑技术的基础，该技术可以被编程为靶向基因组或其他DNA的特定延伸，以便在精确位置进行编辑。虽然有各种基于CRISPR的工具可用，但大多数工具都适用于编辑短序列。长序列编辑在模型系统的工程化、治疗性细胞生产和基因治疗中备受欢迎。先前的研究已经开发了改进Cas9介导的同源性
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5定向修复(HDR)的技术，以及利用核酸修饰酶与Cas9的工具，例如先导编辑(prime
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editing)，证明了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种系统，包括：Cas蛋白；包含与靶DNA序列互补的指导RNA序列的核酸分子；和微生物重组蛋白，其中所述微生物重组蛋白选自由RecE、RecT、λ外切核酸酶、Bet蛋白、外切核酸酶gp6、单链DNA结合蛋白gp2.5或其衍生物或变体组成的组。2.根据权利要求1所述的系统，还包括募集系统，所述募集系统包括。至少一种适体序列；和作为融合蛋白的一部分与所述微生物重组蛋白功能性连接的适体结合蛋白。3.根据权利要求2所述的系统，其中所述至少一种适体序列是RNA适体序列或肽适体序列。4.根据权利要求3所述的系统，其中所述核酸分子包含所述至少一种RNA适体序列。5.根据权利要求4所述的系统，其中所述核酸分子包括两种RNA适体序列。6.根据权利要求5所述的系统，其中所述两种RNA适体序列包含相同的序列。7.根据权利要求2
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6中任一项所述的系统，其中所述适体结合蛋白包括MS2外壳蛋白或其功能衍生物或变体。8.根据权利要求2
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6中任一项所述的系统，其中所述适体结合蛋白包括噬菌体N肽或其功能衍生物或变体。9.根据权利要求3所述的系统，其中所述至少一种肽适体序列与所述Cas蛋白缀合。10.根据权利要求9所述的系统，其中所述至少一种肽适体序列包括1至24个肽适体序列。11.根据权利要求9或10所述的系统，其中所述适体序列包含相同序列。12.根据权利要求2
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3或9
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11中任一项所述的系统，其中所述适体序列包括GCN4肽序列。13.根据权利要求2
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12中任一项所述的系统，其中所述微生物重组蛋白N
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端连接至所述适体结合蛋白C
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端。14.根据权利要求2
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13中任一项所述的系统，其中所述融合蛋白进一步包含所述微生物重组蛋白和所述适体结合蛋白之间的接头。15.根据权利要求14所述的组合物，其中所述接头包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列。16.根据权利要求2
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15中任一项所述的系统，其中所述融合蛋白进一步包含核定位序列。17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述核定位序列包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列。18.根据权利要求16或权利要求17所述的系统，其中所述核定位序列位于微生物重组蛋白C端。19.根据权利要求1
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18中任一项所述的系统，其中所述RecE或RecT重组蛋白来源于大肠杆菌(E.coli)。20.根据权利要求1
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19中任一项所述的系统，其中所述微生物重组蛋白包括RecE或其衍生物或变体。
21.根据权利要求1
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20中任一项所述的系统，其中所述RecE或其衍生物或变体包含与选自由SEQ ID NO：1
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8组成的组的氨基酸序列具有至少70％相似性的氨基酸序列。22.根据权利要求1
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21中任一项所述的系统，其中所述RecE或其衍生物或变体包含与选自由SEQ ID NO：1
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3组成的组的氨基酸序列具有至少70％相似性的氨基酸序列。23.根据权利要求1
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19中任一项所述的系统，其中所述融合蛋白包括RecT或其衍生物或变体。24.根据权利要求1
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19或23中任一项所述的系统，其中所述RecT或其衍生物或变体包含与选自由SEQ ID NO：9
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14组成的组的氨基酸序列具有至少70％相似性的氨基酸序列。25.根据权利要求1
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19或23
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24中任一项所述的系统，其中所述RecT或其衍生物或变体包含与选自由SEQ ID NO：9组成的组的氨基酸序列具有至少70％相似性的氨基酸序列。26.根据权利要求1
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25中任一项所述的系统，其中所述Cas蛋白是催化失活的。27.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：丛乐，
申请(专利权)人：小利兰斯坦福大学董事会，
类型：发明
国别省市：