用于预防或治疗纤维化疾病的重组融合蛋白制造技术

本发明专利技术涉及一种可用于预防或治疗发生在肝脏、胰腺、肺等中的纤维化疾病的白蛋白与视黄醇结合蛋白的融合蛋白，本发明专利技术的融合蛋白可通过抑制引起组织纤维化的星状细胞的活化或者诱导星状细胞的失活来预防或治疗纤维化疾病，与用于相同目的的现有融合蛋白相比，在低浓度下表现出更优异的效果，因此，本发明专利技术的融合蛋白有望成为一种通用的基础技术，可以显着降低蛋白质治疗剂对人体的给药剂量和频率。降低蛋白质治疗剂对人体的给药剂量和频率。降低蛋白质治疗剂对人体的给药剂量和频率。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预防或治疗纤维化疾病的重组融合蛋白


[0001]本专利技术涉及一种可用于预防或治疗发生在肝脏、胰腺、肺等中的纤维化疾病的白蛋白与视黄醇结合蛋白的融合蛋白。

技术介绍

[0002]组织纤维化(fibrosis)导致组织功能衰竭的致命后果。例如，肝纤维化导致肝功能衰竭，然后发展为肝硬化和肝癌，在慢性胰腺炎和胰腺癌中都观察到纤维化组织。目前，尚无针对纤维化疾病的治疗剂，组织移植是最有希望的治疗方法。组织纤维化的分子机制尚未阐明，对纤维化疾病治疗剂的研发是必要的。
[0003]最近，发现组织纤维化是由构成组织的细胞之一的星状细胞(stellate cells)的活化过程(活化(activation)及转分化(transdifferentiation))引起的。活化的星状细胞过度表达和积累细胞外基质如胶原蛋白，并分化为肌成纤维细胞(myofibroblast)。这些活化的星状细胞在组织纤维化的发展中起着至关重要的作用。
[0004]星状细胞(stellate cell)不仅分布在肝脏中，还分布在胰腺、肺、肾和肠等中，并在调节整个身体的类视黄醇稳态中发挥核心作用。从食物中获得的维生素A(视黄醇)与血流中的视黄醇结合蛋白(Retinol Binding Protein，RBP)结合并循环，通过作为RBP受体的STRA6移动到星状细胞，并以视黄酯的形式储存在细胞质脂肪滴中。另一方面，已知白蛋白抑制其在星状细胞中的活化，并且已经活化的星状细胞中白蛋白的表达转变为活化前的状态。
[0005]在先前的研究中，本专利技术人通过结合RBP与白蛋白制备了一种靶向星状细胞的融合蛋白，并确认了纤维化的预防及治疗效果，该RBP可以通过STRA6进入星状细胞，以抑制星状细胞的活化或使其失活，这是组织纤维化的开始(KR 10
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1395394)。

技术实现思路

[0006]技术问题
[0007]本专利技术所要解决的技术问题在于，提高现有RBP
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白蛋白融合蛋白对星状细胞的活化抑制或失活的效果，本专利技术提供一种白蛋白的一个以上氨基酸序列被取代的RBP
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白蛋白融合蛋白以及以不同排列方式连接的RBP
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白蛋白融合蛋白。
[0008]并且，本专利技术通过提供可表达上述融合蛋白的载体和其中导入了上述载体的转化体来提供本专利技术的重组蛋白的大量生产方法。
[0009]并且，本专利技术的融合蛋白与现有RBP
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白蛋白融合蛋白相比在星状细胞的活化抑制或失活的方面表现出更优异的效果，因此，本专利技术提供一种包含上述融合蛋白的用于预防或治疗纤维化疾病的组合物。
[0010]然而，本专利技术所要解决的技术问题并不限于如上所述的问题，本领域的普通技术人员通过以下描述将清楚地理解未提及的问题或其他问题。
[0011]解决问题的方案
[0012]为了解决上述问题，本专利技术提供一种由序列1或2的氨基酸序列组成或者包含其的融合蛋白。
[0013]并且，本专利技术提供一种由序列3至8中任一氨基酸序列组成或者包含其的融合蛋白。
[0014]作为本专利技术一实例，上述融合蛋白可用于预防或治疗组织纤维化。
[0015]并且，本专利技术提供一种编码上述各融合蛋白的多核苷酸，上述多核苷酸可由序列9至14中任一碱基序列组成或者包含这些。
[0016]并且，本专利技术提供一种包含用于编码上述融合蛋白的基因的重组载体，以及包含上述重组载体的转化体。
[0017]并且，本专利技术提供一种融合蛋白的生产方法，包括：步骤(1)，制备重组载体，上述重组载体包含用于编码由序列1至8中任一氨基酸序列组成的融合蛋白的基因；步骤(2)，通过将上述重组载体导入宿主细胞来制备转化体；步骤(3)，培养上述转化体；以及步骤(4)，从上述培养液中获得融合蛋白。
[0018]作为本专利技术一实例，编码上述融合蛋白的基因可包含由选自由序列9至14组成的组中的一个以上碱基序列组成的多核苷酸。
[0019]作为本专利技术另一实例，上述宿主细胞可以为哺乳动物的细胞，优选地，可以为哺乳动物的癌细胞，更优选地，可以为CHO细胞(CHO cell)。
[0020]并且，本专利技术可提供一种包含由序列1至8中任一氨基酸序列组成的融合蛋白的用于预防或治疗纤维化疾病的药物组合物。
[0021]并且，本专利技术可提供一种纤维化疾病的预防或治疗方法，包括向个体给予由序列1至8中任一氨基酸序列组成的融合蛋白的步骤。
[0022]作为本专利技术一实例，上述个体可以为需要预防或治疗纤维化疾病的人类，尤其，可以为非酒精性脂肪肝病的患者。
[0023]作为本专利技术另一实例，上述方法还可以包括在给药上述融合蛋白之后通过进行CT成像或活检来诊断纤维化程度的步骤。
[0024]作为本专利技术一实例，上述纤维化疾病可以为选自由肝纤维化(liver fibrosis)、慢性肝炎(chronic hepatitis)、肝硬化(cirrhosis)、肝癌(hepatic cancer)、化疗相关脂肪性肝炎(chemotherapy
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associated steatohepatitis，CASH)、肺纤维化(lung fibrosis)、肾纤维化(renal fibrosis)、肾衰竭(renal failure)、胰腺纤维化(pancreatic fibrosis)、慢性胰腺炎(chronic pancreatitis)及胰腺癌(pancreatic cancer)组成的组中的一种以上疾病。
[0025]并且，本专利技术提供一种上述融合蛋白在制备用于预防或治疗纤维化疾病的药物中的用途。
[0026]专利技术的效果
[0027]本专利技术的融合蛋白可通过抑制引起组织纤维化的星状细胞的活化或者诱导星状细胞的失活来预防或治疗纤维化疾病，与用于相同目的的现有融合蛋白相比，在低浓度下表现出更优异的效果，因此，本专利技术的融合蛋白有望成为一种通用的基础技术，可以显着降低蛋白质治疗剂对人体的给药剂量和频率。
附图说明
[0028]图1为示出白蛋白III与RBP结合的融合蛋白包含在活化的星状细胞中并起作用的机制的图。
[0029]图2为比较并确认本专利技术的融合蛋白1及2与现有融合蛋白(RBP
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白蛋白III及白蛋白III
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RBP)对活化的星状细胞的失活诱导效果的图。
[0030]图3为比较并确认本专利技术的融合蛋白1及2与融合蛋白3至6对活化的星状细胞的失活诱导效果的图。
[0031]图4a及图4b通过天狼星红组织染色来比较并确认向肝纤维化动物模型给药融合蛋白1及4和RBP
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白蛋白后的肝纤维化程度的图。
具体实施方式
[0032]白蛋白是一种主要在肝细胞中合成的多功能血浆蛋白。白蛋白具有三个结构域(domain)，每个结构域由两个亚结构域(subdomain)A和B组成。已知白蛋白在分子运动中发挥本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种融合蛋白，其特征在于，由序列1或2的氨基酸序列组成。2.一种融合蛋白，其特征在于，由序列3至8中任一氨基酸序列组成。3.一种多核苷酸，编码权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，上述多核苷酸由序列9至14中任一碱基序列组成。4.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求3所述的多核苷酸。5.一种转化体，其特征在于，包含权利要求4所述的重组载体。6.一种融合蛋白的生产方法，其特征在于，包括：步骤(1)，制备重组载体，上述重组载体包含用于编码由序列3至8中任一氨基酸序列组成的融合蛋白的基因；步骤(2)，通过将上述重组载体导入宿主细胞来制备转化体；步骤(3)，培养上述转化体；以及步骤(4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴埈瑞，
申请(专利权)人：希内丽思有限公司，
类型：发明
国别省市：