一种鉴定无侧枝辣椒的引物、试剂盒及方法技术

本发明专利技术涉及一种鉴定无侧枝辣椒的引物。引物包括：上游引物(5'

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定无侧枝辣椒的引物、试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及一种鉴定无侧枝辣椒的引物、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]辣椒是我国重要的经济作物，在贵州、四川、湖南、河南等地广泛种植，辣椒除了供给人们食用外还可作为观赏植物，辣椒分枝影响辣椒产量的多少，且观赏型辣椒的分枝也影响其观赏效果。同时，线椒类型的辣椒在种植栽培过程中，一般人们会对其侧枝整枝打杈，增加辣椒产量及提高辣椒品质，但整枝打杈增加人工成本，若在阴雨天整枝打杈增加辣椒病虫害的发生，使其辣椒减产，品质下降。
[0003]辣椒分枝类型主要分为有限分枝和无限分枝，对于朝天椒而言，有限分枝多为簇生型辣椒，无限分分枝多为散生型辣椒。目前关于辣椒无侧枝分枝类型研究报道较少，且独杆辣椒在市场上种子流通较少，仍作为育种家们育种过程中亲本材料的选择，或者作为科研实验材料。
[0004]针对辣椒无侧枝基因相关的分子标记进行开发和利用，将为无侧枝辣椒新品种分子辅助育种提供帮助，可以促使缩短无侧枝辣椒育种周期，加快无侧枝辣椒品种选育。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为解决现有技术的不足，提供了一种鉴定无侧枝辣椒的引物，所述引物包括：
[0006]上游引物(5'
‑
3'):TGTAAAACGACGGCCAGTACATGCCCTCTGACTGCTCT；
[0007]下游引物(5'
‑
3'):AGCTGCTCCAGAACCAAAAA。
[0008]一种鉴定无侧枝辣椒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物。
[0009]所述引物浓度为5～15μM。
[0010]所述试剂盒还包括缓冲液、Taq酶和ddH2O。
[0011]一种鉴定无侧枝辣椒的方法，其特征在于，所述方法包括：
[0012]使用权利要求1所述的引物和所述的鉴定无侧枝辣椒的试剂盒，对待测模板进行扩增，再进行分析。
[0013]所述扩增前还包括提取待测模板的步骤；所述待测模板包括待测辣椒的基因组DNA。
[0014]所述扩增的程序包括：
[0015]95℃，1min；
[0016]95℃，30s；60℃，30s；72℃，30s；循环35次；
[0017]95℃，30s；53℃，30s；72℃，30s；循环10次；
[0018]60℃，30min；
[0019]15℃，无限制循环，直到从PCR仪器中取出。
[0020]一种鉴定无侧枝辣椒的方法，包括以下步骤：
[0021](1)提取待测辣椒植株的基因组DNA，作为待测模板；
[0022](2)使用权利要求1所述的引物和鉴定无侧枝辣椒的试剂盒，对待测模板进行扩增，所述扩增的程序包括：
[0023]95℃，1min；
[0024]95℃，30s；60℃，30s；72℃，30s；循环35次；
[0025]95℃，30s；53℃，30s；72℃，30s；循环10次；
[0026]60℃，30min；
[0027]15℃，无限制循环，直到从PCR仪器中取出。
[0028](3)分析：根据扩增产物的大小进行判断。
[0029]提取待测辣椒植株的基因组DNA包括以下具体步骤：
[0030](1)取植物新鲜组织100mg或干重组织20mg，加入液氮充分碾磨；加入400μl缓冲液FP1和6μl的RNase A，旋涡振荡1min，室温放置10min；
[0031](2)加入130μl缓冲液FP2，充分混匀，涡旋振荡1min；
[0032](3)12,000rpm离心5min，将上清转移至新的离心管中；
[0033](4)将上清液再次12,000rpm离心5min，将上清转移至新的离心管中；
[0034](5)向上清液中加入0.7倍体积的异丙醇，充分混匀，此时会出现絮状基因组DNA12,000rpm离心2min，弃上清，保留沉淀；
[0035](6)加入600μl 70％乙醇，涡旋振荡5sec，12,000rpm离心2min，弃上清；
[0036](7)重复步骤6；
[0037](8)开盖倒置，室温5
‑
10min，彻底晾干残余的乙醇；
[0038](9)加入适量洗脱缓冲液TE，65℃水浴10
‑
60min溶解DNA，其间颠倒混匀数次助溶，最终得到DNA溶液。
[0039]本专利技术的有益效果：
[0040]独杆辣椒和簇生朝天椒杂交，利用F2代材料进行BSA
‑
seq分析，筛出独杆辣椒分子标记引物一对，该引物在独杆辣椒扩增出261bp的条带，在簇生朝天椒中没有条带，可对无侧枝分枝的辣椒和分枝辣椒在种子或苗期进行分子标记鉴定，节约在辣椒选育过程中人力和物力，缩短育种时间，提高育种中共关于有无分枝的准确性和效率。
[0041]参考以下详细说明更易于理解本申请的上述以及其他特征、方面和优点。
附图说明
[0042]通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本专利技术的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
[0043]图1为本专利引物在独杆辣椒中毛细管电泳情况。
[0044]图2为本专利引物在簇生朝天椒分枝辣椒中毛细管电泳情况。
[0045]图3为辣椒分枝性状照片，左为分枝辣椒，右为独杆辣椒。
具体实施方式
[0046]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例
的附图，对本专利技术实施例的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于所描述的本专利技术的实施例，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0047]除非另作定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本专利技术所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本专利技术专利申请说明书以及权利要求书中使用的“第一”、“第二”以及类似的词语并不表示任何顺序、数量或者重要性，而只是用来区分不同的组成部分。同样，“一个”或者“一”等类似词语也不表示数量限制，而是表示存在至少一个。
[0048]一种鉴定无侧枝辣椒的引物，所述引物包括：
[0049]上游引物(5'
‑
3'):TGTAAAACGACGGCCAGTACATGCCCTCTGACTGCTCT；
[0050]下游引物(5'
‑
3'):AGCTGCTCCAGAACCAAAAA。
[0051]一种鉴定无侧枝辣椒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物。
[0052]所述引物浓度为5～15μM。
[0053]所述试剂盒还包括缓冲液、Taq酶和ddH2O。
[0054]一种鉴定无侧枝辣椒的方法，包括以下步骤：
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定无侧枝辣椒的引物，其特征在于，所述引物包括：上游引物(5'
‑
3'):TGTAAAACGACGGCCAGTACATGCCCTCTGACTGCTCT；下游引物(5'
‑
3'):AGCTGCTCCAGAACCAAAAA。2.一种鉴定无侧枝辣椒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物。3.根据权利要求2所述的一种鉴定无侧枝辣椒的试剂盒，其特征在于，所述引物浓度为5～15μM。4.根据权利要求2所述的一种鉴定无侧枝辣椒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括缓冲液、Taq酶和ddH2O。5.一种鉴定无侧枝辣椒的方法，其特征在于，所述方法包括：使用权利要求1所述的引物和权利要求2
‑
4中任意一项权利要求所述的鉴定无侧枝辣椒的试剂盒，对待测模板进行扩增，再进行分析。6.根据权利要求5所述的一种鉴定无侧枝辣椒的方法，其特征在于，所述扩增前还包括提取待测模板的步骤：所述待测模板包括待测辣椒的基因组DNA。7.根据权利要求5所述的一种鉴定无侧枝辣椒的方法，其特征在于，所述扩增的程序包括：95℃，1min；95℃，30s；60℃，30s；72℃，30s；循环35次；95℃，30s；53℃，30s；72℃，30s；循环10次；60℃，30min；15℃，无限制循环，直到从PCR仪器中取出。8.根据权利要求5所述的一种鉴定无侧枝辣椒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)、提取待测辣椒植株的基因组DNA，作为待测模板；(2)、使用权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋拉拉，胡明文，朱文超，苏丹，王希，廖芳芳，白立伟，金学欢，张锦阁，彭泽，
申请(专利权)人：贵州省蚕业研究所贵州省辣椒研究所，
类型：发明
国别省市：