一种与玉米穗上叶片数紧密连锁的InDel引物组及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴别玉米穗上叶片数的分子标记以及利用其培育穗上多叶玉米的方法。通过选用自主选育的穗上多叶玉米与常规品种杂交，利用本发明专利技术提供的与穗上多叶紧密连锁的分子标记进行后代叶片数的快速选择，可显著缩短育种年限，节省育种成本；同时该方法可拓宽多叶种质资源，对培育多叶玉米新品种提供了重要的技术支持。要的技术支持。要的技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种与玉米穗上叶片数紧密连锁的InDel引物组及其应用


[0001]本专利技术属于分子标记辅助玉米育种
，具体涉及到一种与玉米穗上叶片数紧密连锁的InDel引物组及其应用。

技术介绍

[0002]叶片是玉米主要的光合器官，叶片数目、形态及空间分布对玉米株型及产量具有重要影响。根据叶片与最上部雌穗着生位置的相对关系，可将玉米叶片分为穗上叶片和穗下叶片。穗上叶片的光合产物是籽粒灌浆所需物质的主要来源，当去除穗上叶片后籽粒干物质积累减少84％
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94％。普通玉米的穗上叶片只有5
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6张，而多叶型玉米穗上叶可达7
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25张，但二者的穂下叶片数相差不大。与普通型玉米相比，多叶型玉米的叶面积指数显著增加，叶片保持良好受光姿态，高效捕获光能，合成更多的光合产物，在同等种植密度下产量潜力高于相同熟期的普通玉米。适当增加玉米穗上叶片数不仅可有效高光能利用率，增大干物质积累的库，促进干物质积累；还可以有效降低雌穗高度与叶夹角，优化玉米株型结构，提高抗倒伏能力和耐密性。
[0003]玉米穗上叶片数是典型的数量性状，受多位点的共同调控。近年来，国内外多个研究小组利用不同的遗传群体，在不同的环境条件下，检测到大量玉米穗上叶片数相关位点(Du,X.M.,Linghu,J.J.,Shang,H.J.,Reid,L.M.,Zhu,X.Y.,Wang,J.H.,and Wang,G.Y.(2015).Fine mapping of Leafy,a dominant mutant conferring extra leaves above the ear in maize.Euphytica 206,49
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56.Li,D.,Wang,X.F.,Zhang,X.B.,Chen,Q.Y.,Xu,G.H.,Xu,D.Y.,Wang,C.L.,Liang,Y.M.,Wu,L.S.,Huang,C.,et al.(2016).The genetic architecture of leaf number and its genetic relationship to floweringtime in maize.New Phytol 210,256
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25。)。然而，玉米穗上叶片数的研究大多局限于初定位的水平，置信区间较大，内含几十甚至上百个候选基因，QTL的精细定位和基因克隆工作相对滞后，难以在实际的分子设计育种中应用。

技术实现思路

[0004]本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施
例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。
[0005]鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本专利技术。
[0006]因此，本专利技术的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种与玉米穗上叶片数紧密连锁的InDel引物组。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：两组与玉米穗上叶片数相关的InDel引物组，其特征在于：所述分子标记位于玉米的三号染色体上，命名为HF1和HF6。
[0008]本专利技术的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供一种用于检测玉米穗上叶片数的HF1和HF6标记的引物。
[0009]本专利技术的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供一种HF1和HF6分子标记的筛选方法。
[0010]为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：所述筛选方法包括利用自主选育的多叶自交系Y915和普通玉米自交系郑58构建F2和F2:3群体；
[0011]采用玉米55K SNP芯片对群体基因型进行检测，结合多年多点的表型鉴定结果开展穗上叶片数的QTL定位；
[0012]对稳定存在的主效位点，利用定位区间两端的分子标记筛选交换单株；
[0013]结合玉米重测序的结果，在初定位区间开发新的分子标记标记，并使用标记对交换单株及其自交后代进行基因型鉴定；
[0014]整合交换单株及其后代的表型数据和基因型数据，缩小定位区间。从本实验室自主构建的穗上多叶材料Y915的BAC文库中筛选覆盖整个定位区间的克隆并测序；
[0015]根据BAC测序结果及参考基因组的序列差异，在其插入缺失片段及共有片段的交界处设计组合引物FH1和FH6。
[0016]本专利技术的再一个目的是，解决现有技术中的不足，提供一种引物组在检测玉米穗上叶片数及选育穗上多叶玉米中的应用。
[0017]作为本专利技术所述的引物组应用的优选方案，其中：所述利用FH1和FH6引物组配制PCR检测体系对待测玉米品系DNA进行PCR扩增，同时以Y915作为对照，然后利用琼脂糖凝胶电泳对样品及对照玉米的PCR扩增产物并进行基因分型；含有与Y915型等位变异的样品的穗上叶片数显著高于其它样品。
[0018]本专利技术有益效果：
[0019]本专利技术提供了两组与穗上叶片紧密连锁的InDel引物组，可在种子及幼苗阶段提前通过分子标记检测后代植株的叶片数，可大大节省育种成本，加快育种进程；两标记可通过简单的琼脂糖凝胶电泳进行基因分型，表型稳定，检测简单，不需酶切测序或芯片等操作，对仪器设备的要求较低；本专利技术的标记与控制穗上叶片数的基因紧密连锁，对后期的基因克隆和功能验证具有重要作用。
附图说明
[0020]为了更清楚地本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与玉米穗上叶片数紧密连锁的InDel引物组，其特征在于：所述引物组的两组分子标记位于玉米的三号染色体上，命名为HF1和HF6。2.两组用于检测如权利要求1所述的HF1和HF6标记的引物，其特征在于，包括HF1的引物对：正向引物5'
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TGCGAAGGGATGGAGAGC
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3'，反向引物a 5'
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CCAGCAGTCCAGCTCTTG
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3',反向引物b 5'
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TGCGTGCTCACGACGTCGACT
–
3'HF6的引物对：正向引物a 5'
–
CAGTCTCCACCTAGCTGT
–
3'，正向引物b 5'
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TACTGCAAGCGCACCTGACC
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3'，反向引物5'
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TCGACATCGACTCTAGAC
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3'。3.一种如权利要求1所述的HF1和HF6分子标记的筛选方法，其特征在于，包括：利用自主选育的多叶...

【专利技术属性】
技术研发人员：印志同，刘欢欢，邓德祥，何永辉，阚欣，崔敏，李志鹏，王瑞泽，叶仕玉，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：