一种反刍动物用裂壶藻粉的质量评价和控制方法技术

本发明专利技术公开了一种反刍动物用裂壶藻粉的质量评价和控制方法。本方法通过仿生酶消化破壁试验获得过瘤胃裂壶藻粉在体外的破壁、释放过程，并与裂壶藻粉在体内的消化过程和对牛奶中DHA含量的影响建立相关性，从而制定过瘤胃裂壶藻粉在体外的破壁率限度为：在模拟瘤胃液中，24小时内的破壁率低于25％，且在模拟瘤胃液24小时后调整消化液PH至1.4，加入胃蛋白酶，2小时内的释放度大于85％。以本发明专利技术的破壁率限度为质量标准，可通过对过瘤胃裂壶藻粉的产品体外破壁率的评价，进而控制过瘤胃裂壶藻粉生产的产品质量，保证不同生产批次产品的体内过程的一致性。过程的一致性。

【技术实现步骤摘要】
一种反刍动物用裂壶藻粉的质量评价和控制方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种反刍动物用裂壶藻粉的质量评价和控制方法。

技术介绍

[0002]裂壶藻粉是一种单一饲料，含丰富DHA、蛋白质等多种营养物质。DHA是碳链最长、不饱和度最高的Omega3长链多不饱和脂肪酸，具有降低血脂，防治心血管疾病、改善繁殖性能、抗炎等作用。牛、羊等反刍动物是乳制品的主要来源，具有特殊的消化道结构及消化生理，其瘤胃含有多种瘤胃微生物，可将饲料中的蛋白质、能量、功能性多不饱和脂肪酸转化为微生物蛋白和挥发性脂肪酸。因此直接饲喂DHA产品给奶牛，DHA在瘤胃中会被氢化成饱和脂肪，无法富集到牛奶中。因此在反刍日粮中添加裂壶藻粉要求裂壶藻粉随食物在瘤胃滞留时间内尽可能不释放DHA，并在真胃及小肠前段完全释放，以提高DHA在牛奶中的转化效率。
[0003]反刍动物饲料瘤胃消化率评估一般采用体内法、半体内法和体外法，这些方法需要实验动物，存在实验动物差异和生理状态导致的结果差异问题，对企业生产质量评估不利。酶解法具有易标准化、重复力高、操作方便、不用实验动物等优点。通过模拟饲料在反刍动物胃肠道消化试验，可从一定程度上反映饲料生物利用度等差异。目前尚无对反刍动物过瘤胃裂壶藻粉的质量评价控制方法，也无法保证裂壶藻粉的体内释放、吸收过程。研究表明反刍动物瘤胃pH在6.8左右，真胃pH在1
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2左右。因此，有必要通过裂壶藻粉体外破壁率与体内相关性，制定一种合适的体外破壁限度，以满足过瘤胃裂壶藻粉在模拟瘤胃环境(pH 6.8)中尽可能不释放，在模拟真胃环境(pH1.4)中完全释放，以尽可能减少裂壶藻粉被瘤胃菌群分解，尽可能多的吸收进入体内转化入奶，保证过瘤胃裂壶藻粉在反刍动物的体内过程，为过瘤胃裂壶藻粉生产和质量评价提供依据。
[0004]目前常规的反刍动物饲料评估方法有体外尼龙袋法、体外模拟瘤胃法。专利CN 113008822 A公开了一种反刍动物瘤胃液中丙酮酸肌酸降解率的测定方法，该方法预热发酵瓶至39℃，取瘘管牛晨饲前的瘤胃液，配制前置溶液，配制瘤胃缓冲液，配制微生物混合培养液，均需采用供体动物提供瘤胃液，但是存在供体牛饲喂方式、瘤胃液收集时间不一的问题、瘤胃液保存不当、瘤胃液中瘤胃微生物差异等情况使对饲料进行的模拟消化结果不一。专利CN 113288875 A公开了一种反刍动物用金霉素过瘤胃颗粒的质量评价与控制方法，该方法通过溶出试验获得金霉素过瘤胃颗粒药物在体外的崩解、释放过程，并与药物在体内的吸收过程和对瘤胃菌群的影响建立相关性，从而制定药物在体外的溶出限度。未涉及动物体胃肠道酶的消化影响，溶出结果采用液相色谱检测目标物的含量费时费力。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是如何检测和/或控制过瘤胃裂壶藻粉的质量。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了鉴定或辅助鉴定用于制备反刍动物饲
料的过瘤胃裂壶藻粉质量的方法。所述方法包括将待测过瘤胃裂壶藻粉在模拟瘤胃液1中消化24小时，得到名称为消化液1的消化液，检测所述消化液1的破壁率，将该破壁率命名为破壁率A1；将所述待测过瘤胃裂壶藻粉先在模拟瘤胃液2中消化24小时再在模拟真胃液中消化2h得到名称为消化液2的消化液，检测所述消化液2的破壁率，将该破壁率命名为破壁率A2，根据所述破壁率A1和所述破壁率A2鉴定或辅助鉴定用于制备反刍动物饲料的过瘤胃裂壶藻粉质量：所述破壁率A1低于30％且所述破壁率A2大于80％的过瘤胃裂壶藻粉质量好于或候选好于其他破壁率的过瘤胃裂壶藻粉。所述模拟瘤胃液1可为以pH6.5～7.0的磷酸盐缓冲液和消化酶为原料配制而成的液体。所述模拟瘤胃液可为以所述磷酸盐缓冲液和复合酶为原料配制而成的液体。所述模拟真胃液可为以pH1.0～1.5的盐酸
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可溶性盐溶液和胃蛋白酶为原料配制而成的液体。
[0007]所述质量可体现为用过瘤胃裂壶藻粉饲喂的反刍动物所产乳中的DHA含量。所述过瘤胃裂壶藻粉可为反刍动物用裂壶藻粉。
[0008]上述方法中，所述破壁率可为所述消化液中的油脂与用于制备所述消化液的所述待测过瘤胃裂壶藻粉的油脂的质量比值。
[0009]上述方法中，所述破壁率可按照检测过瘤胃裂壶藻粉破壁率的方法获得。所述破壁率的检测方法可包括：向所述消化液中加入溶剂，摇匀1min,静置收集上清液，记录上清液体积V，吸取20ml所述上清液放入质量为M1的称量瓶中，待溶剂挥发干后，烘干至恒重，称重记录M2，通过式I计算获得所述破壁率，所述式I为：
[0010]p＝((M2
‑
M1)
×
v
×
100/20/M)
×
100/Z
ꢀꢀꢀ
式I
[0011]式1中，P为破壁率；M为待测过瘤胃裂壶藻粉质量，单位为g；V为上清液体积，单位为mL；M2
‑
M1为20mL上清液中油脂的质量，单位为g，Z为待测过瘤胃裂壶藻粉的油脂质量,单位为g/mL；
[0012]所述溶剂可为由石油醚和乙醚按照1:1的体积比混合得到的液体。
[0013]上述方法中，所述磷酸盐缓冲液的组成可为：20g/L磷酸二氢钠、38g/L磷酸氢二钠、10g/L柠檬酸、10g/L KH2PO4、0.5g/L MgSO47H2O、0.5g/L NaCl、0.5g/L CaCl2.H2O、0.5g/L尿素、15.0g/L Na2CO3、1g/L Na2S.9H2O、4.0g/L NH4HCO3、35g/L NaHCO3，其余为水。
[0014]所述盐酸
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可溶性盐溶液的组成可为：0.2mol/L氯化钾和0.2mol/L盐酸，其余为水。
[0015]上述方法中，所述消化酶可为纤维素酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、淀粉酶和/或脂肪酶。所述复合酶可包括中性蛋白酶、纤维素酶和脂肪酶。
[0016]所述消化酶还可为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、羧甲基纤维素酶、纤维素酶。
[0017]为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了制备反刍动物饲料的方法。所述方法可包括按照上文所述的方法鉴定或辅助鉴定用于制备反刍动物饲料的过瘤胃裂壶藻粉的质量，选择所述破壁率A1低于30％且所述破壁率A2大于80％的过瘤胃裂壶藻粉制备所述反刍动物饲料。
[0018]上述方法中，所述低于30％可为低于25％。所述大于80％可为大于85％。
[0019]上述所述的方法在制备反刍动物饲料中的应用也属于本专利技术的保护范围。
[0020]为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了检测过瘤胃裂壶藻粉破壁率的方法。所
述方法可包括将待测过瘤胃裂壶藻粉和模拟胃液进行模拟消化得到消化液，对消化液进行油脂提取，得到所述消化液中的油脂与用于制备所述消化液的所述待测过瘤胃裂壶藻粉的油脂的质量比值，该比值即为过瘤胃裂壶藻粉的破壁率。所述模拟胃液可为上文所述方法中所述的模拟瘤胃液1、所述模拟瘤胃液2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鉴定或辅助鉴定用于制备反刍动物饲料的过瘤胃裂壶藻粉质量的方法，其特征在于：所述方法包括将待测过瘤胃裂壶藻粉在模拟瘤胃液1中消化24小时，得到名称为消化液1的消化液，检测所述消化液1的破壁率，将该破壁率命名为破壁率A1；将所述待测过瘤胃裂壶藻粉先在模拟瘤胃液2中消化24小时再在模拟真胃液中消化2h得到名称为消化液2的消化液，检测所述消化液2的破壁率，将该破壁率命名为破壁率A2，根据所述破壁率A1和所述破壁率A2鉴定或辅助鉴定用于制备反刍动物饲料的过瘤胃裂壶藻粉质量：所述破壁率A1低于30％且所述破壁率A2大于80％的过瘤胃裂壶藻粉质量好于或候选好于其他破壁率的过瘤胃裂壶藻粉；所述模拟瘤胃液1是以pH6.5～7.0的磷酸盐缓冲液和消化酶为原料配制而成的液体；所述模拟瘤胃液是以所述磷酸盐缓冲液和复合酶为原料配制而成的液体；所述模拟真胃液是以pH1.0～1.5的盐酸
‑
可溶性盐溶液和胃蛋白酶为原料配制而成的液体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述破壁率为所述消化液中的油脂与用于制备所述消化液的所述待测过瘤胃裂壶藻粉的油脂的质量比值。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的组成为：20g/L磷酸二氢钠、38g/L磷酸氢二钠、10g/L柠檬酸、10g/L KH2PO4、0.5g/L MgSO47H2O、0.5g/L NaCl、0.5g/L CaCl2.H2O、0.5g/L尿素、15.0g/L Na2CO3、1g/L Na2S.9H2O、4.0g/L NH4HCO3、35g/L NaHCO3，其余为水；所述盐酸
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可溶性盐溶液的组成为：0.2mol/L氯化钾和0.2mol/L盐酸，其余为水。4.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：所述消化酶为纤维素酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、淀粉酶和/或脂肪酶；所述复合酶包括中性蛋白酶、纤维素酶和脂肪酶。5.制备反刍动物饲料的方法，其特征在于：所述方法包括按照权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：陈礼毅，钟惠昌，陈水荣，
申请(专利权)人：厦门汇盛生物有限公司，
类型：发明
国别省市：