哺乳动物乳及乳制品中磷脂的提取及检测方法技术

本发明专利技术涉及乳制品领域，具体涉及哺乳动物乳及乳制品中磷脂的提取及检测方法。所述提取方法包括：取哺乳动物乳或乳制品的干物质，与分散剂、抗氧化剂和提取试剂混合，而后在50

【技术实现步骤摘要】
哺乳动物乳及乳制品中磷脂的提取及检测方法


[0001]本专利技术涉及乳制品领域，具体涉及哺乳动物乳及乳制品中磷脂的提取及检测方法。

技术介绍

[0002]极性脂质是乳脂肪球膜中的主要成分，其主要由磷脂酰胆碱(phosphatidylcholines，PC)，磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)，磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol，PI)，磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)和鞘磷脂(sphingomyelin，SM)组成。磷脂是构成生物膜的重要物质，也是生命的基础物质之一，与细胞的识别、种特异性和组织免疫功能等有着密不可分的联系，同时磷脂还是食品的重要营养成分和风味前体物质。此外，还有研究表明，磷脂具有提高记忆、调节血脂、提高免疫力、抗衰老等功能。因此，对哺乳动物乳或乳制品中磷脂的探究具有重要意义。
[0003]为了分析哺乳动物乳或乳制品中的磷脂成分，有必要选择适当的磷脂提取方法，以防止其中某些成分的损失。已有的乳脂提取法有石油醚
‑
乙醚溶剂提取法，如“酸水解—索氏分析系统测定乳制品中总脂肪研究应用”(胡培勤，张春和，叶敏，《微量元素与健康研究》2008年第二期)公开了一种用FOSS的酸水解—索氏总脂肪分析系统对液体乳制品中总脂肪的测定方法，使用酸水解，然后用石油醚和乙醇混合溶剂提取脂肪。该方法提供了令人满意的中性脂质提取结果，但并未提及对哺乳动物乳或乳制品中磷脂成分的提取。此外，常用的磷脂提取法为氯仿
‑r/>甲醇溶剂提取法，该方法的缺陷在于，将其应用于哺乳动物乳或乳制品时提取效果不佳，磷脂提取率仍然存在进一步改进空间。同时，使用该方法时样品处理时间长、有机溶剂易挥发，实验人员接触有害健康，提取效率不高。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术研究并提供了哺乳动物乳及乳制品中磷脂的提取及检测方法。
[0005]具体而言，本专利技术首先提供了一种哺乳动物乳及乳制品中磷脂的提取方法，其包括：
[0006]取哺乳动物乳或乳制品的干物质，与分散剂、抗氧化剂和提取试剂混合，而后在50
‑
100℃、8
‑
10Mpa下提取；
[0007]所述提取试剂选自氯仿、正己烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇中的一种或几种。
[0008]本专利技术发现，通过上述方法，可以在不破坏磷脂成分的同时，从动物乳或乳制品中高效提取出磷脂。
[0009]作为优选，所述提取试剂至少含有氯仿、二氯甲烷、正己烷中的一种或几种，可以保证对包括PC、PE、PI、PS和SM在内的磷脂物质的提取效果均达到更优。
[0010]更优选地，所述提取试剂含有氯仿和二氯甲烷中的一种或两种，且其在提取试剂中的体积含量为60％
‑
75％时，对各磷脂物质的提取效果更优。
[0011]作为优选，所述提取试剂与所述干物质的质量比为3
‑
10：1。
[0012]作为优选，当所述分散剂选自硅藻土、海沙中的一种或两种时，提取效果更优。
[0013]更优选地，所述分散剂与所述干物质的质量比为1.5
‑
3：1。
[0014]作为优选，当所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯和/或丁基羟基茴香醚时，更有利于对磷脂成分的保护，且不会影响其提取和后续的检测。
[0015]更优选地，以提取溶液的质量为基准，所述抗氧化剂的添加量为0.01
‑
0.05％。
[0016]优选地，在60
‑
100℃、8
‑
10Mpa下提取。
[0017]优选地，所述硅藻土与所述干物质的质量比为2：1。
[0018]优选地，提取时间为5
‑
15min。
[0019]优选地，对哺乳动物乳或乳制品进行两次以上提取。
[0020]作为优选，所述提取方法还包括：
[0021]在所述提取结束后，在真空条件下蒸发除去所得液体中的溶剂，得到磷脂提取物。
[0022]从哺乳动物乳或乳制品中获得干物质的方法可以为冷冻干燥，在不破坏磷脂成分的前提下，本领域人员可以采用其他的获得方式，在此不做特别限定。
[0023]为了避免对磷脂成分的破坏，在提取得到磷脂后，应将其在
‑
18℃以下的避光条件下进行保存。
[0024]本领域人员可依照常规理解，对上述的优选方案进行组合，得到关于本专利技术提取方法的较佳实施例。
[0025]作为一种优选的实施方案，所述的哺乳动物乳及乳制品中磷脂的提取方法如下：
[0026]将哺乳动物乳或乳制品冷冻干燥得到其干物质，按质量比1：1.5
‑
3称取所述干物质与分散剂，混合后装入萃取池中，按照1：3
‑
10的料液比添加提取试剂，而后添加溶液质量的0.01
‑
0.05％的抗氧化剂，盖上金属盖子并拧紧，将样品萃取池放入仪器内。设置温度为50
‑
100℃，压力为8
‑
10Mpa，静态循环1
‑
4次(更优选为2次)，提取时间为5
‑
15min。而后将合并的提取物溶液在真空旋转蒸发仪蒸发，称量脂质提取物并储存在琥珀色的小瓶中，保存在
‑
18℃下直至进行后续应用(如色谱分析)。
[0027]本专利技术进一步提供一种哺乳动物乳及乳制品中磷脂的检测方法，其包括：使用前述的提取方法从待测样品中分离得到磷脂提取物后，对其进行检测。
[0028]作为优选，通过HPLC(High Performance Liquid Chromatography，高效液相色谱法)进行所述检测，其中，
[0029]色谱柱为正相硅胶色谱柱；
[0030]采用两元梯度洗脱，流动相A为体积比为75
‑
90
‑
：10
‑
25：0.2
‑
0.8：0.05
‑
0.1的甲醇、水、冰醋酸和三乙胺的混合物；流动相B为体积比为15
‑
25：40
‑
55：25
‑
35的正己烷、异丙醇和流动相A的混合物；
[0031]流速为1mL/min；
[0032]柱温为30
‑
40℃；
[0033]梯度洗脱程度如下表1所示：
[0034]表1
[0035][0036]在一个优选的实施方式中，流动相A为体积比为85：15：0.2
‑
0.8：0.05
‑
0.1的甲醇、水、冰醋酸和三乙胺的混合物；流动相B为体积比为20：48：32的正己烷、异丙醇和流动相A的混合物。
[0037]作为优选，在所述HPLC中，检测器为蒸发光散射检测器(ELSD)，以空气作为雾化气，气体压强300本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种哺乳动物乳及乳制品中磷脂的提取方法，其特征在于，包括：取哺乳动物乳或乳制品的干物质，与分散剂、抗氧化剂和提取试剂混合，而后在50
‑
100℃、8
‑
10Mpa下提取；其中，所述提取试剂选自氯仿、正己烷、乙酸乙酯、甲醇、乙醇中的一种或几种。2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述提取试剂至少含有氯仿、二氯甲烷、正己烷中的一种或几种；优选所述提取试剂至少含有氯仿、二氯甲烷中的一种或两种，且其在提取试剂中的体积含量为60％
‑
75％。3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述提取试剂与所述干物质的质量比为3
‑
10：1。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的提取方法，其特征在于，所述分散剂选自硅藻土、海沙中的一种或两种；优选所述分散剂与所述干物质的质量比为1.5
‑
3：1。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的提取方法，其特征在于，所述抗氧化剂为二丁基羟基甲苯和/或丁基羟基茴香醚；优选以提取溶液的质量为基准，所述抗氧化剂的添加量为0.01
‑
0.05％。6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述提取方法还包括：在所述提取结束后，在真空条件下蒸发除去所得液体中的溶剂，得到磷脂提取物。7.一种哺乳动物乳及乳制品中磷脂的...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹文慧，母智深，李洪亮，高增丽，乌云，杨畅，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：