同时测定多种真菌毒素的方法及其应用技术

本发明专利技术的同时测定多种真菌毒素的方法及其应用，利用QuEChERS法构建粮油作物、果品2类食品基质中真菌毒素的净化体系，包括前处理、净化剂的选择和用量优化、及流动相的酸碱度对净化剂的影响、提取剂的酸度优化，以确保待测真菌毒素的高加标回收率；结合UPLC

【技术实现步骤摘要】
同时测定多种真菌毒素的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种同时测定多种真菌毒素的方法，具体涉及同时测定多种真菌毒素的方法及其应用，属于食品安全


技术介绍

[0002]目前，食品中检出率较高的真菌毒素主要由曲霉菌属(Aspergillus)、青霉菌属(Penicillium)以及镰刀菌属(Fusarium)等菌属产生，包括黄曲霉毒素 (Aflatoxin,AFT)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)、伏马菌素(Fumonisin, FB)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)等。
[0003]常见的真菌毒素类别及其产毒菌属和污染的主要食品有：
[0004][0005]食品中的真菌毒素通常以痕量存在于复杂的、大量的基质成分中，为保证分析结果的灵敏度、准确度和精密度，必须进行样品前处理以净化基质、富集目标物。
[0006]由于各种真菌毒素化学结构不同、物理性质各异，且在实际样品中含量水平相差较大，现有的测定技术中，精准度较高的为对单一种类的真菌毒素的检测，而采用一种方法同时测定多种真菌毒素，则存在对个别种类的真菌毒素的检测精准度不高的缺陷。
[0007]因此为了同时检测食品中的多种类真菌毒素，亟需研发同时高效提取多种类真菌毒素的前处理技术。

技术实现思路

[0008]为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种同时测定多种真菌毒素的方法及其应用。
[0009]为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
[0010]一种同时测定多种真菌毒素的方法，包括以下步骤：
[0011]S1、称取一定质量粉碎的空白样品于离心管中，加入混合标准母液和提取液，震荡后离心取上清液；
[0012]S2、使用液相色谱串联质谱系统，以GCB、C18、PSA为净化剂，采用正负离子切换扫描模式，对上清液进行检测，得到检测结果；
[0013]所述真菌毒素包括DON、ZEN、FB1、OTA、AFB1、AFB2、AFG1和AFG2；
[0014]所述混合标准母液采用84％的乙腈水溶液与标准真菌毒素配置，所述标准真菌毒素包括DON、ZEN、FB1、OTA、AFB1、AFB2、AFG1和AFG2，其浓度分别为250、250、125、50、20、20、20和20μg/L
；
[0015]所述提取液为含一定浓度甲酸的乙腈水溶液；
[0016]所述检测的色谱条件为：在正离子扫描模式下采用乙腈和0.1％甲酸+5mM 乙酸铵为酸性流动相，在负离子扫描模式下采用乙腈和万分之一氨水+5mM乙酸铵为碱性流动相。
[0017]上述提取液为含质量浓度0.5％甲酸的84％乙腈水溶液；空白样品为5
‑
20g。
[0018]上述的方法，还包括优化的净化剂：
[0019]碱性流动相条件下：GCB适合对DON的净化，C18和PSA适合对DON、OTA、 ZEN、FTB1、FTB2、AFG1和AFG2的净化；
[0020]酸性流动相条件下，GCB适合对FB1的净化，PSA适合对OTA、ZEN、FTB1、 FTB2、AFG1和AFG2的净化，C18适合对OTA、ZEN、FTB1、FTB2、AFG1和AFG2 的净化。
[0021]上述的方法，还包括优化的质谱条件：
[0022][0023]上述的方法，还包括对DON、ZEN、FB1、OTA、AFB1、AFB2、AFG1和AFG2 的定量测定：
[0024]稀释混合标准母液作为混合标准工作液，以待测物的质量浓度(X，μg/L)为横坐标，定量离子的峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得出如下表的检出限和定量限：
[0025]碱性流动相条件
[0026]真菌毒素范围(μg/L)线性方程R检出限(μg/L)定量限(μg/L)AFB10.15
‑
20Y＝6844.17x+291.730.99190.040.1AFB20.15
‑
20Y＝5998.30x+757.880.99870.020.08AFG10.15
‑
20Y＝4395.49x+122.070.99850.040.15AFG20.15
‑
20Y＝4051.14x+1008.080.99450.060.20OTA0.39
‑
50Y＝1984.69x+624.210.99740.090.29DON0.97
‑
250Y＝303.39x+1329.790.99120.080.27ZEN0.97
‑
250Y＝1318.78x+7307.230.99450.010.03
[0027]酸性流动相条件
[0028]真菌毒素范围(μg/L)线性方程R检出限(μg/L)定量限(μg/L)AFB10.15
‑
20Y＝8897.69x+320.410.99910.060.22AFB20.15
‑
20Y＝5498.30x+1658.880.99850.060.20AFG10.15
‑
20Y＝4115.96x+693.210.98300.120.40AFG20.15
‑
20Y＝2534.45x+248.430.99830.170.58FB10.48
‑
125Y＝273.82x+173.410.99950.080.26OTA0.39
‑
50Y＝2506.90x+6817.500.99500.050.17ZEN0.97
‑
250Y＝1042.05x+4870.120.99620.030.11
[0029]上述的方法，适用于检测粮油作物。
[0030]进一步的，述粮油作物适用的净化剂为C18，用量在(50
‑
200)mg/g
‑
粮油作物。
[0031]上述的方法，适用于检测果品。
[0032]进一步的，上述果品适用的净化剂为PSA，用量在(10
‑
50)mg/g
‑
果品。
[0033]本专利技术的有益之处在于：
[0034]本专利技术的同时测定多种真菌毒素的方法及其应用，利用QuEChERS法构建粮油作物、果品2类食品基质中真菌毒素的净化体系，包括前处理、净化剂的选择和用量优化、及流动相的酸碱度对净化剂的影响、提取剂的酸度优化，以确保待测真菌毒素的高加标回收率；结合UPLC
‑
MS/MS确定粮油作物和果品中的8 种真菌毒素的定性和定量分析方法，其中粮油作物适用C18净化，果品适用PSA 净化，加标回收率均在84％以上。
[0035]本专利技术的方法操作简单、快速、毒素种类多、适用范围广，方法学验证及实际样品检测结果表明其灵敏度高、精密度好、实用性强，可以实现8真菌毒素的有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.同时测定多种真菌毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、称取一定质量粉碎的空白样品于离心管中，加入混合标准母液和提取液，震荡后离心取上清液；S2、使用液相色谱串联质谱系统，以GCB、C18、PSA为净化剂，采用正负离子切换扫描模式，对上清液进行检测，得到检测结果；所述真菌毒素包括DON、ZEN、FB1、OTA、AFB1、AFB2、AFG1和AFG2；所述混合标准母液采用84％的乙腈水溶液与标准真菌毒素配置，所述标准真菌毒素包括DON、ZEN、FB1、OTA、AFB1、AFB2、AFG1和AFG2，其浓度分别为250、250、125、50、20、20、20和20μg/L；所述提取液为含一定浓度甲酸的乙腈水溶液；所述检测的色谱条件为：在正离子扫描模式下采用乙腈和0.1％甲酸+5mM乙酸铵为酸性流动相，在负离子扫描模式下采用乙腈和万分之一氨水+5mM乙酸铵为碱性流动相。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取液为含质量浓度0.5％甲酸的84％乙腈水溶液；空白样品为5
‑
20g。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括优化的净化剂：碱性流动相条件下：GCB适合对DON的净化，C18和PSA适合对DON、OTA、ZEN、FTB1、FTB2、AFG1和AFG2的净化；酸性流动相条件下，GCB适合对FB1的净化，PSA适合对OTA、ZEN、FTB1、FTB2、AFG1和AFG2的净化，C18适合对OTA、ZEN、FTB1、FTB2、AFG1和AFG2的净化。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括优化的质谱条件：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括对DON、ZEN、FB1、OTA、AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的定量测定：稀释混合标准母液作为混合标准工作液，以...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴琴燕，庄义庆，梁红芳，
申请(专利权)人：江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：