结球甘蓝的制造技术

本发明专利技术公开了结球甘蓝的

【技术实现步骤摘要】
结球甘蓝的KASP分子标记及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种结球甘蓝的
KASP
分子标记及其应用
。

技术介绍

[0002]结球甘蓝
(Brassica oleracea var.capitata L.)
简称甘蓝，又名卷心菜
、
包菜
、
圆白菜等，是十字花科芸薹属植物
。
结球甘蓝在产量
、
抗病性
、
抗逆性等性状上具有明显的杂种优势，其适应性广
、
容易栽培
。
结球甘蓝先天具备防外界污染生长特性
(
叶片从里面充实形成叶球，食用部分不接触
PM2.5
和农药等
)
，而且富含萝卜硫素及维生素，成为安全保健蔬菜的新宠
。
随着市场需求不断地扩大，国内育种学家也培育出了大量结球甘蓝优良品种，但是伴随着栽培面积的不断扩大，市场上同名异物及同物异名的情况时有发生，甚至一些不合格种子混入市场造成重大经济损失，因此对结球甘蓝品种进行快速准确鉴定对于假种辨别和解决产权纠纷具有重要作用
。
[0003]近年来，随着分子标记技术的迅速发展，使品种鉴定以及种子纯度鉴定进入了
DNA
水平，因其具有较高的准确性
、
稳定性和重复性，为作物品种纯度分析提供了更为准确
、
可靠的结果
。RFLP
标记在于呈现共显性，能够区分纯合型和杂合型，在基因组中应用范围广泛但其
DNA
模板量需求过大，操作过程技术难度较高，多态性的灵敏程度不高且检测时必须用到放射性元素对环境造成污染
。SSR
标记是共显性标记可鉴别纯合型和杂合型，所需的
DNA
样品量少，对
DNA
的要求不高，操作简单，可靠性强，具有大量的等位差异性，无需使用放射性同位素，但必须明确重复基序两端的
DNA
序列，如果不能直接在
DNA
数据库中查找到则需要再次进行测序，成本高
。KASP
‑
SNP
标记是由
KASP
技术转化后用于植物遗传育种的一种
SNP
标记，具有数量丰富
、
密度高
、
遗传相对稳定
、
精确性和效率更高
、
在基因组中分布范围广以及易于实行自动化
、
规模化的分析等优势
。KASP
技术是基于引物末端碱基的特异匹配来对
SNP
分型以及检测
InDels
插入和缺失，采用2个荧光探针
、2
个通用淬灭探针再加多个位点特异探针来检测多个
SNP
位点，采用全自动荧光定量
PCR
平台，读取数据，进行基因分型
。
准确性
KASP
的特异性引物片段长度通常为
24
～
26bp
，相比较一般采取8～
12bp
长度的
Taqman
探针会有更高的特异性，
SNP
的准确性也会更高
。
在进行配制
KASP
反应体系时，只需要加入非常少量的样本
DNA
，
100ng/
μ
L
的样本
DNA
在配制
10
μ
L
的反应体系时只需要加入1μ
L
，通过减少试剂的消耗进而极大的减少成本，而且反应不需要进行常规的凝胶电泳，在试验结束时就可以观察到基因的分型情况
。KASP
检测平台也可以同时检测大量位点少量样本或者少量位点大量样本等低
、
中
、
高通量研究以及单个实验
。

技术实现思路

[0004]解决的技术问题：针对上述技术问题，本专利技术提供一种结球甘蓝的
KASP
分子标记及其应用，能够实现对结球甘蓝种质资源和种子纯度快速
、
准确
、
有效地鉴定
。
[0005]技术方案：第一方面，本专利技术提供结球甘蓝的
KASP
分子标记，至少包括以下分子标
记中的一个：
A01_3506256C/T、A01_4478950G/A、A01_13487469C/T、A01_45480665C/T、A01_45480754G/A、A01_47782860G/A、A01_49602601G/A、A02_1646465 T/C、A02_2701397A/G、A02_3588799 T/C、A02_5472884 T/C、A02_6754191 T/C、A02_8170488 C/T、A02_8577597 A/G、A02_25765112 C/T、A02_27723784 A/G、A02_54382820 G/A、A02_60887873 T/C、A02_62939305 T/C、A03_658792 A/G、A03_3674009G/T、A03_7523159A/G、A03_13206072G/T、A03_23182211G/A、A03_23661296T/G、A03_26267190A/C、A03_37245547A/C、A03_39934962G/A、A03_40171446T/C、A03_56848398A/C、A03_59695342C/T、A03_70680880A/G、A03_71281875G/C、A03_73943203A/G、A03_74166647C/A、A04_13574311T/A、A04_14532614T/C、A04_14736752C/G、A04_20364491G/A、A04_41986068C/T、A04_44208668A/G、A04_51845506A/G、A04_61656529A/T、A05_77862A/C、A05_623182A/G、A05_1289306T/C、A05_1462172G/A、A05_1694631G/A、A05_2305280G/A、A05_2440106C/A、A06_3486253T/G、A06_17690070C/T、A06_42103611G/A、A06_46343090C/G、A07_6620428C/A、A07_32454643C/T、A07_41016927A/G、A07_51533735G/A、A08_7407835T/A、A08_29623285T/C、A08_33137814C/G、A08_46221340A/G、A09_10486561C/T、A09_22374163G/A、A09_54887251C/A
和
A09_63174459本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
结球甘蓝的
KASP
分子标记，其特征在于，至少包括以下分子标记中的一个：
A01_3506256 C/T、A01_4478950 G/A、A01_13487469C/T、A01_45480665C/T、A01_45480754 G/A、A01_47782860 G/A、A01_49602601 G/A、A02_1646465 T / C、A02_2701397A/G、A02_3588799 T/C、A02_5472884 T/C、A02_6754191 T/C、A02_8170488 C/T、A02_8577597 A/G、A02_25765112 C/T、A02_27723784 A/G、A02_54382820 G/A、A02_60887873 T/C、A02_62939305 T/C、A03_658792 A /G、A03_3674009G/T、A03_7523159A/G、A03_13206072G/T、A03_23182211G/A、A03_23661296T/G、A03_26267190A/C、A03_37245547A/C、A03_39934962G/A、A03_40171446T/C、A03_56848398A/C、A03_59695342C/T、A03_70680880A/G、A03_71281875G/C、A03_73943203A/G、A03_74166647C/A、A04_13574311T/A、A04_14532614T/C、A04_14736752C/G、A04_20364491G/A、A04_41986068C/T、A04_44208668A/G、A04_51845506A/G、A04_61656529A/T、A05_77862A/C、A05_623182A/G、A05_1289306T/C、A05_1462172G/A、A05_1694631G/A、A05_2305280G/A、A05_2440106C/A、A06_3486253T/G、A06_17690070C/T、A06_42103611G/A、A06_46343090C/G、A07_6620428C/A、A07_32454643C/T、A07_41016927A/G、A07_51533735G/A、A08_7407835T/A、A08_29623285T/C、A08_33137814C/G、A08_46221340A/G、A09_10486561C/T、A09_22374163G/A、A09_54887251C/A
和
A09_63174459G/T。2.
一种用于检测权利要求1所述的结球甘蓝的
KASP
分子标记的引物对，其特征在于，至少包括一下引物对中的一个：所述
A01_3506256 C/T
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.1
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.2
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.3
所示；所述
A01_4478950 G/A
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.4
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.5
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.6
所示；所述
A01_13487469C/T
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.7
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.8
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.9
所示；所述
A01_45480665C/T
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.10
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.11
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.12
所示；所述
A01_45480754 G/A
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.13
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.14
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.15
所示；所述
A01_47782860G/A
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.16
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.17
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.18
所示；所述
A01_49602601 G/A
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.19
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.20
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.21
所示；所述
A02_1646465 T / C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.22
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.23
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.24
所示；所述
A02_2701397A/G
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.25
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.26
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.27
所示；所述
A02_3588799 T/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.28
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.29
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.30
所示；所述
A02_5472884 T/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.31
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.32
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.33
所示；所述
A02_6754191 T/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.34
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.35
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.36
所示；所述
A02_8170488 C/T
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.37
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.38
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.39
所示；所述
A02_8577597 A/G
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.40
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.41
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.42
所示；所述
A02_25765112 C/T
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.43
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.44
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.45
所示；所述
A02_27723784 A/G
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.46
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.47
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.48
所示；所述
A02_54382820 G/A
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.49
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.50
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.51
所示；所述
A02_60887873 T/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.52
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.53
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.54
所示；所述
A02_62939305 T/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.55
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.56
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.57
所示；所述
A03_658792 A /G
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.58
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.59
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.60
所示；所述
A03_3674009G/T
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.61
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.62
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.63
所示；所述
A03_7523159A/G
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.64
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.65
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.66
所示；所述
A03_13206072G/T
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.67
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.68
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.69
所示；所述
A03_23182211G/A
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.70
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.71
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.72
所示；所述
A03_23661296T/G
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.73
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.74
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.75
所示；所述
A03_26267190A/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.76
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.77
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.78
所示；所述
A03_37245547A/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.79
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.80
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.81
所示；所述
A03_39934962G/A
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.82
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.83
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.84
所示；所述
A03_40171446T/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.85
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.86
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.87
所示；所述
A03_56848398A/C
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.88
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.89
所示，下游引物
R
的序列如
SEQ ID No.90
所示；
所述
A03_59695342C/T
引物对的上游引物
F1
的序列如
SEQ ID No.91
所示，上游引物
F2
的序列如
SEQ ID No.92
所示，下...

【专利技术属性】
技术研发人员：张振超，陶美奇，山溪，戴忠良，孙国胜，
申请(专利权)人：江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：