一种青花菜制造技术

本发明专利技术公开了一种青花菜

【技术实现步骤摘要】
一种青花菜KASP分子标记、引物组及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种青花菜
KASP
分子标记
、
引物组及其应用
。

技术介绍

[0002]青花菜
(Brassica oleracea var.italica)
营养全面，营养成分含量位居同类蔬菜之首，还含有防癌抗癌物质莱菔硫烷，花球状似皇冠，被誉为“蔬菜皇冠”。
随着国民对青花菜的食用方法和营养价值认识逐步深化，青花菜消费得到了较大发展，种植面积逐年增加
。
近年来，国内很多育种单位积极开展青花菜遗传育种研究工作，培育出了大量优良品种，这也导致了市场上同名异物及同物异名的情况出现，甚至一些不合格种子混入市场造成重大经济损失，因此对青花菜种质资源的快速准确鉴定对于假种辨别和解决产权纠纷具有重要意义
。
[0003]近年来，随着分子标记技术的迅速发展，使品种鉴定以及种子纯度鉴定进入了
DNA
水平，因其具有较高的准确性
、
稳定性和重复性，为作物品种纯度分析提供了更为准确
、
可靠的结果
。RFLP
标记在于呈现共显性，能够区分纯合型和杂合型，在基因组中应用范围广泛但其
DNA
模板量需求过大，操作过程技术难度较高，多态性的灵敏程度不高，且检测时必须用到放射性元素，对环境造成污染
。SSR
标记是共显性标记可鉴别纯合型和杂合型，所需的
DNA
样品量少，对
DNA
的要求不高，操作简单，可靠性强，具有大量的等位差异性，无需使用放射性同位素，但必须明确重复基序两端的
DNA
序列，如果不能直接在
DNA
数据库中查找到则需要再次进行测序，成本高
。
[0004]单核苷酸的多态性
(single nucleotide polymorphisms
，
SNP)
是指基因组内单个核苷酸改变而引起的
DNA
序列多态性
。
竞争性等位基因特异性
PCR(kompetitive allele specific PCR
，
KASP)
是一种以
SNP
为基础的第三代新型基因分型技术，该技术能够精确区分双等位基因
。KASP
‑
SNP
标记是由
KASP
技术转化后用于植物遗传育种的一种
SNP
标记，具有数量丰富
、
密度高
、
遗传相对稳定
、
精确性和效率更高
、
在基因组中分布范围广以及易于实行自动化
、
规模化的分析等优势
。KASP
技术是基于引物末端碱基的特异匹配来对
SNP
分型以及检测
InDels
插入和缺失，采用2个荧光探针
、2
个通用淬灭探针再加多个位点特异探针来检测多个
SNP
位点，采用全自动荧光定量
PCR
平台，读取数据，进行基因分型
。
准确性
KASP
的特异性引物片段长度通常为
24
～
26bp
，相比较一般采取8～
12bp
长度的
Taqman
探针会有更高的特异性，
SNP
的准确性也会更高
。
在进行配置
KASP
反应体系时，只需要加入非常少量的样本
DNA
，
100ng/
μ
L
的样本
DNA
在配置
10
μ
L
的反应体系时只需要加入1μ
L
，从而减少了试剂的消耗，极大地降低了成本，而且反应不需要进行常规的凝胶电泳，在试验结束时就可以观察到基因的分型情况
。KASP
检测平台也可以同时检测大量位点
、
少量样本或者少量位点
、
大量样本等低
、
中
、
高通量研究以及单个实验
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种青花菜
KASP
分子标记
、
引物及其应用，可实现对青花菜种质资源和种子纯度能够快速
、
准确
、
有效地鉴定
。
[0006]为了实现上述技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0007]一种青花菜
KASP
分子标记，所述分子标记包括以下中的至少一个：
A01_3094927A/C
，
A01_3842008A/T
，
A01_4265358T/C
，
A01_6357104G/A
，
A01_11115570T/G
，
A02_4516825C/G
，
A02_15912500G/T
，
A02_19891434C/T
，
A02_31451277A/T
，
A02_31459473C/T
，
A02_35442443G/C
，
A02_52870426C/A
，
A03_194735A/G
，
A03_17277365G/C
，
A03_21841464G/A
，
A03_23315341A/G
，
A03_26267190A/C
，
A04_17751632T/C
，
A05_6673288C/G
，
A05_51262859T/C
，
A06_7964853C/T
，
A07_30545769A/G
，
A07_41422657A/G
，
A08_19117011A/G
，
A08_32458241C/T
，
A09_51531182A/T
，
A05_19534233C/T
，
A05_39660832T/G
，
A06_4137036G/T
，
A06_26279196A/G
，
A06_39685055A/T
，
A07_21825990G/A
，
A07_48699362G/C
，
A08_45812224A/G
，
A08_49976809G/A
，
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
ID NO.32
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.33
所示；
A02_52870426C/A
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.34
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.35
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.36
所示；
A03_194735A/G
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.37
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.38
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.39
所示；
A03_17277365G/C
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.40
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.41
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.42
所示；
A03_21841464G/A
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.43
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.44
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.45
所示；
A03_23315341A/G
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.46
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.47
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.48
所示；
A03_26267190A/C
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.49
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.50
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.51
所示；
A04_17751632T/C
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.52
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.53
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.54
所示；
A05_6673288C/G
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.55
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.56
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.57
所示；
A05_51262859T/C
的正向引物
F1
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SEQ ID NO.58
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.59
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.60
所示；
A06_7964853C/T
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.61
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.62
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.63
所示；
A07_30545769A/G
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.64
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.65
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.66
所示；
A07_41422657A/G
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.67
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.68
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.69
所示；
A08_19117011A/G
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.70
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.71
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.72
所示；
A08_32458241C/T
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.73
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.74
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.75
所示；
A09_51531182A/T
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.76
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.77
所示，反向引物
R
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SEQ ID NO.78
所示；
A05_19534233C/T
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.79
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.80
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.81
所示；
A05_39660832T/G
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.82
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.83
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.84
所示；
A06_4137036G/T
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.85
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.86
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.87
所示；
A06_26279196A/G
的正向引物
F1
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SEQ ID NO.88
所示，正向引物
F2
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SEQ ID NO.89
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.90
所示；
ID NO.149
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.150
所示；
A04_10843478A/G
的正向引物
F1
的序列如
SEQ ID NO.151
所示，正向引物
F2
的序列如
SEQ ID NO.152
所示，反向引物
R
的序列如
SEQ ID NO.153
所示；
A04_130903...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶美奇，张振超，潘永飞，戴忠良，孙国胜，许丁帆，
申请(专利权)人：江苏丘陵地区镇江农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：