【技术实现步骤摘要】
一种体液中提取外泌体的钠基蒙脱石(Na
‑
MMT)吸附柱法
[0001]本专利技术是一种吸附柱法,特别涉及一种体液中提取外泌体的钠基蒙脱石(Na
‑
MMT)吸附柱法。
技术介绍
[0002]1983年,外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现,1987年Johnstone将其命名为"exosome"。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。
[0003]外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30
‑
150nm)。
[0004]目前,外泌体提取方法包括超速离心法、超滤法、磁珠免疫法、沉淀试剂法、密度梯度离心法和分子排阻法等多种方法都是根据外泌体特性而进行分离提取。
[0005]外泌体是细胞分泌的具有磷脂双分子层的纳米囊泡,其膜性质与细胞膜类似。外泌体主要包含以下脂质:(1)脂筏相关脂质(如胆固醇);(2)鞘脂(如鞘磷脂和神经酰胺);(3)磷脂;(4)甘油磷脂类(如磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸)。
[0006]外泌体具有磷脂双分子层,磷脂含量60%
‑
70%。文献“钠基蒙脱石对菜籽油中磷脂的吸附行为研究”中报导钠基蒙脱石对菜籽油中磷脂的有吸附作用,分析磷脂在钠基蒙脱石的吸附等温线发现,当温度从20℃升至30 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种体液中提取外泌体的钠基蒙脱石(Na
‑
MMT)吸附柱法,其特征在于按以下步骤进行:
①
提取样本体液,样本体液包括尿液﹑血浆﹑血清,脑脊液,经过低速离心预处理;
②
先后用0.8um和0.22um针头式过滤器对预处理后的上清液进行过滤;
③
取适量过滤后样本,Na—MMT柱和PBS于20℃
‑
40℃的温度中,水浴30分钟,使得与水浴锅设置温度一致;适量PBS于40
‑
60℃水浴30min以上使得与水浴锅设置温度一致,实验需要时拿出来使用;
④
水浴锅中快速取出Na—MMT柱,取出水浴锅中的提取样本,上样,待下端无液体流出;
⑤
在温度为20℃
‑
40℃加入适量的pbs进行清洗,待下端无液体流出;
⑥
在温度为40
‑
60℃中加入PBS进行洗脱,接取外泌体0.5
‑
5ml,在温度为
‑
80℃下进行冷冻保存。2.根据权利要求1所述的一种体液中提取外泌体的钠基蒙脱石(Na
‑
MMT)吸附柱法,其特征在于:步骤
④
中,上样过程中为保证柱体和样品的温度在20℃
‑
40℃,需尽快操作避免滞留;步骤
⑥
中,如需提高外泌体浓度,可使用100KD超滤管4℃,3000r离心15min后再使用少量PBS洗脱超滤膜,回收外泌体;或直接接取外泌体浓度较高的体积0.5
‑
2ml。3.根据权利要求1所述的一种体液中提取外泌体的钠基蒙脱石(Na
‑
MMT)吸附柱法,其特征在于:Na
‑
【专利技术属性】
技术研发人员:王军红,王英,梁颖,
申请(专利权)人:杭州昱鼎生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。