一种三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗形成的组合疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗形成的组合疫苗及其制备方法。该组合疫苗由一头份的三联灭活疫苗稀释一头份的猪伪狂犬活疫苗制成，其中，三联灭活疫苗包括猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌。本发明专利技术采用猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗，形成一种组合疫苗，且猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗和猪伪狂犬活疫苗具有协同免疫功能，可有效提升组合疫苗的免疫效果。效提升组合疫苗的免疫效果。

【技术实现步骤摘要】
一种三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗形成的组合疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术属于组合疫苗制备
，具体涉及一种三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗形成的组合疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]PCV2是引起以断奶仔猪多系统衰竭综合征PMWS的病原，即呼吸急促或困难、腹泻、贫血、明显的淋巴组织病变和进行性消瘦为主要特征的疾病。现已证实，PCV2主要侵害猪体的免疫系统，导致免疫抑制及机体抵抗力降低，干扰和破坏猪对其他疾病免疫抗体的产生和维持，从而继发其他疾病。因此，在养殖业中，不能孤立看待PCV2，因为它常与猪支原体肺炎、副猪嗜血杆菌病、猪伪狂犬病、猪链球菌、猪细小病毒病、多杀性巴氏杆菌病等一种或多种混合感染。Cap蛋白是一种衣壳蛋白，表面有大量抗原表位，是PCV2主要的免疫保护性抗原，也是PCV2热门的疫苗候选之一。
[0003]猪支原体肺炎(MHP)，又称猪“喘气病”，系由猪肺炎支原体(Mhyo)引起的一种顽固性、慢性呼吸系统疾病。猪支原体肺炎临床表现主要为咳嗽、气喘和呼吸困难，可导致猪群生长缓慢和饲料转化率下降。当猪肺炎支原体与其他呼吸道疾病混合感染时，会使病情加剧，甚至引起猪的死亡。
[0004]副猪嗜血杆菌病，是由副猪嗜血杆菌(HPS)引起的多发性纤维素性浆膜炎和关节炎。临床上主要表现为发热、咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行、共济失调和被毛粗乱等。HPS血清型众多，且不同菌株的交叉保护能力较弱，按琼扩分型方法至少可分15种血清型，目前我国主要流行的菌株为4型、5型和12型。随着规模化养殖的发展，高密度的饲养环境、免疫抑制和多重应激的因素导致了本病日趋流行，给养猪业带来了严重的经济损失。
[0005]伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病毒引起的多种动物以发热、奇痒(猪例外)及脑脊髓炎为主要症状的一种急性传染病。猪是本病的原发感染宿主，又是病毒的长期储存宿主和排毒者，受到的威胁最大。不同阶段猪发生PR后临床表现差异较大。PRV感染后，能在发病耐过猪体内形成潜伏感染，潜伏带毒猪受到应激导致抵抗力下降后，体内病毒能重新活化，引起复发性感染，可以向外排毒或导致胎儿感染、发病死亡。这种“潜伏
‑
激活”循环感染和传播机制导致了猪场一旦感染该病毒就很难根除。
[0006]目前市场上仅有猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体二联灭活疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗、副猪嗜血杆菌灭活疫苗、猪伪狂犬活疫苗，没有能同时预防4种疾病的四联疫苗。同时预防四种疾病需要分别接种上述疫苗，猪只在接种疫苗会产生多次应激，容易影响疫苗的接种效果。
[0007]因此研制一种能同时预防猪圆环病毒2型、猪支原体肺炎、副猪嗜血杆菌病与猪伪狂犬病的疫苗组合物，达到一针多防、免疫效果良好、减少免疫猪应激反应，具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0008]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗形成的组合疫苗及其制备方法，本专利技术旨在提供一种具有一针多防、降低猪应激反应、提升免疫效果的组合疫苗。
[0009]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0010]一种三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗形成的组合疫苗，该三联灭活疫苗包括猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌。
[0011]进一步地，猪圆环病毒2型cap蛋白的琼扩效价不低于1:32；猪肺炎支原体灭活前抗原含量不低于1～3
×
109CCU/mL，副猪嗜血杆菌4型、5型、12型浓缩后抗原含量不低于1～3
×
10
10
CFU/mL，猪伪狂活疫苗每头份病毒含量不低于1～5.0
×
10
4.5
TCID
50
。
[0012]进一步地，猪圆环病毒2型cap蛋白的琼扩效价不低于1:32；猪肺炎支原体灭活前抗原含量不低于109CCU/mL，副猪嗜血杆菌4型、5型、12型浓缩后抗原含量不低于1.8
×
10
10
CFU/mL，猪伪狂活疫苗每头份病毒含量不低于5.0
×
10
4.5
TCID
50
。
[0013]进一步地，组合疫苗中还包括在药学上疫苗可接受的佐剂。
[0014]一种制备上述组合疫苗的方法，使用一头份的三联灭活疫苗稀释一头份的猪伪狂犬活疫苗即可。
[0015]进一步地，三联灭活疫苗的制备方法如下：
[0016]将猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体抗原、副猪嗜血杆菌4型、5型、12型抗原按体积比1:1:1混合后，加入5％的氢氧化铝胶，充分搅拌混匀后，即得猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗。
[0017]本专利技术的有益效果：
[0018]1、本专利技术通过先灭活后浓缩并多次洗滤重悬获得细菌抗原的方法，可有效的去除甲醛，以避免甲醛对猪伪狂犬活疫苗的影响。
[0019]2、本专利技术采用猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗，形成一种组合疫苗，且猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌三联灭活疫苗和猪伪狂犬活疫苗具有协同免疫功能，可有效提升组合疫苗的免疫效果。
[0020]3、组合疫苗可简化接种程序，节省人力、物力，减少接种次数，可降低发生不良反应的几率，提升免疫效果。
附图说明
[0021]图1为不同组合疫苗免疫仔猪前后体温数据图；
[0022]图2为不同组合疫苗免疫仔猪前后圆环抗体结果图；
[0023]图3为不同保存期疫苗组合安全性检验体温数据图；
[0024]图4为不同保存期疫苗组合免疫仔猪前后圆环抗体结果图。
具体实施方式
[0025]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，
只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0026]实施例1组合疫苗的制备
[0027]1、猪圆环病毒2型cap蛋白的制备
[0028](1)制备一级生产种子：将含有圆环病毒cap蛋白表达质粒的冻干菌种BL21
‑
cap株启封后，用LB液体培养基溶解后，划线接种含卡那霉素(50μg/mL)的LB固体培养基上，置37℃培养18～32小时，挑选符合要求的菌落，划线接种含卡那霉素(50μg/mL)的LB固体培养基，37℃培养18～32小时，作为一级生产种子。
[0029](2)制备二级生产种子：用LB液体培养基洗下一级生产种子按3％接种含卡那霉素(50μg/mL)的LB液体培养基，置37℃振荡培养8～12小时，取样经纯粹检验合格后作为二级生产种子。
[0030](3)工程菌培养：将发酵罐内已本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三联灭活疫苗与猪伪狂犬活疫苗形成的组合疫苗，其特征在于，所述三联灭活疫苗包括猪圆环病毒2型cap蛋白、猪肺炎支原体和副猪嗜血杆菌。2.根据权利要求1所述的组合疫苗，其特征在于，所述猪圆环病毒2型cap蛋白的琼扩效价不低于1:32；猪肺炎支原体灭活前抗原含量不低于1～3
×
109CCU/mL，副猪嗜血杆菌4型、5型、12型浓缩后抗原含量不低于1～3
×
10
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CFU/mL，猪伪狂活疫苗每头份病毒含量不低于1～5.0
×
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50
。3.根据权利要求2所述的组合疫苗，其特征在于，所述猪圆环病毒2型cap蛋白的琼扩效价不低于1:32；猪肺炎支原体灭活前抗原含量不低于109CCU/mL，副猪嗜血杆菌4型、5...

【专利技术属性】
技术研发人员：易洁，杜德燕，罗颖，谢建勇，邢刚，龚文波，徐静，向军，郝伟伟，郭建宝，汤磊，万成燕，徐春燕，魏巍，
申请(专利权)人：华派生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：