一种细胞骨架实验样品的快速制备方法技术

本发明专利技术公开了一种细胞骨架实验样品的快速制备方法，撕取洋葱鳞茎内表皮，加入磷酸盐缓冲液，待洋葱鳞茎内表皮下沉后，微波处理；吸去磷酸缓冲液，加入抽提剂1wt%Triton X

【技术实现步骤摘要】
一种细胞骨架实验样品的快速制备方法


[0001]本专利技术属于细胞骨架实验样品
，具体涉及一种细胞骨架实验样品的快速制备方法。

技术介绍

[0002]细胞骨架是在真核细胞内部可观察到的纤维状的网状立体结构，细胞骨架主要包括微管、微丝和中间纤维。细胞骨架在维持细胞形态、细胞运动、细胞内物质运输等一系列方面均有重要作用，因此，细胞骨架是近代细胞生物学研究最活跃的领域之一，也是细胞生物学实验的重要内容。
[0003]近年来，不断有学者对细胞骨架实验进行了探索优化，谭娟、钱鑫萍、付秀芹、佟树坤、冯振月等分别对细胞骨架观察实验的条件进行了探索，对抽提试剂浓度、抽提时间、固定液、固定时间及染色时间等步骤做了优化，但都沿用了经典的考马斯亮蓝染色法，该方法多采用植物细胞作为实验材料，经Triton X
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100处理细胞后保留细胞骨架蛋白，又经M缓冲液稳定肌动蛋白，再经戊二醛固定，最后用考马斯亮蓝
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R250染色，每个环节之后均用PBS漂洗，整个过程需持续3
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4个小时，虽然实验操作简单，但耗时相对冗长。

技术实现思路

[0004]本专利技术解决的技术问题是提供了一种细胞骨架实验样品的快速制备方法，该方法能够极大提高时间利用效率。
[0005]本专利技术为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种细胞骨架实验样品的快速制备方法，其特征在于具体步骤为：步骤S1，撕取洋葱鳞茎内表皮置于正方体塑料盒中，加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，待洋葱鳞茎内表皮下沉后，置于微波炉中于30
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40℃加热处理2min；步骤S2，吸去磷酸缓冲液，加入抽提剂1wt% Triton X
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100溶液覆盖洋葱样品，置于微波炉中于30
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40℃加热处理5min；步骤S3，吸去抽提剂，用M
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缓冲液浸泡洗涤3次，每次均置于微波炉中于30
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40℃加热处理2min，其中M
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缓冲液由50mmol/L咪唑、50mmol/L氯化钾、0.5mmol/L氯化镁、1mmol/L EGTA、0.1mmol/L乙二胺四乙酸和1mmol/L β
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巯基乙醇组成；步骤S4，吸去M
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缓冲液，加入固定液3wt%戊二醛溶液覆盖洋葱样品，置于微波炉中于30
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40℃加热处理5min；步骤S5，吸去固定液，用磷酸盐缓冲液浸泡洗涤3次，每次均置于微波炉中于30
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40℃加热处理2min；步骤S6，吸去磷酸盐缓冲液，加0.2wt%考马斯亮蓝R250染液置于微波炉中于30
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40℃加热处理3min；步骤S7，用蒸馏水冲洗1
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2次去除浮液，加盖玻片观察。
[0006]进一步限定，步骤S2中所述抽提剂1wt% Triton X
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100溶液由M
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缓冲液配制。
[0007]进一步限定，步骤S4中所述固定液3wt%戊二醛溶液由磷酸盐缓冲液配制。
[0008]进一步限定，步骤S6中所述0.2wt%考马斯亮蓝R250染液的溶剂由以下体积百分含量的溶液组成：甲醇46.5%、冰醋酸7%和蒸馏水46.5%。
[0009]进一步限定，每个步骤中的样品在微波炉中处理时需要置于盛满水的烧杯中，每次处理结束后要及时更换烧杯中的水以避免烧杯中水的温度超过40℃。
[0010]本专利技术与现有技术相比具有以下优点和有益效果：本专利技术采用微波处理后整个实验过程可以缩短到2个小时内完成，处理后细胞骨架结构清晰、完整，整体操作简单，可以在本科实验中推广使用。同时，探究型实验在本科实验教学中的要求越来越高，但通常探究型实验耗时长，方案设计复杂。而本实验操作简单，可让学生从抽提时间、固定时间、处理温度等多个环节自主探究最适条件，以培养学生的自主实验能力。
附图说明
[0011]图1是抽提微波处理时间对细胞骨架的影响图；图2是固定微波处理时间对细胞骨架的影响图；图3是处理温度对细胞骨架的影响图。
具体实施方式
[0012]以下通过实施例对本专利技术的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本专利技术上述内容实现的技术均属于本专利技术的范围。
实施例
[0013]1实验材料和方法1.1.1材料：洋葱表皮1.1.2试剂（1）M
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缓冲液：咪唑50mmol/L、氯化钾50mmol/L、氯化镁0.5mmol/L、EGTA 1mmol/L、乙二胺四乙酸0.1mmol/L和β
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巯基乙醇1mmol/L。
[0014]（2）磷酸盐缓冲液（PBS）：6mmol/L，pH=6.8。
[0015]（3）1.0wt% Triton X
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100溶液：用M
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缓冲液配制。
[0016]（4）3.0wt%戊二醛溶液：用磷酸盐缓冲液配制。
[0017]（5）0.2wt%考马斯亮蓝R250染液：其溶剂由以下体积百分含量的溶液组成：甲醇46.5%、冰醋酸7%和蒸馏水46.5%。
[0018]1.1.3仪器微波炉：美的M1
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L213B显微镜：尼康1001.2细胞骨架实验常规处理方法1.2.1取材漂洗：撕取洋葱内表皮（1cm见方），放入PBS（pH=6.8）缓冲溶液中处理8min。
[0019]1.2.2抽提：吸去PBS缓冲溶液，用抽提剂1wt% Triton X
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100抽提洋葱内表皮
25min，去除杂蛋白。
[0020]1.2.3洗涤：吸去抽提剂，用M
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缓冲液浸泡洗涤3次，每次10min。
[0021]1.2.4固定：室温下用3wt%戊二醛溶液固定45min。
[0022]1.2.5再次洗涤：吸去固定液，用PBS缓冲溶液浸泡洗涤3次，每次10min。
[0023]1.2.6染色：0.2wt%考马斯亮蓝R250染液染色25min。
[0024]1.2.7 制片：用蒸馏水冲洗，加盖玻片，制成临时装片进行观察。
[0025]1.3实验方法的改进改进的方法为每个实验操作步骤的处理方式改为在微波炉中用中低火处理，操作步骤不变，同时，将关键步骤的处理时间进行优化。具体操作如下：（1）撕取洋葱鳞茎内表皮（1cm见方）置于边长2.5cm的正方体塑料盒中，加0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS），待洋葱鳞茎内表皮下沉后，置于微波炉中用中低火加热处理2min。
[0026]（2）抽提：吸去缓冲液，加抽提剂1wt% Triton X
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100溶液覆盖洋葱样品，置于微波炉中用中低火加热处理。
[0027]（3）洗涤：吸去抽提剂，用M
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缓冲液浸泡洗涤3次，每次均置于微波炉中用中低火加热处理2min本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞骨架实验样品的快速制备方法，其特征在于具体步骤为：步骤S1，撕取洋葱鳞茎内表皮置于正方体塑料盒中，加入0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，待洋葱鳞茎内表皮下沉后，置于微波炉中于30
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40℃加热处理2min；步骤S2，吸去磷酸缓冲液，加入抽提剂1wt% Triton X
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100溶液覆盖洋葱样品，置于微波炉中于30
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40℃加热处理5min；步骤S3，吸去抽提剂，用M
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缓冲液浸泡洗涤3次，每次均置于微波炉中于30
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40℃加热处理2min，其中M
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缓冲液由50mmol/L咪唑、50mmol/L氯化钾、0.5mmol/L氯化镁、1mmol/L EGTA、0.1mmol/L乙二胺四乙酸和1mmol/L β
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巯基乙醇组成；步骤S4，吸去M
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缓冲液，加入固定液3wt%戊二醛溶液覆盖洋葱样品，置于微波炉中于30
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40℃加热处理5min；步骤S5，吸去固定液，用磷酸盐缓冲液浸泡洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯世坤，周瑞芝，李慧，
申请(专利权)人：河南师范大学，
类型：发明
国别省市：