将一种或多种外源物质引入免疫细胞的方法和系统技术方案

本发明专利技术涉及将一种或多种外源物质引入免疫细胞的方法和系统。该方法包括以下步骤：提供具有多个孔的膜，所述孔被配置为允许免疫细胞通过，其中多个孔的平均孔径不小于免疫细胞核的平均直径并且不大于免疫细胞的平均直径，使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体通过多个孔以诱导对免疫细胞的机械应力并促进将一种或多种外源物质引入免疫细胞，并且使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体再循环，使得同一免疫细胞不止一次地通过膜。在一些实施方案中，免疫细胞是T细胞，外源物质是mRNA。mRNA。mRNA。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】将一种或多种外源物质引入免疫细胞的方法和系统


[0001]本公开内容广泛地涉及将一种或多种外源物质引入免疫细胞的方法和系统。
[0002]背景
[0003]将多糖、蛋白质或核酸等大分子递送到细胞的细胞质中能够暂时或永久地改变细胞功能以用于研究或治疗目的。然而，现有的细胞内递送技术是有限的，特别是对于淋巴细胞等免疫细胞尤其如此。
[0004]目前已知的细胞内递送技术包括电穿孔、病毒载体、跨膜肽、脂质体和聚合体(polymersome)。然而，电穿孔导致相当大的细胞毒性。病毒载体不能感染休息的淋巴细胞。跨膜肽不能有效地转染原代淋巴细胞。脂质体和聚合体是细胞疗法生产过程的主力，但脂质体和聚合材料的残留量能够以未知的方式在体内影响细胞功能。这些技术中的许多技术还导致能够影响细胞功能的细胞内不可生物降解的包装或递送材料的积累。
[0005]因此，需要将一种或多种外源物质引入免疫细胞的方法和系统，以寻求解决或至少改善上述问题中的一个或多个问题。
[0006]概述
[0007]在一个方面，提供了将一种或多种外源物质引入免疫细胞的方法，该方法包括：提供具有多个孔的膜，所述孔被配置为允许免疫细胞通过，其中多个孔的平均孔径不小于免疫细胞核的平均直径，使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体通过多个孔以诱导对免疫细胞的机械应力并促进将一种或多种外源物质引入免疫细胞，并且使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体再循环，使得同一免疫细胞不止一次地通过膜。
[0008]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，多个孔的平均孔径不大于免疫细胞的平均直径。
[0009]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体通过多个孔的具体流量为10nL/s至1000nL/s。
[0010]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，该方法进一步包括：在使流体通过的步骤之前，通过将免疫细胞暴露于一种或多种活化剂来将免疫细胞从失活状态活化到活化状态。
[0011]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，该方法没有在活化步骤之后将一种或多种调理物质引入流体。
[0012]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，免疫细胞在通过膜之前没有被预处理以改变细胞膜的柔韧性。
[0013]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，该方法进一步包括，在使免疫细胞通过膜之前，将免疫细胞以不小于1
×
105个细胞/ml的密度接种到流体中，并且将一种或多种外源物质加入流体。
[0014]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体的体积至少为20mL。
[0015]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，当流体通过多个孔时，包含免疫细胞
和一种或多种外源物质的流体基本上不含血清。
[0016]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，该方法进一步包括在任意两次连续通过膜之间提供至少5分钟的时间间隔以使免疫细胞休息。
[0017]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，免疫细胞是T细胞。
[0018]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，用一种或多种外源物质转染的T细胞待被用于免疫疗法。
[0019]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，一种或多种外源物质包括被配置用于表达一种或多种用于治疗应用的外源基因的核酸。
[0020]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，对于每次通过多个孔，在通过多个孔后回收的活免疫细胞的数量是在通过多个孔之前的活免疫细胞数量的至少30％。
[0021]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，对于每次通过多个孔，用一种或多种外源物质转染的免疫细胞的数量是在通过多个孔之前未转染的免疫细胞数量的至少10％。
[0022]在如本文所公开的方法的一个实施方案中，用一种或多种外源物质转染的免疫细胞的数量随着每次额外通过膜而增加。
[0023]在一个方面，提供了将一种或多种外源物质引入免疫细胞的系统，该系统包括：具有多个孔的膜，所述孔被配置为允许免疫细胞通过，其中多个孔的平均孔径不小于免疫细胞核的平均直径，以及泵，所述泵被配置为使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体通过多个孔以对免疫细胞诱导机械应力并促进将一种或多种外源物质引入免疫细胞，其中泵进一步被配置为使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体再循环，使得同一免疫细胞不止一次地通过膜。
[0024]在如本文所公开的系统的一个实施方案中，多个孔的平均孔径不大于免疫细胞的平均直径。
[0025]在如本文所公开的系统的一个实施方案中，该系统还包括容器，所述容器被布置成形成封闭系统，使得膜被容纳在封闭系统内。
[0026]定义
[0027]如本文所用，术语“活力”是指细胞执行一种或多种以下功能的能力：代谢、生长、维持和繁殖。如本领域技术人员所知，这些活力迹象的程度和特征可以从一种细胞类型到另一种细胞类型不同。使用本领域技术人员已知的技术可以容易地评估细胞活力。如本文所用的术语还指在特定时间在培养物中存活的细胞。
[0028]如本文所用，术语“无活力”是指在任何已知条件下不能执行至少以下功能的细胞：代谢、生长、维持和繁殖。
[0029]如本文所用，术语“基质”应广义地解释为指代任何支撑结构。
[0030]术语“体外”是指人工环境以及在人工环境内或在活生物体之外的其他地方发生的过程或反应。体外环境可包括但不限于试管、细胞培养物、生物反应器等。
[0031]如本文所用，术语“体内”是指生物体(例如，动物或人)体内的自然环境以及在自然环境中发生的过程或反应。
[0032]如本文所用，术语“细胞培养物”是指细胞的任何体外培养物。
[0033]如本文所用，术语“培养基”是指适合支持感兴趣的细胞在体外生长的培养基。
[0034]如本文所用，术语“微”应广义地解释为包括从约1微米到约1000微米的尺寸。落入
该术语的示例性子范围包括但不限于约10微米至约900微米、约20微米至约800微米、约30微米至约700微米、约40微米至约600微米、约50微米至约500微米、约60微米至约400微米、约70微米至约300微米、约80微米至约200微米、或约90微米至约100微米的范围。
[0035]如本文所用，术语“纳”应广义地解释为包括小于约1000nm的尺寸。落入该术语内的示例性子范围包括但不限于小于约900nm、小于约800nm、小于约700nm、小于约600nm、小于约500nm、小于约400nm、小于约300nm、小于约200nm、小于约100nm、小于约50nm、小于约20nm、或小于约10nm。
[0036]如本文所用，术语“颗粒”泛指离散实体或离散体。本文所述的颗粒可包括有机、无机或生物颗粒。本文所用的颗粒也可以是由多个亚颗粒或小物体的碎片聚集而形成的大颗粒。本专利技术的颗粒可以是球形、基本上为球形或非球形，例如不规则形状的颗粒或椭圆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.将一种或多种外源物质引入免疫细胞的方法，该方法包括：提供具有多个孔的膜，所述孔被配置为允许免疫细胞通过，其中多个孔的平均孔径不小于免疫细胞核的平均直径，使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体通过多个孔以诱导对免疫细胞的机械应力并促进将一种或多种外源物质引入免疫细胞，并且使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体再循环，使得同一免疫细胞不止一次地通过膜。2.根据权利要求1所述的方法，其中多个孔的平均孔径不大于免疫细胞的平均直径。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中使含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体通过多个孔的具体流量为10nL/s至1000nL/s。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，该方法进一步包括：在使流体通过的步骤之前，通过将免疫细胞暴露于一种或多种活化剂来将免疫细胞从失活状态活化到活化状态。5.根据权利要求4所述的方法，其中该方法没有在活化步骤之后将一种或多种调理物质引入流体。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中免疫细胞在通过膜之前没有被预处理以改变细胞膜的柔韧性。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，该方法进一步包括，在使免疫细胞通过膜之前，将免疫细胞以不小于1
×
105个细胞/ml的密度接种到流体中，并且将一种或多种外源物质加入流体。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中含有免疫细胞和一种或多种外源物质的流体的体积至少为20mL。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中当流体通过多个孔时，包含免疫细胞和一种或多种外源物质的流体基本上不含血清。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，该方法进一步包括...

【专利技术属性】
技术研发人员：马伟杰，萧逸颀，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：