一种免疫细胞电转液及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种免疫细胞电转液及制备方法，所述缓冲液包括如下成分：所述缓冲液由如浓度的母液配制而成：0.2

【技术实现步骤摘要】
一种免疫细胞电转液及其制备方法


[0001]本方案属于生物
，具体为基因输送技术转染介质及其制备方法，详细涉及一种免疫细胞电转液、制备方法及其使用方法

技术介绍

[0002]电转染或电穿孔是微生物学技术，其中将电场施加到细胞以增加细胞膜的渗透性，从而允许化学品，药物或DNA被引入细胞。在T细胞电转过程中，由于购买的试剂盒较昂贵，且研发人员在实验过程中发现购买的电转的细胞数量与阳性率可进一步提高，针对上述问题，本申请人研制出一种电转Buffer。
[0003]本方案中的缓冲液可以达到同等甚至更高的电转效率甚，细胞活率增加，同时也减少了电转实验的成本。在本方案的设计中，通过母液中NaH2PO4/Na2HPO4与其他试剂组分的浓度设置，可知NaH2PO4/Na2HPO4的终浓度及其细胞渗透压，及其通过母液中Pluronic F
‑
68的添加。控制免疫细胞在电转后的细胞活率及其电转效率相对于现有技术效果更好。

技术实现思路

[0004]本专利技术中的NaH2PO4与Na2HPO4可以相互替换，为了实现上述中的渗透压维持在260
‑
300mosm之间，使用如下技术方案：
[0005]本专利技术公开一种免疫细胞电转液，所述缓冲液包括如下成分：所述缓冲液由如浓度的母液配制而成：0.2
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0.25mol/L的D
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甘露醇、0.2
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0.25mol/L的琥珀酸钠、0.01
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0.05mol/L的KCl、0.1
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0.15mol/L的MgCl2、1.0
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1.4mol/L的NaH2PO4或是Na2HPO4、以及质量分数为10％的Pluronic F
‑
68，其余为蒸馏水加至10mL。
[0006]进一步改进在于，其组成配方为终浓度0.02
‑
0.025mol/L的D
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甘露醇、0.02
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0.025mol/L的琥珀酸钠、0.001
‑
0.005mol/L的KCl、0.01
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0.015mol/L的MgCl2、0.05
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0.07mol/L的NaH2PO4或是Na2HPO4、以及质量分数为0.01％
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0.05％的Pluronic F
‑
68，其余为蒸馏水。
[0007]进一步改进在于，控制NaH2PO4的终浓度与添加量从而使得所述细胞处于渗透压260
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300mosm的环境中，更优选在260
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280mosm。
[0008]一种免疫细胞电转液制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0009]1)配置母液；
[0010]2)体积用量：取1mL的D
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甘露醇、1mL的琥珀酸钠、1mL的KCl、1mL的MgCl2、0.5mL的NaH2PO4或是Na2HPO4母液加入至EP管内；并且添加0.01mL
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0.05mL的质量分数为10％的Pluronic F
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68母液；
[0011]3)使用HCl或NaOH微调pH值，使其达到7.25
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7.3，优选的为7.29。
[0012]4)补充蒸馏水至10mL，混匀。
[0013]进一步改进在于，所述缓冲液适用于人免疫细胞，包括人T细胞和人NK细胞的电转染。
[0014]一种免疫细胞电转液使用方法，其特征在于，所述缓冲液用于电转人T细胞或人NK细胞时，质粒量(单位：微克)和细胞数(单位：百万)的比值为1：1，使用的电转程序为Lonza T
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023。
[0015]进一步改进在于，保证所述细胞设置为细胞悬液，先将缓冲液吸入至质粒管中，二者混匀后转移至细胞细胞悬液内，三者混匀。
[0016]本专利技术相对于现有技术具有如下的优点在于：
[0017]1)使用本方案中的电转液在电转后的免疫细胞活细胞量增多，相对于购买的电转Buffer的活细胞数高的多，并且做了多次平行实验，都能实现较高细胞活量的技术效果；
[0018]2)通过本方案的电转Buffer其阳性表达在60％以上，在添加了质量分数为10％的Pluronic F
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68母液后阳性表达可达70％以上，并且相同多组实施例中的阳性表达均是高于对比例2中的阳性表达；
[0019]3)购买的试剂盒电转Buffer的金额约在200左右，本方案中配制的电转液试剂成本约在20左右，可节省大量成本的同时，并且在技术效果方案较稳定，可同时提高细胞的存活量与阳性电转率。
附图说明
[0020]附图1为本专利技术缓冲液与对比液在电转完Day1细胞形态图；其中，图A为本专利技术实施例1中的缓冲液电转后的细胞形态图；图B为本专利技术实施例2中的缓冲液电转后的细胞形态图；图C为本专利技术实施例3中的缓冲液电转后的细胞形态图；图D为对比例中购买的KIT电转后的细胞形态图；
[0021]附图2为本专利技术缓冲液与对比液在电转完Day3细胞形态图；其中，图A为本专利技术实施例1中的缓冲液电转后的细胞形态图；图B为本专利技术实施例2中的缓冲液电转后的细胞形态图；图C为本专利技术实施例3中的缓冲液电转后的细胞形态图；图D为对比例购买的KIT电转后的细胞形态图；
[0022]附图3分别为本专利技术缓冲液与对比例在电转完Day1、Day3的活细胞数(M)比较；
[0023]附图4为本专利技术缓冲液与对比液在电转完Day3流式图；图A为本专利技术实施例1中的流式细胞术检测瞬时转染GFP阳性标记的流式图；图B为本专利技术实施例2中的流式细胞术检测瞬时转染GFP阳性标记的流式图；图C为本专利技术实施例3中的流式细胞术检测瞬时转染GFP阳性标记的流式图；其中，图D为购买的KIT流式细胞术检测瞬时转染GFP阳性标记的流式图；
[0024]附图5为Day3天后的阳性标记流式图(％)；其中图A为实施例1
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1的流式图、图B为实施例2
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1的流式图；
[0025]附图6为的Day1和Day3的实施例1
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1、2
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1活细胞数的细胞形态图；图A为实施例为Day1的实施例1
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1的形态图，图B为Day1的实施例2
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1的形态图；图C为实施例Day3的实施例1
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1形态图，图D为Day3的实施例2
‑
1形态图。
具体实施方式
[0026]在阅读了该描述之后，对于本领域技术人员而言，如何实现多种替代实施方式和替代应用将变得显而易见。然而，本文未描述所有实施方式。将被理解的是，在此呈现的实
施方式仅是示例性的，而非限制性的。因此，对多种替代实施方式的详细描述不应被理解为对本文公开内容的范围或广度的限制。将被理解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫细胞电转液，其特征在于，所述缓冲液包括如下成分：所述缓冲液由如浓度的母液配制而成：0.2
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0.25mol/L的D
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甘露醇、0.2
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0.25mol/L的琥珀酸钠、0.01
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0.05mol/L的KCl、0.1
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0.15mol/L的MgCl2、1.0
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1.4mol/L的NaH2PO4或是Na2HPO4、以及质量分数为10％的Pluronic F
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68，其余为蒸馏水加至10mL。2.如权利要求1所述的免疫细胞电转液，其特征在于，其组成配方为终浓度0.02
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0.025mol/L的D
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甘露醇、0.02
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0.025mol/L的琥珀酸钠、0.001
‑
0.005mol/L的KCl、0.01
‑
0.015mol/L的MgCl2、0.05
‑
0.07mol/L的NaH2PO4或是Na2HPO4、以及质量分数为0.01％
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0.05％的Pluronic...

【专利技术属性】
技术研发人员：张月辉，夏伟荣，陈涛涛，王嘉显，
申请(专利权)人：南京艾尔普再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：