一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法技术

本发明专利技术适用于糖原检测技术领域，提供了一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，包括以下步骤：步骤（1）配置一定量的伊文思蓝母液以及糖原母液；步骤（2）取比色皿，在比色皿中加入一定浓度的糖原母液，然后加入一定浓度的伊文思蓝母液，在室温下加水构成1mL检测体系；步骤（3）在荧光光谱仪中测试其荧光强度。本发明专利技术提供的一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，相对于传统的检测方法，伊文思蓝染料检测糖原快速简单、成本低廉，并且在复杂环境下也能实现对糖原的检测。对糖原的检测。对糖原的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法


[0001]本专利技术属于糖原检测
，尤其涉及一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法。

技术介绍

[0002]糖原是一种高度支化的多糖，存在于大多数生物体中，是细胞能量机制的重要组成部分。当糖原的储存或者降解受到影响，会引起有关糖原的储存疾病(GSDs)，损害人们的身体健康。针对出现各种糖原的相关疾病，出现了越来越多的糖原检测手段。
[0003]目前有关糖原检测的方法：(1)电镜法：各种组织和细胞均可以使用电镜法观察糖原颗粒。电镜检查对糖原累积症的诊断与鉴别具有的重要临床价值，但是此方法步骤繁琐，消耗时间长，对操作者要求高。(2)荧光测定法：淀粉葡萄糖苷酶将脑糖原的糖苷键水解成葡萄糖，分别测出二者的差值即为糖原分解得到的葡萄糖，通过检测葡萄糖来间接定量糖原的含量，但是此方法影响了结果的精确度。(3)试剂盒法：糖原在浓碱溶液中比较稳定，在显色前将组织放入浓碱中加热，其他成分被破坏而糖原能够保留。然而这种方法前期准备工作较多，并且不能直接测定糖原的含量。(4)免疫组化法：利用抗原抗体特异性结合的原理测出荧光强度从而计算出糖原的含量，但是由于抗体并未商品化，而且价格昂贵，大大的限制了其应用。(5)PAS(Periodic Acid Schiff)：过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。主要用来检测组织学上的糖类。虽然它是应用最广泛的，但是它的特异性不高，而且步骤十分繁琐。
[0004]因此，市面上被开发出来的检测糖原的方法都存在一些不可忽略的缺点，比如直接测定糖原的方法价格昂贵，成本较高，而间接法测定糖原会导致测试结果精度不够，并且需要对糖原进行前期的预处理，此过程步骤繁琐，耗费时间。
[0005]因此我们需要提供一种快速、耗时短并且能够特异性识别糖原的一种新方法。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，旨在解决市面上被开发出来的检测糖原的方法都存在价格昂贵，成本较高或者测试过程步骤繁琐，耗费时间的问题。
[0007]本专利技术是这样实现的，一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，包括以下步骤：
[0008]步骤(1)：配置一定量的伊文思蓝母液以及糖原母液；
[0009]步骤(2)：取比色皿，在比色皿中加入一定浓度的糖原母液，然后加入一定浓度的伊文思蓝母液，在室温下加水构成1mL检测体系；
[0010]步骤(3)：在荧光光谱仪中测试其荧光强度。
[0011]进一步的技术方案，在步骤(2)中，伊文思蓝母液与糖原母液的浓度比为1：200。
[0012]进一步的技术方案，在步骤(3)中，加水后，用搅拌器将混合溶液搅拌均匀。
[0013]进一步的技术方案，所述糖原母液为兔肝糖原、牡蛎糖原和牛肝糖原。
[0014]相较于现有技术，本专利技术的有益效果如下：
[0015]本专利技术提供的一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，相对于传统的检测方法，伊文思蓝染料检测糖原快速简单、成本低廉，并且在复杂环境下也能实现对糖原的检测。
附图说明
[0016]图1为实施例1中伊文思蓝(EB)对不同浓度兔肝糖原的荧光响应；图2和图3为实施例1中EB对不同浓度的牡蛎糖原和牛肝糖原的荧光响应。图1
‑
3的激发波长均为600nm，发射波长均为为675nm。
[0017]图4为实施例2中EB对兔肝糖原识别(荧光响应)的检出限；图5和图6是实施例2中EB对牡蛎糖原和牛肝糖原识别的检出限。
[0018]图7为实施例3中EB对兔肝糖原的检测性能的分析结果：其中曲线1为EB+兔肝糖原，曲线2为EB，曲线3为兔肝糖原；图8为实施例3中EB对牡蛎糖原的检测性能的分析结果：曲线4为EB+牡蛎糖原、曲线5为牡蛎糖原；图9为实施例3中EB对牛肝糖原的检测性能的分析结果：曲线6为EB+牛肝糖原，曲线7为牛肝糖原。
[0019]图10为实施例4中糖原的选择性实验的柱状图。
[0020]图11为实施例5中兔肝糖原关于离子干扰性实验的柱状图；图12和图13为实施例5中牡蛎糖原和牛肝糖原关于离子干扰性实验的柱状图。
[0021]图14为实施例6中葡萄糖对糖原检测影响的干扰性实验的荧光光谱图。
[0022]图15为实施例7中EB检测兔肝糖原的耐酸碱性的柱状图；图16和17为实施例7中EB检测牡蛎糖原和牛肝糖原的耐酸碱性的柱状图。
[0023]图18为实施例8中EB检测兔肝糖原的耐高低温性的柱状图；图19和图20为实施例8中EB检测牡蛎糖原和牛肝糖原的耐高低温性的柱状图。
[0024]图21为实施例9中EB与兔肝糖原混合进行超分子组装后关于时间与荧光强度的柱状图；图22和图23为EB与牡蛎糖原和牛肝糖原混合进行超分子组装后关于时间与荧光强度的柱状图。
[0025]图24为实施例9中兔肝糖原与EB结合后的产物；图25和图26为实施例9中牡蛎糖原和牛肝糖原分别与EB结合后的产物，每隔固定时间点取样进行荧光测试，统计分析后荧光随时间变化的相关柱状图。
[0026]图27为本专利技术实施例3中EB与兔肝糖原之间的结合作用图；图28和图29为本专利技术实施例3中EB与牡蛎糖原和牛肝糖原之间的结合作用图。
具体实施方式
[0027]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0028]本专利技术提供的一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，包括以下步骤：
[0029]步骤(1)：配置一定量的伊文思蓝母液以及糖原母液；
[0030]步骤(2)：取比色皿，在比色皿中加入一定浓度的糖原母液，然后加入一定浓度的伊文思蓝母液，在室温下加水构成1mL检测体系；
[0031]步骤(3)：在荧光光谱仪中测试其荧光强度。
[0032]本专利技术提供了一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法
。
本专利技术中，所用伊文思蓝(EB)为蓝色粉末，易溶于水，所述伊文思蓝的结构式如式1所示：
[0033][0034]本专利技术中，所述伊文思蓝染料能够检测糖原，相对于之前出现的相关检测方法，伊文思蓝测试糖原直接、快速并且能特异性识别糖原。
[0035]以下结合具体实施例对本专利技术的具体实现进行详细描述：
[0036]实施例1
[0037]伊文思蓝与糖原结合后的荧光光谱分析
[0038]1.试剂：
[0039]配置1mM伊文思蓝母液，配置10mM的兔肝糖原、牡蛎糖原和牛肝糖原母液。
[0040]2.方法：
[0041]设计三组实验，第一组糖原溶液为兔肝糖原，第二组糖原溶液为牡蛎糖原，第三组糖原溶液为牛肝糖原，每组实验各取11个比色皿，在每组11个比色皿中加入浓度为1μM、2μM、5μM、10μM、20μM、50本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过伊文思蓝染料检测糖原的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1）：配置一定量的伊文思蓝母液以及糖原母液；步骤（2）：取比色皿，在比色皿中加入一定浓度的糖原母液，然后加入一定浓度的伊文思蓝母液，在室温下加水构成1mL检测体系；步骤（3）：在荧光光谱仪中测试其荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志俊，李婷，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：