一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合技术

本发明专利技术涉及物质检测技术领域，特别涉及一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合，往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体的固相载体，混匀，孵育；往血清样本加入荧光素一标记的AFP检测抗体和荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA的混合物，混匀，避光孵育；血清样本采用流式细胞仪检测。与现有技术相比，本发明专利技术的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合同时使用两种荧光素作为标记物，其中一种荧光素标记AFP抗体，另一种荧光素标记小扁豆凝集素LCA，可同时检测AFP和AFP

【技术实现步骤摘要】
一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合


[0001]本专利技术涉及物质检测
，特别涉及一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合。

技术介绍

[0002]甲胎蛋白AFP是一种糖蛋白，由约600个氨基酸残基构成，分子量约70kD。甲胎蛋白是一种常用的肿瘤标志物，主要用于对肝癌的辅助诊断。
[0003]近年来的研究发现，由于甲胎蛋白糖基化水平不同，根据其与小扁豆凝集素LCA的亲和力，可将总甲胎蛋白分为三部分：AFP
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L1、AFP
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L2、AFP
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L3。其中AFP
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L1(LCA弱结合型)来源于良性肝病细胞，AFP
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L2(LCA中结合型)主要由卵黄囊产生并多见于孕妇血清，AFP
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L3(LCA强结合型)主要来源于肝癌细胞。AFP
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L3临床上也被称为甲胎蛋白异质体。
[0004]根据国家卫生健康委原发性肝癌诊疗指南(2022年版)2.3节，血清AFP
‑
L3结合总AFP检测有助于肝癌的早期诊断，比单独使用AFP诊断效果更好。
[0005]AFP在临床上一般使用双抗体夹心法化学发光免疫分析进行检测，已有多种成熟产品。但检测AFP
‑
L3的产品尚不常见，检测方法也不成熟，一般需要先使用带有小扁豆凝集素LCA的亲和层析柱吸附血清中的AFP
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L3，然后再使用传统AFP检测方法对其进行检测。现有技术方法缺陷是：流程较长，步骤较多，检测耗时，且样品预处理会引入更多检测误差，且总AFP还需要另行检测。

技术实现思路

[0006]为了克服上述问题，本专利技术提出一种可有效解决上述问题的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合。
[0007]本专利技术解决上述技术问题提供的一种技术方案是：提供一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合，包括如下步骤：
[0008]步骤S1，往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体的固相载体，混匀，孵育；
[0009]步骤S2，往步骤S1中的血清样本加入荧光素一标记的AFP检测抗体和荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA的混合物，混匀，避光孵育；
[0010]步骤S3，对步骤S2中的血清样本采用流式细胞仪检测；
[0011]步骤S4，荧光素一和荧光素二的信号在不同的荧光通道被流式细胞仪读取，荧光素一报告的信号表征总AFP浓度，荧光素二的信号表征总AFP
‑
L3浓度。
[0012]优选地，所述步骤S2中，荧光素对AFP检测抗体和小扁豆凝集素LCA的标记采用直接的共价标记，或者采用生物素
‑
亲和素体系进行间接标记。
[0013]优选地，所述步骤S2中，荧光素一标记的AFP检测抗体与微球捕获的各种AFP亚型均结合，荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA与微球捕获的AFP
‑
L3特异性结合。
[0014]优选地，所述固相载体采用3
‑
10um粒径的捕获微球。
[0015]一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的试剂组合，用于可同时检测甲胎蛋白及其
异质体的方法中，包括如下组分：
[0016]组分一：一种包被抗体的微球；
[0017]组分二：荧光素一标记的AFP检测抗体；
[0018]组分三：荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA。
[0019]优选地，所述组分二和组分三中，荧光素对AFP检测抗体和小扁豆凝集素LCA的标记采用直接的共价标记，或者采用生物素
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亲和素体系进行间接标记。
[0020]优选地，所述荧光素一标记的AFP检测抗体与微球捕获的各种AFP亚型均结合，荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA与微球捕获的AFP
‑
L3特异性结合。
[0021]优选地，所述微球为3
‑
10um粒径的微球。
[0022]优选地，所述荧光素一采用花氰染料Cy5，所述荧光素二采用异硫氰酸荧光素。
[0023]优选地，所述荧光素一采用藻红蛋白，所述荧光素二采用别藻蓝蛋白。
[0024]与现有技术相比，本专利技术的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法及试剂组合，同时使用两种荧光素作为标记物，其中一种荧光素标记AFP抗体，另一种荧光素标记小扁豆凝集素LCA，可同时检测AFP和AFP
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L3，且样本无需前处理，可节约时间，提高检测效率和准确度；基于流式荧光检测技术可以同时检测多个波长荧光信号而无互相干扰的特性，在同一个反应体系中同时检测总AFP和AFP
‑
L3，且无须对样本进行预处理。
【附图说明】
[0025]图1为本专利技术可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法的步骤流程图；
[0026]图2为本专利技术可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法的实施例一的第一临床样本的检测结果散点图；
[0027]图3为本专利技术可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法的实施例一的第二临床样本的检测结果散点图；
[0028]图4为本专利技术可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法的实施例二的第一临床样本的检测结果散点图；
[0029]图5为本专利技术可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法的实施例二的第二临床样本的检测结果散点图；
[0030]图6为本专利技术可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法的实施例二的第三临床样本的检测结果散点图；
[0031]图7为本专利技术可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法的实施例二对24例肝病患者临床样本进行检测的检测结果散点图。
【具体实施方式】
[0032]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施实例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0033]需要说明，本专利技术实施例中所有方向性指示(诸如上、下、左、右、前、后
……
)仅限于指定视图上的相对位置，而非绝对位置。
[0034]另外，在本专利技术中如涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为
指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本专利技术的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
[0035]请参阅图1至图7，本专利技术的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法，包括如下步骤：
[0036]步骤S1，往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体的固相载体，混匀，孵育。
[0037]所述步骤S1中，固相载体采用3
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10um粒径的捕获微球，捕获微球可以带磁性方便自动化检测，也可以不带磁性。捕获微球表面可以为羧基、环氧基、甲苯磺酰基、醛基等基团活化，只要能够包被抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1，往血清样本中加入标记有AFP捕获抗体的固相载体，混匀，孵育；步骤S2，往步骤S1中的血清样本加入荧光素一标记的AFP检测抗体和荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA的混合物，混匀，避光孵育；步骤S3，对步骤S2中的血清样本采用流式细胞仪检测；步骤S4，荧光素一和荧光素二的信号在不同的荧光通道被流式细胞仪读取，荧光素一报告的信号表征总AFP浓度，荧光素二的信号表征总AFP
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L3浓度。2.如权利要求1所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法，其特征在于，所述步骤S2中，荧光素对AFP检测抗体和小扁豆凝集素LCA的标记采用直接的共价标记，或者采用生物素
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亲和素体系进行间接标记。3.如权利要求1所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法，其特征在于，所述步骤S2中，荧光素一标记的AFP检测抗体与微球捕获的各种AFP亚型均结合，荧光素二标记的小扁豆凝集素LCA与微球捕获的AFP
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L3特异性结合。4.如权利要求1所述的可同时检测甲胎蛋白及其异质体的方法，其特征在于，所述固相载体采用3
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10um粒径的捕获微球。5.一种可同时检测甲胎蛋白及其异质...

【专利技术属性】
技术研发人员：苟士正，邓橙，
申请(专利权)人：深圳唯公生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：