小分子化合物在肾源细胞培养中的应用制造技术

本发明专利技术公开了小分子化合物在肾源细胞的培养中的应用。所述的肾源细胞包括肾小管上皮细胞和来源于肾脏的尿源细胞。本发明专利技术发现Corydaline、ARN2966、PKG drug G1、Succinobucol、Meptyldinocap、Rifamycin sodium salt、Carnosic acid、TBHQ、C188

【技术实现步骤摘要】
小分子化合物在肾源细胞培养中的应用


[0001]本专利技术属于细胞培养领域，具体涉及一种小分子化合物在原代人肾源细胞培养中的应用。

技术介绍

[0002]据报道，在人类尿液中可检测到3000多种化学物质(部分为代谢产物)，此外，尿液中还存在一些从血液或组织(主要是肾脏)中脱落的细胞，人体尿液中比较常见的细胞有红细胞、白细胞(淋巴细胞、单核细胞及嗜酸性粒细胞等)、移行上皮细胞、鳞状上皮细胞和肾小管上皮细胞等。尿中所见上皮细胞从肾小管、肾盂、输尿管、膀胱、尿道等处脱落。
[0003]近年的研究报告指出，在尿液中还发现了一类细胞群，具有干细胞的生物学特性和分化潜能，称之为尿源性干细胞(urine－derived stem cells，USC)。在不同诱导因子的作用下，USC能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、尿路上皮细胞、平滑肌细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞等多种组织。
[0004]因为尿源细胞的获取是无创，而且细胞数量相对较多，所以被广泛研究用于再生医学，如将尿液细胞直接重编程为神经干细胞(Nature Methods,doi:10.1038/nmeth.2283)；如诱导尿液细胞来源的多能干细胞分化为上皮样的膜状结构，取代再生牙齿的构建必须得上皮组织(Cell Regeneration,doi:10.1186/2045
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‑2‑
3)。
[0005]原代细胞最接近起源组织。它们直接从组织中取出并经过处理，以在最佳培养条件下建立。由于它们源自组织且未经修饰，因此与体内状态更加相似，并表现出正常的生理学特征。因此，它们为研究细胞的正常生理学和生物化学性质(例如，代谢研究、衰老、信号传导研究)以及药物和有毒化合物对细胞的作用，提供了出色的模型系统。但须记住，原代细胞的寿命有限，经过一定次数的细胞分裂后将停止分裂(或衰老)，比连续细胞系更难以培养和维持。
[0006]研究中最常用的原代细胞类型是上皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞、黑素细胞、内皮细胞、肌肉细胞、造血和间充质干细胞。最初的培养物是异质的(即组织中存在多种细胞类型的混合物)，只能在有限的时间范围内在体外进行培养。肾小管上皮细胞是指肾小管的外面的一层细胞。原代肾小管上皮细胞不建议传代，因为随着传代培养的次数增加，或者培养时间过长，细胞活力会严重下降。
[0007]原代细胞用于制备细胞药物(细胞疗法)，细胞数量必需满足治疗要求，但原代细胞传代次数一般不超过10代，在有限的代数下大量扩增细胞，难度大。肾源细胞(来源于肾脏的细胞)没有较稳定的生长速率，大量扩增细胞后，其原代细胞的代数也已偏高，细胞活力下降，也不利于细胞治疗。因此，需要使用可提高肾源细胞增殖能力的小分子药物处理尿源性细胞，保证在较早代数即可获得数量更多的尿源性细胞。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供有利于维持肾源细胞(来源于肾的细胞)的体外长期培养，
提高其细胞活力，甚至促进其细胞增殖的小分子化合物。这些小分子化合物包括Corydaline、ARN2966、PKG drug G1、Succinobucol、Meptyldinocap、Rifamycin sodium salt、Carnosic acid、TBHQ、C188
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9、Buparvaquone中的至少一种。
[0009]本专利技术所采取的技术方案是：
[0010]本专利技术的第一方面，提供一种用于培养肾源细胞的培养基，所述培养基中含有Corydaline、ARN2966、PKG drug G1、Succinobucol、Meptyldinocap、Rifamycin sodium salt、Carnosic acid、TBHQ、C188
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9、Buparvaquone中的至少一种，优选Corydaline、ARN2966、PKG drug G1中的至少一种。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述的肾源细胞包括肾小管上皮细胞和/或来源于肾脏的尿源细胞。
[0012]化合物Corydaline、ARN2966、PKG drug G1、Succinobucol、Meptyldinocap、Rifamycin sodium salt、Carnosic acid、TBHQ、C188
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9、Buparvaquone对于肾小管上皮细胞有显著的提高细胞活力以及促进细胞增殖的效果，有利于肾小管上皮细胞的长期培养。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述的Corydaline的浓度为0.003～10μM；所述的ARN2966的浓度为0.003～10μM；所述的PKG drug G1的浓度为0.003～10μM；所述Succinobucol的浓度为0.003～10μM；所述Meptyldinocap的浓度为0.003～10μM；所述Rifamycin sodium salt的浓度为0.003～10μM；所述Carnosic acid的浓度为0.003～10μM；所述TBHQ的浓度为0.003～10μM；所述C188
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9的浓度为0.003～10μM；所述Buparvaquone的浓度为0.003～10μM。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述培养基还包含基础培养基，所述基础培养基中包含5％～20％体积分数的胎牛血清。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。
[0016]化合物Corydaline、ARN2966、PKG drug G1对肾来源的尿源性细胞有明显的提高细胞活力作用以及促进细胞增殖的效果，有利于肾来源的肾小管上皮细胞的长期培养。
[0017]当肾源细胞为尿源细胞，所述的Corydaline的浓度为1～5μM；所述的ARN2966的浓度为1～5μM；所述的PKG drug G1的浓度为3～5μM；所述Buparvaquone的浓度为0.003～10μM。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述培养基中还包含5％～20％体积分数的胎牛血清。
[0019]本专利技术的一些实施方式中，所述基础培养基为REGM培养基与DMEM
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high Gluco se培养基按体积比1:(0.5～1.5)混合。
[0020]其中，每50mL REGM包含：49.4mL REBM+0.05mL表皮生长因子+0.05mL转铁蛋白+0.05mL胰岛素+0.05mL氢化可的松+0.05mL GA
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1000+0.05mL三碘甲状腺素+0.05mL肾上腺素+0.25mL FBS。
[0021]每50mL MEF包含：44mL 1
×
DMEM+5mL FBS+0.5mL 100
×
Glutamax+0.5mL 100
×
NEAA。
[0022]本专利技术的第二方面，提供小分子化合物或其药学可接受的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于培养肾源细胞的培养基，其特征在于，所述培养基中含有小分子化合物，所述小分子化合物包含Corydaline、ARN2966、PKG drug G1、Succinobucol、Meptyldinocap、Rifamycin sodium salt、Carnosic acid、TBHQ、C188
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9、Buparvaquone中的至少一种。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述的肾源细胞包括肾小管上皮细胞和/或来源于肾脏的尿源细胞。3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，肾源细胞为肾小管上皮细胞时，所述小分子化合物Corydaline、ARN2966、PKG drug G1、Succinobucol、Meptyldinocap、Rifamycin sodium salt、Carnosic acid、TBHQ、C188
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9、Buparvaquone的浓度均为0.003～10μM；优选地，所述培养基还包含基础培养基，所述基础培养基优选为DMEM/F12培养基。4.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，肾源细胞为尿源细胞时，所述的Corydaline的浓度为1～5μM；所述的ARN2966的浓度为1～5μM；所述的PKGdrug G1的浓度为3～5μM；优选地，所述培养基还包含基础培养基，所述基础培养基为REGM培养基与DMEM
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high Glucose培养基按照体积比1:(0.5～1.5)混合。5.小分子化合物或其药学可接受的盐在(I)～(VI)至少一种中的应用；(I)提高...

【专利技术属性】
技术研发人员：邝源源，龙晓君，郑立新，王恒，邱江，
申请(专利权)人：广州华越肾科再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：