一种小鼠原代肺成纤维细胞分离、纯化及体外激活模型构建的方法技术

本发明专利技术提供了一种小鼠原代肺成纤维细胞分离、纯化及体外激活模型构建的方法，主要包括如下步骤：小鼠肺的分离、肺成纤维细胞的分离、肺成纤维细胞的纯化、肺成纤维细胞体外激活模型的构建，得到肺成纤维细胞体外激活模型。本发明专利技术通过创新性联合使用差时贴壁法、差速贴壁法和细胞营养筛选法，可以避免原代细胞培养过程中混杂大量非成纤维细胞所带来的细胞筛选困难，该方法操作简便、效率高，无需昂贵仪器设备就可完成小鼠原代肺成纤维细胞分离、纯化及体外激活模型的构建，对于今后实验研究具有重要参考价值。具有重要参考价值。具有重要参考价值。

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠原代肺成纤维细胞分离、纯化及体外激活模型构建的方法


[0001]本专利技术涉及细胞培养领域，尤其涉及一种小鼠原代肺成纤维细胞分离、纯化及体外激活模型构建的方法。

技术介绍

[0002]肺是人体呼吸系统中的关键器官，为呼吸过程的气体交换提供了重要场所。肺成纤维细胞是肺间质内的重要细胞组成，能激活成为肌成纤维细胞，从而合成并分泌细胞外基质蛋白，其增殖、迁移与转分化关系到肺部组织结构维持、肺部损伤后的修复和重塑，从而影响肺功能。
[0003]肺纤维化是一种慢性、进行性的不可逆间质性肺部病变，由环境、遗传和组织异常修复等多方面因素引起，以成纤维细胞的激活和增殖、细胞外基质的过度沉积和慢性间质性炎症为主要病理特征，同时也是许多肺部疾病发展的最终阶段。在确诊后，患者的存活时间通常仅为2
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4年。据统计，肺纤维化全球发病率为10
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60例/10万人/每年。有研究表明，2019年新型冠状病毒肺炎患者，尤其是重症感染者，在后期出现严重肺纤维化的概率显著增加。由于肺纤维化的主要临床表现为干咳及进行性加重的呼吸困难本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小鼠原代肺成纤维细胞分离、纯化及体外激活模型构建的方法，包括如下步骤：S1，小鼠肺的分离：选用8～10周的成年雄性小鼠，颈椎脱臼法处死后，固定于解剖板上，依次剪开表皮、腹膜、横膈膜，从胸骨处向两边打开胸腔，迅速摘除心脏后，上剪气管，下剪食管，取出完整的肺至15mL离心管中备用；S2，肺成纤维细胞的分离：在生物安全柜内，用PBS清洗肺组织，剥除气管、食管、周围结缔组织及残余血块，用眼科剪在6cm细胞培养皿中剪碎肺组织至呈糊状，时间控制在5min左右，用1
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2齿组织镊夹取肺组织块，并均匀铺在六孔板中，组织块之间间隔约3mm，期间适时滴加少量肺成纤维细胞完全培养基以保持组织暂时湿润；S3，肺成纤维细胞的培养：待所有组织铺板完成，静置一定时间后，在六孔板中加入2mL完全培养基，置于培养箱中培养，在大约第3天，镜下可见组织块周围有卵圆形和长梭形的两种细胞爬出，此后每两天换一次液；S4，肺成纤维细胞的纯化：在第七天，细胞的整体密度达到90％后，用0.25％胰酶消化1.5～2min，过200目细胞筛，1000rpm离心5min，弃上清，用完全培养基重悬肺成纤维细胞，接种在六孔板中，培养一定时间后，弃去培养基，加入新的完全培养基，37℃、5％CO2培养箱中培养得到纯化后的肺成纤维细胞；S5，肺成纤维细胞体外激...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳全文，赵楚瑜，徐欣鎏，顾皓铖，周嘉欣，应研敏，周婕，
申请(专利权)人：南昌大学，
类型：发明
国别省市：