生物成分特异性的crRNA序列组合和免扩增核酸检测方法技术

本发明专利技术公开了一种生物成分特异性的crRNA序列组合和免扩增核酸检测方法。所述的crRNA序列组合包括SEQ ID No.1～SEQ ID No.4四条crRNA序列中的至少两条；方法是利用CRISPR蛋白和特异性的crRNA序列配置免扩增CRISPR反应体系，从生物制品中提取DNA样本溶液，加入到免扩增CRISPR反应体系中，在一定的反应条件下进行反应，反应结束后采集荧光值，根据荧光值判断是否生物制品中是否存在生物成分。本发明专利技术利用多条特异性crRNA序列组合协同作用提高CRISPR系统的检测性能，实现对特定生物成分，提高CRISPR检测的灵敏度，具有操作简便，响应快速、灵敏度高、特异性好、闭管检测等优点。闭管检测等优点。闭管检测等优点。

【技术实现步骤摘要】
生物成分特异性的crRNA序列组合和免扩增核酸检测方法


[0001]本专利技术涉及一种核酸检测序列和方法，尤其是涉及了一种针对生物成分特异性的crRNA序列组合和免扩增核酸检测方法。

技术介绍

[0002]为了谋取更多的利益，一些不法商家利用低价位的肉制品冒充价位较高的肉制品，例如利用猪肉代替牛肉。因此，对肉类掺假进行快速高效的检测，是打击此类事件、严防严控的重要手段。另外，农产品、食品安全检测领域，也需要对各种致病菌进行快速检测，以保证食品安全。DNA是遗传信息的载体，根据特定的DNA片段信息，可以有效区分不同的物种或菌种。核酸扩增技术如聚合酶链式反应(PCR)和环介导等温扩增(LAMP)是常用的检测肉类掺假或者检测菌落种类的方法。然而，传统PCR或LAMP扩增需要通过凝胶电泳中DNA条带位置来判别结果，凝胶电泳过程耗时较长，增加了检测流程的复杂性。实时 PCR和LAMP方法的核酸扩增和检测步骤同步进行，因此需要更昂贵的具有荧光监测功能的热循环，这增加了肉类掺假监测的成本。在致病菌检测方面，这也提高了核酸检测的复杂，妨碍了相关技术的推广。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.对生物成分具有特异性的crRNA序列组合，其特征在于：所述的crRNA序列组合包括以下四条crRNA序列中的至少两条：crRNA 1:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUGUCUAUGUCUGAUGAGAUUCC，为SEQ ID No.1；crRNA 2:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUGUGCAGGAAUAGGAGAUGUAC，为SEQ ID No.2；crRNA 3:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUUCCUGCCAUUCAUCAUUACCG，为SEQ ID No.3；crRNA 4:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAUAGUGUAGUAUGGGUGAAAU，为SEQ ID No.4。2.根据权利要求1所述的对生物成分具有特异性的crRNA序列组合，其特征在于：所述的crRNA序列组合包括四条crRNA序列中的全部。3.权利要求1所述的对生物成分具有特异性的crRNA序列组合的应用，其特征在于：在检测生物制品中是否含有生物成分中的应用。4.一种应用于权利要求1
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2所述crRNA序列组合的免扩增核酸检测方法，其特征在于：1)利用CRISPR蛋白和特异性的crRNA序列配置免扩增CRISPR反应体系；2)从生物制品中提取DNA样本溶液，加入到免扩增CRISPR反应体系中；3)在一定的反应条件下进行反应，反应结束后采集荧光值；4)根据荧光值判断是否生物制品中是否存在生物成分。5.根据权利要求4所述的用于生物成分的免扩增核酸检测方法，其特征在于：所述的免扩增CRISPR反应体系为多条crRNA组合协同的免扩增CRISPR反应体系，包括100nM CRISPR蛋白，300nM crRNA(其中crRNA 1,2,3合4各75nM)，1
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反应缓冲液(10mM Tris
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Cl pH 8.0、50mM NaCl、10mM...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨天怡，陈艳菊，徐俊锋，吴坚，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：