高效液相串联质谱同时检测多种抗结核药物成分的方法技术

本发明专利技术涉及制药技术领域，尤其是涉及高效液相色谱串联质谱同时检测多种抗结核药物成分的方法。本发明专利技术提供的高效液相色谱串联质谱法高通量检测人血清中四种一类抗结核药物的方法，一次检测可同时得到吡嗪酰胺、异烟肼、乙胺丁醇和利福平四种一线抗结核药物，具有灵敏度高，重复性好，准确性高，特异性好等特点。检测得到的低值质控品重复性的变异系数(CV)≤10％，中值质控品重复性的变异系数(CV)≤10％，高值质控品重复性的变异系数(CV)≤10％；准确度的相对偏差(B)≤

【技术实现步骤摘要】
高效液相串联质谱同时检测多种抗结核药物成分的方法


[0001]本专利技术涉及制药
，尤其是涉及高效液相串联质谱同时检测多种抗结核药物成分的方法。

技术介绍

[0002]结核病是病人感染结核分枝杆菌后引起的传染性疾病，抗结核病的药物主要被分为四类：一线抗结核药物、二线抗结核药物、新型抗结核药物以及复方制剂药物。涉及到的一线抗结核药物主要包括利福平(Rifamoicin,RMP)、异烟肼(Isoniazid,INH)、吡嗪酰胺(Pyrazinamide,PZA)和乙胺丁醇(Ethambutol,EMB)。
[0003]抗结核药物测试主要有液相色谱法
‑
紫外法，液相色谱
‑
蒸发光散射法，液相色谱
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串联质谱法等。由于上述四种一线抗结核药物中乙胺丁醇无紫外吸收，所以必须带有蒸发光散射检测器进行检测，造成四种组分的同时准确检出困难。
[0004]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，提供能够同时检测四种抗结核药物组分的高效液相串联质谱方法，以解决乙胺丁醇无法用于紫外检测的技术问题。
[0006]为了解决上述技术问题，实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供抗结核药物成分分离方法，所述抗结核药物成分含有吡嗪酰胺、异烟肼、乙胺丁醇或利福平中至少一种；
[0008]所述分离方法包括，含有抗结核药物成分的待测样本经甲醇沉淀除杂后，使用F5色谱柱或C18色谱柱，采用甲醇和甲酸铵水溶液配制流动相进行高效液相色谱实现抗结核药物成分的分离。
[0009]在可选的实施方式中，所述高效液相色谱的流动相A为含有1/1000(v/v)甲酸的甲酸铵水溶液，所述甲酸铵的浓度为5～15mM；流动相B为甲醇。
[0010]在可选的实施方式中，所述高效液相色谱的流动相条件为，0～2min流动相A的体积比为87％～95％，2.1～4.5min流动相A的体积比为10％，4.51～5min流动相A的体积比为95％。
[0011]在可选的实施方式中，所述高效液相色谱的液相条件为流动相流速为0.3～0.6mL/min，柱温为30～45℃，进样器温度为5～20℃，洗针液为体积比为1：(0.5～2)：(0.5～2)的甲醇、乙腈和异丙醇的混合溶液，进样量为1～20μL。
[0012]在可选的实施方式中，所述所述高效液相色谱的液相条件为流动相流速为0.5mL/min，柱温为40℃，进样器温度为10℃，洗针液为体积比为1：1：1的甲醇、乙腈和异丙醇的混合溶液，进样量为1μL。
[0013]在可选的实施方式中，吡嗪酰胺、异烟肼、乙胺丁醇和利福平对应的内标分别为吡嗪酰胺
‑
15
N,D3、异烟肼
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D4、乙胺丁醇
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D4和利福平
‑
D4。
[0014]在可选的实施方式中，所述待测样本包括人血清。
[0015]优选地，所述人血清中血红蛋白浓度小于0.04g/L。
[0016]第二方面，本专利技术提供前述实施方式任一项所述分离方法在药物开发、药物筛选或科学研究中的应用，所述药物含有吡嗪酰胺、异烟肼、乙胺丁醇或利福平中至少一种。
[0017]第三方面，本专利技术提供抗结核药物成分浓度检测方法，所述抗结核药物成分含有吡嗪酰胺、异烟肼、乙胺丁醇或利福平中至少一种；
[0018]所述检测方法包括采用前述实施方式任一项所述分离方法将待测样本中含有的抗结核药物成分分离，而后经质谱检测得到各成分浓度。
[0019]在可选的实施方式中，所述质谱检测的离子源参数为：离子源为ESI+，气帘气压强为30～40psi，碰撞气压强为medium，喷雾电压为5500V，温度为450～550℃，喷雾气GS1压强为40～55psi，喷雾气GS2压强为40～60psi。
[0020]优选地，离子源参数为：离子源为ESI+，气帘气压强为40psi，碰撞气压强为7psi，喷雾电压为500V，温度为500℃，喷雾气GS1压强为55psi，喷雾气GS2压强为60psi。
[0021]本专利技术提供的高效液相色谱串联质谱法高通量检测人血清中四种一类抗结核药物的方法，一次检测可同时得到吡嗪酰胺、异烟肼、乙胺丁醇和利福平四种一线抗结核药物，具有灵敏度高，重复性好，准确性高，特异性好等特点。检测得到的吡嗪酰胺线性范围15.000～105.000μg/mL，异烟肼1.000～19.000μg/mL，乙胺丁醇1.000～14.500μg/mL，利福平0.400～13.000μg/mL，相关系数均r≥0.990；低值质控品重复性的变异系数(CV)≤10％，中值质控品重复性的变异系数(CV)≤10％，高值质控品重复性的变异系数(CV)≤10％；准确度的相对偏差(B)≤
±
15％，加标回收率为98％～113％。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为甲醇蛋白沉淀样本后离心后直接进样结果图；
[0024]图2为乙腈萃取，离心后直接进样结果图；
[0025]图3为甲醇/乙腈＝1/1萃取，用水稀释4倍后离心后直接进样结果图；
[0026]图4为甲醇/乙腈＝2/1萃取，用水稀释4倍后离心后直接进样结果图；
[0027]图5为甲醇/乙腈＝3/1萃取，用水稀释4倍后离心后直接进样结果图；
[0028]图6为甲醇/乙腈＝4/1萃取，用水稀释4倍后离心后直接进样结果图；
[0029]图7为甲醇萃取，用水稀释4倍后离心后直接进样结果图；
[0030]图8为流动相A中不含甲酸铵的进样结果图。
[0031]图9为C18柱使用酸性流动相进样结果图。
具体实施方式
[0032]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是
本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0033]因此，以下对在附图中提供的本专利技术的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0034]下面结合附图，对本专利技术的一些实施方式作详细说明。在不冲突的情况下，下述的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0035]本专利技术公开了高效液相质谱法高通量检测人血清中四种一类抗结核药物。人血清中的抗结核药物经过有机溶剂的蛋白沉淀，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗结核药物成分分离方法，其特征在于，所述抗结核药物成分含有吡嗪酰胺、异烟肼、乙胺丁醇或利福平中至少一种；所述分离方法包括，含有抗结核药物成分的待测样本经甲醇沉淀除杂后，使用F5色谱柱或C18色谱柱，采用甲醇和甲酸铵水溶液配制流动相进行高效液相色谱实现抗结核药物成分的分离。2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱的流动相A为含有1/1000(v/v)甲酸的甲酸铵水溶液，所述甲酸铵的浓度为5～15mM；流动相B为甲醇。3.根据权利要求2所述的分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱的流动相条件为，0～2min流动相A的体积比为87％～95％，2.1～4.5min流动相A的体积比为10％，4.51～5min流动相A的体积比为95％。4.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测条件为流动相流速为0.3～0.6mL/min，柱温为30～45℃，进样器温度为5～20℃，洗针液为体积比为1：(0.5～2)：(0.5～2)的甲醇、乙腈和异丙醇的混合溶液，进样量为1～20μL。5.根据权利要求4所述的分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测条件为流动相流速为0.5mL/min，柱温为40℃，进样器温度为10℃，洗针液为体积比为1：1：1的甲醇、乙腈和异丙醇的混合溶液，进样量为1μL。6.根据权利要求1～5任一项所述的分离方法，其特征在于，吡...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑佳，应洪波，栗琳，周继福，张新星，周立，丁沛瑜，苏营雪，丁亮，
申请(专利权)人：江苏豪思睦可生物科技有限公司湖南豪思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：