一种升陷汤提取工艺的优选方法技术

本发明专利技术涉及中药提取技术领域，具体是一种升陷汤提取工艺的优选方法。本发明专利技术通过对黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分，进而采用SPSS一般线性模型方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析，按照正交试验优选升陷汤最佳醇提工艺，为升陷汤的进一步开发研究提供了参考依据。据。

【技术实现步骤摘要】
一种升陷汤提取工艺的优选方法


[0001]本专利技术涉及中药提取工艺领域，具体地说，是一种升陷汤提取工艺的优选方法。

技术介绍

[0002]升陷汤源自近代中医学家张锡纯所著的《医学衷中参西录》，方剂主要有黄芪、知母、柴胡、桔梗、升麻五味药组成，临床常用于治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病、心力衰竭、心律失常等疾病。方剂君药黄芪、佐药知母中主要包含黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷毛、芒果苷和知母皂苷B II等成分，具有抗炎，减轻心肌缺血、心血管病保护作用的作用。
[0003]但是关于一种采用正交试验直观分析和一般线性模型(SPSS中的General Linear Model，GLM)分析方法对升陷汤提取工艺进行优选的方法目前还未见报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种升陷汤提取工艺的优选方法，通过对黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分，进而采用SPSS一般线性模型(SPSS中的General Linear Model，GLM)方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析，按照正交试验优选升陷汤最佳醇提工艺，为升陷汤的进一步开发研究提供参考依据。
[0005]按照2018年中医药管理局公布的《古代经典名方目录(第一批)》，升陷汤的制备方法应该是水煎服。但本专利技术的前期研究表明，升陷汤的乙醇提取物对大鼠慢性心力衰竭的治疗功效优于其水提取物，二者在化学成分上有一定的差异，有效成分黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II的含量在乙醇提物中的含量大于水提物中的含量，并且尚未有任何公开文献对升陷汤的乙醇提取工艺开展研究。
[0006]现有技术中的工艺考察结果都是直接设计各参数的不同水平值进行正交试验，基于正交试验直观分析获得有显著性差异的因素(P小于0.05)，但如果只做这样的分析，得不到有显著性差异的因素，这说明实验设计从统计学上来说是有问题的；但事实上，如果想要使得结果具有统计学差异，各因素的水平差异性就要很大，但这样选择的参数是不符合实际生产工艺的。而本专利技术则是通过单因素试验，先排除了一些不合适水平值后再开展正交试验。采用了正交试验直观分析+SPSS一般线性模型分析方法，前者或者最佳组合，即使没有得到有显著差异性的结果；但结合后者，能够获得有对综合评分有显著差异性的参数。
[0007]本专利技术的第一方面，提供一种升陷汤提取工艺的优选方法，通过对升陷汤中的黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分，进而采用SPSS一般线性模型方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析，按照正交试验优选升陷汤的最佳醇提工艺。
[0008]进一步的，所述的优选方法中，首先采用单因素考察醇提工艺中的3个关键因素乙醇浓度、加醇量和提取时间，获得优选的各因素的3个候选的优选参数，进而再对升陷汤的醇提工艺中的3个关键参数乙醇浓度、加醇量和提取时间3个因素进行考察，获得最优工艺。
[0009]进一步的，所述的优选方法包括以下步骤：
[0010]A、单因素试验，考察不同提取溶剂(水及40％、50％、60％、70％、80％的乙醇)，不同溶剂倍数(4、6、8、10、12倍体积)，不同回流提取时间(0.5h、1.0h、1.5h、2h、2.5h)对芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II和黄芪甲苷提取率的影响；
[0011]B、结合醇提的实际生产，确定提取次数为一次，最终设置因素水平为：乙醇浓度(60％、70％、80％)、加醇倍量(6、8、10倍)，提取时间(1.5h、2.0h、2.5h)、按L9(3)4正交设计实验表；
[0012]C、结合各化合物对慢性心力衰竭的影响及各自对应药材在处方中的用量，加权评分法设定确定黄芪甲苷转移率(A)、毛蕊异黄酮苷转移率(B)、知母皂苷B II转移率(C)芒果苷转移率(D)以及干膏率(E)的权重系数；直观分析结果表明最佳因素水平组合；
[0013]D、采用SPSS分析软件的一般线性模型进行方差分析，将得到的实验结果作为因变量，并把乙醇浓度、提取时间、加醇倍数这三个条件设为固定因子，再在选择模型的构建项中把以上三个条件都以主效应放入模型，最后进行分析，结合正交分析的结果，可得最佳因素水平组合。
[0014]进一步的，所述的优选方法中，还包括对4个指标性成分的前处理和定量分析方法，通过HPLC
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DAD
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ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷B II的含量，通过HPLC
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ELSD方法测定黄芪甲苷的含量。
[0015]由于黄芪甲苷的HPLC检测需要采用适当比例的氨试液处理提取液，而这样的处理方法会破坏知母皂苷B II的结构从而导致其峰形异常，不能进行定量分析。因此，本专利技术针对上述4个指标性成分的结构特点，建立了2种不同的HPLC检测方法，从而才能完成定量分析的要求。
[0016]更进一步的，所述的HPLC
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DAD
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ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷B II的含量的色谱条件为：
[0017]色谱柱：waters
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sunfire
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C
18
柱(4.6
×
250mm，5μm)；流动相A
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乙腈、B
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0.2％甲酸溶液，柱温：30℃；流速：1.0mL/min进样量：10μL；检测器条件：DAD设置：λ＝260nm，ELSD漂移管温度为70℃，载气流速为1.5mL/min，梯度洗脱程序为0～5min 10％～15％A，5～12min 15％～15％A，20～40min 20～40％A，40～45min 40～95％A。
[0018]更进一步的，所述的通过HPLC
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ELSD方法测定黄芪甲苷的含量色谱条件为：
[0019]色谱柱：waters
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sunfire
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C
18
柱(4.6
×
250mm，5μm)柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL，DAD，λ＝260nm，ELSD，漂移管温度70℃，载气流速1.5mL/min，流动相：A(乙腈)
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B(0.2％FA)溶液，梯度洗脱0～5min 10～32％A，5～15min 32％～48％A，15～20min 48％～48％A，20～25min 48～95％A。
[0020]本专利技术的第二方面，提供一种基于上述优选方法得到的升陷汤最佳醇提工艺，所述的升陷汤最佳醇提工艺为黄芪、知母、桔梗、柴胡和升麻加10倍量的70％乙醇回流2.5h。
[0021]本专利技术优点在于：
[0022]1、本专利技术建立HPLC
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DAD
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ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷B II，建立HPLC
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种升陷汤提取工艺的优选方法，其特征在于，通过对升陷汤中的黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒果苷、知母皂苷B II转移率权重进行赋值得到综合评分，进而采用SPSS一般线性模型方法对最佳权重系数所评估分数进行方差分析，按照正交试验优选升陷汤的最佳醇提工艺。2.根据权利要求1所述的升陷汤提取工艺的优选方法，其特征在于，所述的优选方法中，首先采用单因素考察醇提工艺中的3个关键因素乙醇浓度、加醇量和提取时间，获得优选的各因素的3个候选的优选参数，进而再对升陷汤的醇提工艺中的3个关键参数乙醇浓度、加醇量和提取时间3个因素进行考察，获得最优工艺。3.根据权利要求1所述的升陷汤提取工艺的优选方法，其特征在于，所述的优选方法包括以下步骤：A、单因素试验，考察不同提取溶剂：水及40％、50％、60％、70％、80％的乙醇，不同溶剂倍数：4、6、8、10、12倍体积，不同回流提取时间：0.5h、1.0h、1.5h、2h、2.5h，对芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷B II和黄芪甲苷提取率的影响；B、结合醇提的实际生产，确定提取次数为一次，最终设置因素水平为：乙醇浓度60％、70％、80％，加醇倍量6、8、10倍，提取时间1.5h、2.0h、2.5h、按L9(3)4正交设计实验表；C、结合各化合物对慢性心力衰竭的影响及各自对应药材在处方中的用量，加权评分法设定确定黄芪甲苷转移率、毛蕊异黄酮苷转移率、知母皂苷B II转移率、芒果苷转移率以及干膏率的权重系数；直观分析结果表明最佳因素水平组合；D、采用SPSS分析软件的一般线性模型进行方差分析，将得到的实验结果作为因变量，并把乙醇浓度、提取时间、甲醇倍数这三个条件设为固定因子，再在选择模型的构建项中把以上三个条件都以主效应放入模型，最后进行分析，结合正交分析的结果，可得最佳因素水平组合。4.根据权利要求1所述的升陷汤提取工艺的优选方法，其特征在于，所述的优选方法中，还包括对4个指标性成分的前处理和定量分析方法，通过HPLC
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DAD
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ELSD方法同时测定芒果苷、毛蕊异黄酮苷及知母皂苷B II的含量...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凤，庞涛，温燕，陈万生，孙连娜，孙美，范香成，黄豆豆，焦广洋，孙晨曦，赵梦沛，闻韬，
申请(专利权)人：上海长征医院，
类型：发明
国别省市：