聚集诱导发光配合物及制备方法、配合物体系、应用及应用方法技术

本发明专利技术公开了聚集诱导发光配合物及制备方法、配合物体系、应用及应用方法，其中配合物为阳离子型配合物或电中性配合物，至少包括中心金属原子和第一配体，第一配体包括二齿配体以及至少一个连接到二齿配体的聚集诱导发光基团，中心件原子选自铱、钌，二齿配体选自C^N二齿配体、N^N二齿配体；配合物其结构简式选自：自：自：其中，R选自四苯基乙烯、六苯基噻咯、DSA衍生物、三芳基取代烯烃；X为对离子，选自卤素离子、六氟磷酸根。本发明专利技术有效利用聚集诱导发光现象，通过优化的配合物结构，可以将AIE基团引入金属配合物用于蛋白染色，增强发光性能，提高检测灵敏度。提高检测灵敏度。提高检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
聚集诱导发光配合物及制备方法、配合物体系、应用及应用方法


[0001]本专利技术是关于生物分析
，特别是关于一种聚集诱导发光配合物及制备方法、配合物体系、应用及应用方法，尤其是聚集诱导发光环金属钌或铱配合物及其制备方法与作为蛋白染色剂的应用。

技术介绍

[0002]电泳作为一种重要的技术广泛应用于蛋白分析、药物开发等生物相关的领域中。利用电泳手段可以将蛋白质依据分子量的不同在十二烷基磺酸钠
‑
聚丙烯酰胺凝胶板(SDS
‑
PAGE)上分离出不同的条带。这些蛋白条带的可视化是进行后续蛋白质分析的前提和基础。
[0003]蛋白可视化方法目前包括比色法和荧光法两种。比色法所用的染料有硝酸银和考马斯亮蓝等，但是硝酸银与蛋白染色是通过不可逆的化学键结合，不利于后续的蛋白质的分析，同时银染法不易控制染色条件，对技术人员的操作水平要求较高；考马斯亮蓝的灵敏度较差。荧光法所用的染料包括小分子和金属配合物两大类，其中金属配合物发光染料以其稳定性较高，发光效率较高等优点在蛋白染色剂市场中占据重要地位；但是现有金属配合物稳定性较差，染色灵敏度偏低，大约在几百纳克，而且需要复杂的漂洗步骤。同时金属配合物在溶液浓度过高或分子发生聚集后,往往发生分子荧光猝灭，会严重影响灵敏度。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种聚集诱导发光配合物及制备方法、配合物体系、应用及应用方法，针对前述问题提出了一种改进方案。
[0005]为实现上述目的，本专利技术的实施例提供了聚集诱导发光配合物，为阳离子型配合物或电中性配合物，至少包括中心金属原子和第一配体，第一配体包括二齿配体以及至少一个连接到二齿配体的聚集诱导发光基团，中心件原子选自铱、钌，二齿配体选自C^N二齿配体、N^N二齿配体；配合物其结构简式选自：体、N^N二齿配体；配合物其结构简式选自：其中，聚
集诱导发光基团R选自四苯基乙烯、六苯基噻咯、DSA衍生物、三芳基取代烯烃；X为对离子，选自卤素离子、六氟磷酸根。
[0006]在本专利技术的一个或多个实施方式中，C^N二齿配体选自：
[0007]其中R`选自氢基、烷基、卤代基、氨基、硝基、磺酸基。
[0008]在本专利技术的一个或多个实施方式中，N^N二齿配体选自：
[0009][0010]在本专利技术的一个或多个实施方式中，配合物为：
[0011][0012]在本专利技术的一个或多个实施方式中，聚集诱导发光配合物的制备方法，包括如下步骤：以第一配合物和聚集诱导发光偶联化合物反应得到聚集诱导发光配合物；或者以第一金属配合物和聚集诱导发光偶联化合物反应后，再与第一化合物反应得到聚集诱导发光配合物；
[0013]其中：第一配合物选自第一金属配合物、中心金属的乙酰丙酮配合物；第一金属配合物是以中心金属化合物与二齿配体为原料制备，中心金属化合物选自三氯化钌三水合结晶化合物和三氯化铱三水合结晶化合物；聚集诱导发光偶联化合物是以聚集诱导发光化合物与二齿配体为原料制备，聚集诱导发光化合物选自如下化合物及其衍生物(衍生物优选为卤代物，如溴取代衍生物等)：为卤代物，如溴取代衍生物等)：二齿配体选自C^N二齿配体、N^N二齿配体；第一化合物选自溴化物、碘化物、六氟磷酸化合物。
[0014]具体地可以为如下三种方法所展示的任一路径：
[0015](1)以三氯化钌三水合结晶化合物与N^N二齿配体为原料制备过渡金属配合物或以三氯化铱三水合结晶化合物与C^N二齿配体为原料制备过渡金属氯桥化合物，这里的过渡金属配合物或过渡金属氯桥化合物即为前述第一金属配合物；以聚集诱导发光化合物与N^N二齿配体制为原料制备偶联化合物；然后以过渡金属配合物或过渡金属氯桥化合物、聚集诱导发光偶联化合物为原料制备聚集诱导发光环金属钌或铱配合物，即目标聚集诱导发光配合物；
[0016](2)以聚集诱导发光化合物与C^N二齿配体制为原料制备偶联化合物，然后以乙酰丙酮合铱Ir(acac)3与聚集诱导发光偶联化合物为原料制备环金属铱配合物，即目标聚集诱导发光配合物；
[0017](3)以三氯化钌三水合结晶化合物与N^N二齿配体为原料制备过渡金属配合物或以三氯化铱三水合结晶化合物与C^N二齿配体为原料制备过渡金属氯桥化合物，这里的过渡金属配合物或过渡金属氯桥化合物即为前述第一金属配合物；以聚集诱导发光化合物与N^N二齿配体制为原料制备偶联化合物；然后以过渡金属配合物或过渡金属氯桥化合物、聚集诱导发光偶联化合物为原料制备聚集诱导发光氯离子钌或铱配合物，再与溴化物、碘化物或者六氟磷酸化合物反应得到聚集诱导发光环金属钌或铱配合物，即目标聚集诱导发光配合物。
[0018]在本专利技术的一个或多个实施方式中，配合物体系，包括如前述聚集诱导发光配合物以及有机溶剂，其浓度为0.5μM
‑
5mM。这里的配合物体系可以直接用作染色液等；也可以用作母液，该母液用来配制染色液等。
[0019]在本专利技术的一个或多个实施方式中，有机溶剂选自二甲基亚砜、N,N
’‑
二甲基甲酰胺、甲醇。
[0020]在本专利技术的一个或多个实施方式中，聚集诱导发光配合物或配合物体系在蛋白染色中的应用。
[0021]在本专利技术的一个或多个实施方式中，聚集诱导发光配合物或配合物体系的蛋白染色方法，包括如下步骤：将蛋白经SDS
‑
PAGE后，在固定液中固定得到第一胶；第一胶经过漂
洗(漂洗可以采用10
‑
75v/v％乙醇)后置入染色液中完成染色，染色液包括如前述的聚集诱导发光配合物或如前述的配合物体系。
[0022]在本专利技术的一个或多个实施方式中，固定液为乙醇和乙酸的水溶液。优选的。固定液中乙醇的浓度为25
‑
35v/v％。优选的。固定液中乙酸的浓度为5
‑
15v/v％。优选的，固定液选择30％乙醇和10％乙酸的水溶液。
[0023]与现有技术相比，根据本专利技术实施方式的聚集诱导发光配合物及制备方法、配合物体系、应用及应用方法，可以作为蛋白染色剂时染色灵敏度高，可以达到ng水平，染色无须漂洗步骤，更节约时间；解决了现有技术需要漂洗、灵敏度低的缺陷；引入聚集诱导发光基团，解决了因浓度过高或分子聚集引起的荧光猝灭现象，显著提高了检测灵敏度。配合物制备方法简单，稳定性高，量子效率较高；用于凝胶测试时蛋白染色效果好，可以达到ng水平。
附图说明
[0024]图1为实施例十二中凝胶条带的荧光图；
[0025]图2为实施例十七中凝胶条带的荧光图；
[0026]图3为实施例十八中凝胶条带的荧光图；
[0027]图4为实施例二十一中凝胶条带的荧光图。
[0028]图5为实施例十二中聚集诱导发光金属配合物的荧光图。
[0029]图6为实施例十七中聚集诱导发光金属配合物的荧光图。
[0030]图7为实施例十八中聚集诱导发光金属配合物的荧光图。
[0031本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种聚集诱导发光配合物，为阳离子型配合物或电中性配合物，至少包括中心金属原子和第一配体，所述第一配体包括二齿配体以及至少一个连接到所述二齿配体的聚集诱导发光基团，所述中心件原子选自铱、钌，所述二齿配体选自C^N二齿配体、N^N二齿配体；所述配合物其结构简式选自：其中，聚集诱导发光基团R选自四苯基乙烯、六苯基噻咯、DSA衍生物、三芳基取代烯烃；X为对离子，选自卤素离子、六氟磷酸根。2.如权利要求1所述的聚集诱导发光配合物，其特征在于，所述C^N二齿配体选自：
其中R`选自氢基、烷基、卤代基、氨基、硝基、磺酸基。3.如权利要求1所述的聚集诱导发光配合物，其特征在于，所述N^N二齿配体选自：
4.如权利要求1
‑
3任一所述的聚集诱导发光配合物，其特征在于，所述配合物为：
5.如权利要求1
‑
4任一所述的聚集诱导发光配合物的制备方法，包括如下步骤：以第一配合物和聚集诱导发光偶联化合物反应得到所述聚集诱导发光配合物；或者以第一金属配合物和聚集诱导发光偶联化合物反应后，再与第一化合物反应得到所述
聚集诱导发光配合物；其中：所述第一配合物选自所述第一金属配合物、中心金属的乙酰丙酮配合物；所述第一金属配合物是以中心金属化合物与二齿配体为原料制备，所述中心金属化合物选自...

【专利技术属性】
技术研发人员：周宇扬，赵宜波，
申请(专利权)人：苏州科技大学，
类型：发明
国别省市：