转氨酶、固定化转氨酶及用于制备西他列汀的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种固定化转氨酶在制备西他列汀和/或(R)

【技术实现步骤摘要】
转氨酶、固定化转氨酶及用于制备西他列汀的用途


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种转氨酶、固定化转氨酶，以及该固定化转氨酶在制备西他列汀或其中间体中的应用，本专利技术还涉及一种西他列汀或其中间体的制备方法。

技术介绍

[0002]糖尿病是由于胰岛素分泌改变，导致胰岛素缺乏及作用减弱，或者胰岛素活性降低，或者在两者共同影响下，出现的代谢性疾病，以高血糖为特征，并同时伴有蛋白质、糖及脂肪的代谢紊乱。糖尿病及其并发症对人类健康的危害程度居心血管疾病、肿瘤之后的第三位，成为危害人类健康的重要疾病。在糖尿病的四种类型中，II型糖尿病占90％以上，多见于30岁以上的中老年人，病因主要是由于机体对胰岛素不敏感。
[0003]西他列汀磷酸盐(Sitagliptin phosphate)是2006年FDA批准上市的第一个二肽基酶
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IV(DPP
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4)抑制剂，用于治疗II型糖尿病。其单用或与二甲双胍、吡格列酮合用都有明显的降血糖作用，且服用安全，耐受性好，不良反应少。
[0004]美国专利US8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种固定化转氨酶在制备西他列汀和/或(R)
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氨基
‑1‑
吗啉
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(2,4,5
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三氟苯基)
‑1‑
丁酮中的用途；其中，所述固定化转氨酶包括树脂和转氨酶，所述转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49或其变体所示；所述变体为在如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的第241位的R突变为A、H、N、S、L、T、C或M；较佳地：所述变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:43所示；所述转氨酶的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48或SEQ ID NO:50所示；和/或，所述的转氨酶与所述树脂通过共价键合作用连接；和/或，所述的树脂为环氧树脂，优选为和/或，所述的制备中使用的反应溶剂为异丙醇水溶液，优选所述异丙醇水溶液中水的体积含量为2％～20％；和/或，所述制备的反应体系还包括转氨酶的辅助因子例如吡哆醛磷酸，其浓度优选为0.5～5mg/mL；和/或，所述固定化转氨酶中所述树脂上挂载的转氨酶浓度为150～300mg/g，例如250mg/g。2.一种固定化转氨酶，其特征在于，其包括树脂和转氨酶，所述转氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49或其变体所示；所述变体为在如SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的第241位的R突变为A、H、N、S、L、T、C或M；较佳地：所述变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:41或SEQ ID NO:43所示；所述转氨酶的核苷酸序列优选如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:48或SEQ ID NO:50所示；和/或，所述的转氨酶与所述树脂通过共价键合作用连接；和/或，所述的树脂为环氧树脂，优选为和/或，所述固定化转氨酶中所述树脂上挂载的转氨酶浓度为150～300mg/g，例如250mg/g。3.一种制备如权利要求2所述的固定化转氨酶的方法，其包括：1)使所述转氨酶的溶液和所述树脂接触反应以形成固定化转氨酶；2)过滤和冲洗所述固定化转氨酶；较佳地：所述转氨酶以转氨酶菌泥的形式存在，所述转氨酶菌泥与所述树脂的质量比为3:1～1:2，例如5:4；和/或，所述反应的温度为10～40℃，优选20～25℃；和/或，所述反应的时间为10～30h，优选20～25h；和/或，所述反应在搅拌下进行，所述搅拌的速率优选为50～300rpm，例如150或200rpm。4.一种制备西他列汀和/或(R)
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氨基
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吗啉
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(2,4,5
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三氟苯基)
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丁酮的方法，其包括在氨基供体存在时，在反应溶剂中用固定化转氨酶催化酮酰胺底物得西他列汀和/或(R)
‑3‑
氨基
‑1‑
吗啉
‑4‑
(2,4,5
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三氟苯基)
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【专利技术属性】
技术研发人员：焦琦，黄亚威，田振华，王舒，程占冰，孙传民，
申请(专利权)人：弈柯莱生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：