用于治疗家族性高胆固醇血症和低密度脂蛋白胆固醇升高的组合物和方法技术

提供了基因治疗组合物和方法，所述基因治疗组合物和方法用于靶向极低密度脂蛋白受体基因(VLDLR)和低密度脂蛋白受体基因(LDLR)，以降低患者中的总胆固醇和/或低密度脂蛋白胆固醇(LDL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗家族性高胆固醇血症和低密度脂蛋白胆固醇升高的组合物和方法


[0001]本专利技术部分涉及用于治疗和/或减轻与低密度脂蛋白胆固醇(LDL
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C)升高相关的疾病和疾患的方法、组合物和产品。
[0002]优先权
[0003]本申请要求2020年4月29日提交的美国临时专利申请号63/017,424的优先权和权益，所述申请的全部内容以引用的方式并入本文。
[0004]以电子方式提交的文本文件的描述
[0005]本申请含有通过EFS
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Web随此以电子方式提交的ASCI I格式的序列表。2021年4月28日创建的ASCI I拷贝名为SAL
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001PC_Sequence Listing_ST25.txt且大小为75,515字节。序列表以引用的方式整体并入本文。

技术介绍

[0006]家族性高胆固醇血症(FH)是一种常染色体显性遗传病，其是最常见的血脂异常之一且特征在于自出生以来高浓度的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇(LDL
‑
C)。它是发病率介于1:200
‑
1:250人之间的危及生命的疾患，其导致动脉粥样硬化加速和早发冠心病。参见Hopkins等人,J Clin Lipidol 2011；5:S9
‑
17；Talmud等人Curr Opin Lipidol 2014；25:274
‑
81。
[0007]胆固醇是重要的细胞组分，并且维持胆固醇稳态对正常生理功能至关重要。血浆胆固醇的水平升高与各种病理疾患相关，最显著的是冠心病，其中高胆固醇水平导致动脉中泡沫细胞形成和斑块积聚，可能导致心脏病发作或中风。细胞胆固醇代谢和血浆胆固醇水平的调控取决于低密度脂蛋白(LDL)受体介导的LDL摄取到特定细胞中。LDL是血液中胆固醇的主要载体，占总血浆胆固醇的超过60％。LDL通过由apoB
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100
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LDL受体相互作用触发的受体介导的内吞作用被肝脏和肝外组织吸收。内化的LDL颗粒被转运至溶酶体，在溶酶体中它被降解为游离胆固醇和氨基酸。在人中，肝脏是LDL分解代谢和LDL受体活性的最重要器官。在肝脏中，LDL可通过药物干预进行调控。通过肝组织摄取LDL的潜在机制尚不清楚。因此，LDL摄取及其调控是动脉粥样硬化及相关疾病的重要治疗靶标。
[0008]FH构成最严重的常见遗传性代谢疾病之一。尽管其高流行率，但FH仍然严重诊断不足和治疗不足。估计70％至95％的FH由三种基因(APOB、LDLR、原蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9(PCSK9))中的一者中的杂合致病性变体引起。低密度脂蛋白受体基因(LDLR)中的突变导致90％以上的病例。LDLR是参与低密度脂蛋白胆固醇(LDL
‑
C)的内吞作用的细胞表面蛋白受体。LDL
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C在细胞膜处结合后，它被细胞吸收并转运至溶酶体，在溶酶体中蛋白质部分被降解，并且胆固醇分子通过负反馈抑制进一步胆固醇合成。LDLR基因中的致病性变体减少细胞内产生的LDL受体的数量，或者破坏受体结合LDL
‑
c的能力。LDLR基因中的纯合FH(HoFH)和杂合FH(HeFH)致病性变体导致高水平的血浆LDL
‑
C和动脉粥样硬化。
[0009]纯合FH由三种基因(APOB、LDLR、PCSK9)中的一者中的双等位基因(纯合或复合杂
合)致病性变体引起。最初被描述为影响1:1,000,000的HoFH现在估计具有1:160,000至1:250,000的流行率。Cuchel等人Eur Heart J 2014；35:2146
‑
57。大多数患有HoFH的个体到其25岁左右经历严重冠状动脉疾病(CAD)。到青少年时期的死亡率或冠状动脉搭桥手术率较高，并且严重主动脉狭窄也是常见的。
[0010]FH的常规治疗通常涉及多种药理剂。例如，他汀类药物可有助于HeFH患者，但是，特别是对于患有HoFH的个体，应答通常减弱并且可能不足。他汀类药物在HoFH的治疗中可能相对无效，因为其功效在很大程度上取决于肝脏中功能性LDL受体的上调。此外，一些患者具有他汀耐受不良。在患有HoFH的个体中，LDL受体的两个拷贝的活性不存在或大大降低，并且HoFH的疗法除了使用多种其它药物外，通常还需要LDL单采血液成分术(机械过滤)。LDL单采血液成分术通常从年轻时开始需要，并且其使用由于提供这种程序的设施数量有限而加剧。在一些严重病例中，FH患者进行肝脏移植。
[0011]存在用于治疗FH和LDL
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C升高的患者的若干药物，包括洛美他派、米泊美生(KYNAMRO)和原蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/Kexin 9型(PCSK9)抑制剂(例如，英立西兰、依洛尤单抗(REPATHA)、阿利库单抗(PRALUENT))。然而，尽管目前的努力，在FH患者中LDL
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C水平和相关心血管发病率和死亡率仍然较高。FH通常需要终生降脂药物治疗，这对患者和医疗系统都是负担。
[0012]因此，仍然需要用于降低患者中的LDL
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C的改进地组合物和方法，从而改善患者的心血管健康。

技术实现思路

[0013]本专利技术提供了用于治疗和/或减轻患有家族性高胆固醇血症(FH)或LDL
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C升高的患者中的心血管事件的组合物和方法。本专利技术的组合物和方法利用包含转座子表达载体的基因转移构建体，所述转座子表达载体使用序列或基因座特异性转座(SLST)来纠正具有LDLR基因突变或LDL
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C升高的患者中的脂质代谢。以这种方式，本专利技术提供了用于恢复肝细胞中、纯合FH(HeFH)中、杂合FH(HoFH)患者中和LDL
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C升高患者中的LDL代谢的方式。本专利技术可用于治疗家族性高胆固醇血症、常见高胆固醇血症、甘油三酯升高、胰岛素抵抗、代谢综合征和以总胆固醇水平升高为特征的其它疾病。
[0014]因此，在一些方面，提供了一种包含基因转移构建体的组合物，所述组合物包含(a)编码极低密度脂蛋白受体(VLDLR)蛋白或低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白或其功能片段的核酸；(b)肝脏特异性启动子；和(c)非病毒载体，所述非病毒载体包含一个或多个转座酶识别位点和一个或多个反向末端重复序列(ITR)或末端序列。在实施方案中，这些构建体可与PCSK9 miRNA组合，以减少PCSK9的肝脏合成并上调LDL和VLDL受体两者。基因转移允许功能性VLDLR或LDLR的稳定位点特异性基因组整合。本专利技术的基因转移构建体允许降低总胆固醇水平，以由此治疗和/或减轻FH及其症状，并改善患者的总体心血管健康。
[0015]根据本公开的基因疗法可使用基于转座子的载体系统，在转座酶辅助下进行，所述转座酶与待转移的基因提供在同一载体上(顺式)或不同的载体上(反式)。基于转座子的载体系统可在肝脏特异性启动子控制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含基因转移构建体的组合物，所述组合物包含：(a)编码极低密度脂蛋白受体(VLDLR)蛋白或低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白或其功能片段的核酸；(b)肝脏特异性启动子；和(c)非病毒载体，所述非病毒载体包含一个或多个转座酶识别位点和一个或多个反向末端重复序列(ITR)或末端序列。2.如权利要求1所述的组合物，其中所述基因转移构建体包含DNA。3.如权利要求1或2所述的组合物，其中所述基因转移构建体是密码子优化的。4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述VLDLR蛋白是人VLDLR蛋白或其功能片段。5.如权利要求4所述的组合物，其中编码所述人VLDLR蛋白或其功能片段的所述核酸包含核苷酸序列，所述核苷酸序列编码SEQ IDNO:6的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少约90％、或至少约93％、或至少约95％、或至少约97％或至少约98％同一性的变体。6.如权利要求4所述的组合物，其中编码所述人VLDLR蛋白或其功能片段的所述核酸包含SEQ ID NO:4的核苷酸序列或SEQ ID NO:5的核苷酸序列，或与所述核苷酸序列具有至少约90％、或至少约93％、或至少约95％、或至少约97％或至少约98％同一性的变体。7.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述LDLR蛋白是人LDLR蛋白或其功能片段。8.如权利要求7所述的组合物，其中编码所述人LDLR蛋白或其所述功能片段的所述核酸包含编码蛋白质的核苷酸序列，所述蛋白质具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列或与所述氨基酸序列具有至少约90％、或至少约93％、或至少约95％、或至少约97％或至少约98％同一性的变体。9.如权利要求8所述的组合物，其中编码所述人LDLR蛋白或其所述功能片段的所述核酸包含SEQ ID NO:1的核苷酸序列或与所述核苷酸序列具有至少约90％、或至少约93％、或至少约95％、或至少约97％或至少约98％同一性的变体。10.如权利要求7或8所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:3的氨基酸序列，所述人LDLR蛋白或其功能片段包含选自L18F、K830R和C839A的一个或多个突变。11.如权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述肝脏特异性启动子是LP1启动子，任选是人LP1启动子，或者其中所述肝脏特异性启动子是表1的启动子。12.如权利要求11所述的组合物，其中所述LP1启动子包含：(a)人抗胰蛋白酶启动子、人ApoE/HCR1增强子和/或SV40内含子；和/或(b)SEQ ID NO:15的核酸序列或与所述核苷酸序列具有至少约60％、或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％、或至少约93％、或至少约95％、或至少约97％或至少约98％同一性的变体。13.如权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中所述非病毒载体是DNA质粒，并且任选地其中：所述DNA质粒包含防止或减轻邻近基因的激活或失活的一个或多个绝缘子序列。14.如权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中：所述ITR或所述末端序列是piggyBac样转座子的那些，任选地包含TTAA重复序列；并
且/或者所述I TR或所述末端序列位于编码所述VLDLR蛋白或所述LDLR蛋白或其功能片段的所述核酸侧翼。15.如权利要求1至14中任一项所述的组合物，所述组合物还包含编码靶向原蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexi n 9(PCSK9)的微小RNA的核酸构建体。16.如权利要求1至15中任一项所述的组合物，所述组合物还包含编码转座酶的核酸构建体，任选是编码所述转座酶的mRNA。17.如权利要求16所述的组合物，其中所述转座酶来源于小棕蝠。18.如权利要求1至15中任一项所述的组合物，所述组合物还包含编码转座酶的核酸构建体，任选是编码所述转座酶的DNA。19.如权利要求16至18中任一项所述的组合物，其中所述转座酶来源于家蚕、热带爪蟾、粉纹夜蛾、马铁菊头蝠、埃及果蝠、苍白矛吻蝠、大鼠耳蝠、小棕蝠、大狐蝠、库氏伏翼、黑猩猩、獒蝠或智人，并且/或者是其工程化型式，并且/或者其中所述转座酶特异性地识别所述ITR或所述末端序列。20.如权利要求1至19中任一项所述的组合物，其中所述组合物呈脂质纳米颗粒(LNP)的形式。21.如权利要求20所述的组合物，所述组合物包含选自以下的一种或多种脂质：1,2
‑
二油酰基
‑3‑
三甲基铵丙烷(DOTAP)、与二甲基氨基乙烷
‑
氨甲酰基混合的阳离子胆固醇衍生物(DC
‑
Chol)、磷脂酰胆碱(PC)、三油精(三油酸甘油酯)和1,2
‑
二硬脂酰
‑
sn
‑
甘油基
‑3‑
磷酸乙醇胺
‑
N
‑
[羧基(聚乙二醇)
‑
2000](DSPE
‑
PEG)、1,2
‑
二肉豆酰
‑
外消旋
‑
甘油基
‑3‑
甲氧基聚乙二醇
–
2000(DMG
‑
PEG 2K)和1,2二硬脂酰基
‑
sn
‑
甘油
‑
3磷酸胆碱(DSPC)，并且/或者包含选自以下的一种或多种分子：聚乙烯亚胺(PEI)和聚(乳酸
‑
共
‑
乙醇酸)(PLGA)和N
‑
乙酰半乳糖胺(GalNAc)。22.如权利要求1至21中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含额外治疗剂，其中所述额外治疗剂任选地选自以下中的一者或多者：他汀、依折麦布、胆汁酸结合树脂、依洛尤单抗、英立西兰、洛美他派和米泊美生，其中所述他汀任选地是以下中的一者或多者：阿托伐他汀(LIPITOR)、氟伐他汀(LESCOL)、洛伐他汀(ALTOCOR；ALTOPREV；MEVACOR)、匹伐他汀(LIVALO)、普伐他汀(PRAVACHOL)、瑞舒伐他汀钙(CRESTOR)和辛伐他汀(ZOCOR)。23.一种分离的细胞，所述分离的细胞包含权利要求1至21中任一项所述的组合物。24.一种用于降低患者中的总胆固醇和/或低密度脂蛋白胆固醇(LDL
‑
C)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用权利要求1至21中任一项所述的组合物。25.一种用于降低患者中的总胆固醇和/或低密度脂蛋白胆固醇(LDL
‑
C)的方法，所述方法包括：(a)使从患者获得的细胞与权利要求1至21中任一项所述的组合物接触；以及(b)将所述细胞施用于有需要的患者。26.如权利要求24或25所述的方法，其中所述方法改善所述患者的心血管健康。27.如权利要求24或25所述的方法，其中相对于在没有所述施用的情况下总胆固醇和/或LDL
‑
C的水平，所述方法提供总胆固醇和/或LDL
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C的大于约40％、或大于约50％、或大于约60％、或大于约70％、或大于约80％或大于约90％降低。
28.如权利要求24或25所述的方法，其中所述方法将血清LDL
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C水平降低至小于500mg/dL(小于约13mmol/L)。29.如权利要求24至28中任一项所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：萨利欧基因治疗公司，
类型：发明
国别省市：