含有来自于脂肪源性干细胞的调制培养基的蛋白质浓缩物的美容组合物制造技术

提供了从脂肪源性干细胞的调制培养基制备的抗衰老美容组合物。所述美容组合物优选为即混型组合物，其包含两种独立组分：充当所述产品的美容活性成分的干燥形式的蛋白质组分，其包含从脂肪源性干细胞调制培养基纯化的蛋白质级分；重构组分，用于在即将施用到皮肤之前重构所述冻干的蛋白质组分。前重构所述冻干的蛋白质组分。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有来自于脂肪源性干细胞的调制培养基的蛋白质浓缩物的美容组合物


[0001]本专利技术涉及从脂肪源性干细胞的调制培养基制备的抗衰老美容产品，其特别有效并且还具有长保质期和长期稳定性的特征。本专利技术的抗衰老美容产品是基于从所述调制培养基纯化并用美容赋形剂配制的蛋白质浓缩物。本专利技术的美容产品可以被提供为双组分美容组合物，其包含干燥形式的源自于所述调制培养基的蛋白质组合物以及用于在使用前重构的重构介质。

技术介绍

[0002]皮肤衰老的特征在于老年斑、细纹和皱纹、体积和弹性减少以及皮肤质地的变化。
[0003]各种不同的非处方抗衰老美容产品可用于改善诸如肤色、皮肤外观等的参数，并维持更健康、外表更年轻的皮肤。这些产品通常含有脂肪酸和醇类，各种不同的维生素和维生素衍生物，填充剂例如胶原蛋白和透明质酸，以及植物提取物。随着化妆品工业的发展，新的美容成分被开发出来。
[0004]已开发出基于干细胞调制培养基的抗衰老美容组合物，包括精华素、霜剂、乳液、爽肤水和清洁剂。此类产品被综述在例如Amirthalingam和Seetharam(2016)MJMS.,1(2):46
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52中。其他的示例性产品包括ADIOStem
TM
(Celprogen Inc.)，它是一种含有脂肪源性干细胞调制培养基、纯化水和甘油的保湿霜(产品说明书，www.celprogen.com)。
[0005]EP 2257272公开了一种对个体皮肤老化进行美容性预防或治疗的方法，所述方法包括向所述个体施用美容活性量的牙龈成纤维细胞衍生的产品，例如牙龈成纤维细胞全细胞、牙龈成纤维细胞培养物和牙龈成纤维细胞调制培养基。
[0006]US 7,160,726公开了组合物，其包含由在三维培养中生长的细胞特别是真皮成纤维细胞、角化细胞、上皮细胞、软骨细胞、平滑肌细胞和肌细胞调制的细胞培养基。所述调制细胞培养基可用于美容应用、药妆应用和药物应用等中的至少一者。
[0007]US 8,101,167公开了至少一种调制细胞培养基或其提取物的用途，其用于制备用于治疗炎症和/或免疫紊乱的症状的组合物，所述培养基能够通过与消化道细胞的至少一种培养物和至少一种益生微生物接触来获得。
[0008]US 8,361,485公开了调制细胞培养基组合物和使用方法。所述培养基可以用基质细胞、实质细胞、间充质干细胞、肝储备细胞、神经干细胞、胰腺干细胞和/或胚胎干细胞调制。所述细胞可以被遗传修饰。三维组织构建物是优选的。所述调制培养基的物理实施方式包括液体或固体、冷冻、冻干或干燥成粉剂。将所述培养基与可药用载体一起配制作为内部给药的载体，直接施用到食品或产品，与药膏或软膏一起配制用于局部施用，或者例如制成手术胶或添加到手术胶中以加速侵入性手术后缝合处的愈合。所述培养基可以被进一步加工以浓缩或减少所述培养基中包含的一种或多种因子或组分。
[0009]US 8,586,540公开了用于羊水中的胎儿来源的间充质干细胞的培养基。还公开了一种用于改善皮肤病症的组合物，其包含所述羊水中的胎儿来源的间充质干细胞的培养基
作为活性成分，其中所述待改善的皮肤病症包括变白、皱纹、由紫外线引起的皮肤损伤或皮肤提升。
[0010]US 9,109,045公开了一种能够通过在适合的培养基和条件下培养从人类脂肪细胞提取的脂肪源性干细胞来大量合成人类生长因子的方法。此外，根据所述专利技术的方法生产的干细胞培养基和从所述培养基分离的人类生长因子可以有利地用作药物和化妆品的原材料。
[0011]转让给本专利技术的申请人的WO 2018/211498尤其公开了用于获得脂肪源性干细胞(ADSC)的方法，其与目前使用的方法相比成本效益更高并提供更高的产率。
[0012]大多数美容产品、特别是基于天然存在的成分的美容产品具有有限的保质期和稳定性，并且通常一旦打开在室温下最多只能保存12个月，在许多情况下最多只有6个月。
[0013]对于对嫩肤、改善皮肤外观、肤色等有效且有用，并且还具有在各种不同储存条件下具有长保质期和改善的稳定性的特征的美容组合物，存在着需求。

技术实现思路

[0014]本专利技术提供了从脂肪源性干细胞的调制培养基制备的抗衰老美容组合物。本专利技术的美容组合物是基于从所述调制培养基纯化并用美容赋形剂配制的蛋白质浓缩物。在某些实施方式中，本专利技术的美容组合物被提供成即混型组合物，其包含两种分开的组分：干燥(例如冻干)形式的蛋白质组分，其充当所述产品的美容活性成分，包含从脂肪源性干细胞调制培养基纯化的蛋白质级分；和重构组分，用于在即将施用到皮肤之前重构所述干燥的蛋白质组分。所述两种组分在生产、运输和储存期间保持分开，并在使用之前直接混合。通过提供由两种分开的组分构成的产品(所述组分是稳定的并在即将使用前混合以形成用于局部施用的组合物)，本专利技术克服了美容组合物的不稳定性和保质期有限的问题。
[0015]有利的是，保持所述干燥的蛋白质组合物与所述重构介质分开作为两种独立组分，即使在升高的湿度和/或温度条件下也提供引人注目的稳定性，同时维持所述活性蛋白质级分的效力。正如下文中示例的，稳定性测定显示所述干燥的蛋白质组合物和重构组合物当在40℃/75％RH下储存时至少6个月都是稳定的，这等同于在室温下的标准储存条件下至少1.5年的保质期。
[0016]根据本专利技术的某些实施方式，所述蛋白质级分从用脂肪源性干细胞调制的细胞培养基纯化，所述脂肪源性干细胞在含血清培养基中生长，随后在无血清培养基中生长至少48小时，然后收集所述培养基。所述蛋白质级分通过浓缩所述调制培养基并除去小于1kDa的组分来获得。在某些实施方式中，所述蛋白质级分通过除去小于3kDa的组分来获得。优选地，所述蛋白质级分用美容赋形剂配制并且基本上不含所述细胞培养基的组分。
[0017]在某些示例性实施方式中，所述蛋白质级分通过使用具有适合的分子量截留值(例如1kDa或3kDa)的切向流过滤(TFF)浓缩和过滤所述调制培养基，以获得作为渗余物的蛋白质级分来获得。在某些实施方式中，将所述得到的蛋白质级分针对包含可美容用赋形剂的水性制剂渗滤，以获得从细胞培养基组分纯化并用所述美容赋形剂配制的蛋白质级分。
[0018]正如下文中示例的，所述用美容赋形剂配制的蛋白质级分基本上不含所述细胞培养基的组分，例如各种不同的金属。有利情况下，所述配制的蛋白质级分也基本上不含在干
细胞生长期间使用的任何抗生素。这与以前描述的基于调制培养基的美容产品相反，在以前的产品中收集调制培养基并用各种不同的赋形剂配制，而不对培养基组分进行任何纯化或分离。
[0019]正如下文中示例的，发现根据本专利技术的蛋白质级分在体外有效提高人类角化细胞的生存力并诱导其增殖。当人类受试者使用时，发现在将根据本专利技术的干燥的蛋白质组分与重构介质混合后获得的重构美容组合物是安全且无刺激的，并且此外在使用6周后已显示出更光滑的皮肤和皱纹深度的减小。在使用12周后也观察到皱纹深度的减小。此外，在使用6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种粉剂形式的美容组合物，其包含从人类脂肪源性干细胞调制培养基纯化的干燥的蛋白质级分和至少一种可美容用赋形剂，其中所述蛋白质级分包含在除去小于1kDa的组分后剩余的蛋白质和粒子。2.权利要求1所述的美容组合物，其中所述蛋白质级分包含在除去小于3kDa的组分后剩余的蛋白质和粒子。3.权利要求1或权利要求2所述的美容组合物，其包含至少109个外泌体/mg蛋白质。4.前述权利要求中的任一项所述的美容组合物，其中所述蛋白质级分基本上不含所述人类脂肪源性干细胞所生长的细胞培养基的组分。5.前述权利要求中的任一项所述的美容组合物，其中将所述人类脂肪源性干细胞在含血清培养基中生长至少24小时，随后在无血清培养基中生长至少48小时，然后收集所述培养基。6.前述权利要求中的任一项所述的美容组合物，其中所述干燥的蛋白质级分是冻干的蛋白质级分。7.前述权利要求中的任一项所述的美容组合物，其中所述组合物的蛋白质含量为至少0.2μg/mg粉剂。8.前述权利要求中的任一项所述的美容组合物，其中所述组合物含有少于5％wt的残留水。9.前述权利要求中的任一项所述的美容组合物，其通过包括下述步骤的方法获得：(a)获得人类脂肪源性干细胞(hADSC)；(b)将所述hADSC在含血清培养基中培养至少24小时；(c)将所述hADSC在无血清培养基中传代培养至少48小时以获得调制培养基；(d)分离所述hADSC和细胞碎片并收集所述调制培养基；(e)使用切向流过滤(TFF)浓缩并过滤所述调制培养基，以除去小于1kDa的组分并获得作为渗余物的蛋白质级分；(f)使用包含至少一种可美容用填充剂和任选的至少一种另外的可美容用赋形剂的水性制剂渗滤所述蛋白质级分，以获得从细胞培养基组分纯化并用所述水性制剂配制的蛋白质级分；以及(g)干燥所述得到的蛋白质级分。10.前述权利要求中的任一项所述的美容组合物，其通过包括下述步骤的方法获得：(a)获得人类脂肪源性干细胞(hADSC)；(b)将所述hADSC在含血清培养基中培养至少24小时；(c)将所述hADSC在无血清培养基中传代培养至少48小时以获得调制培养；(d)分离所述hADSC和细胞碎片并收集所述调制培养基；(e)使用切向流过滤(TFF)浓缩并过滤所述调制培养基，以除去小于3kDa的组分并获得作为渗余物的蛋白质级分；(f)使用包含至少一种可美容用填充剂和任选的至少一种另外的可美容用赋形剂的水性制剂渗滤所述蛋白质级分，以获得从细胞培养基组分纯化并用所述水性制剂配制的蛋白质级分；以及(g)干燥所述得到的蛋白质级分。11.权利要求9或权利要求10所述的美容组合物，其中所述水性制剂包含2％
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10％(w/v)之间的所述至少一种填充剂。12.权利要求11所述的美容组合物，其中所述填充剂包含甘露醇。13.权利要求9
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12中的任一项所述的美容组合物，其中所述水性制剂还包含至少一种稳定剂和至少一种张度剂。14.权利要求13所述的美容组合物，其中所述水性制剂包含0.01
‑
1％(w/v)之间的所述
至少一种稳定剂。15.权利要求13或权利要求14所述的美容组合物，其中所述至少一种稳定剂包含EDTA。16.权利要求13
‑
15中的任一项所述的美容组合物，其中所述水性制剂包含0.1
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1％(w/v)之间的所述至少一种张度剂。17.权利要求13
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16中的任一项所述的美容组合物，其中所述至少一种张度剂包含氯化钠。18.前述权利要求中的任一项所述的美容组合物，其中所述培养基通过由包含下述步骤的方法获得的人类脂肪源性干细胞来调制：(a)将脂肪抽吸物冷冻；(b)将所述脂肪抽吸物解冻并使用组织解离酶或通过机械破碎进行解离；(c)通过离心使包含ADSC的细胞级分沉淀，并任选地用能够支持细胞生存的悬浮介质清洗所述沉淀物并对所述悬液进行至少一次另外的离心；(d)将所述在步骤(c)中得到的沉淀物重悬于能够支持细胞生存的悬浮介质中，并从所述重悬的沉淀物中的细胞群体选择ADSC；(e)在所述ADSC选择之前任选地进行至少一次过滤；以及(f)任选地将所述ADSC培养至少3次传代。19.前述权利要求中的任一项所述的美容产品，其中所述培养基通过人类脂肪源性干细胞的群体调制，所述群体的特征在于至少90％的细胞阳性表达CD73、CD90和CD105，并且少于5％的细胞阳性表达CD45。20.一种改善至少一种与衰老相关的皮肤病症的方法，所述方法包括：提供前述权利要求中的任一项所述的美容组合物；重构所述组合物以获得适合于施用到皮肤的组合物；以及施用到皮肤。21.一种双组分美容产品，其包含下述组合物作为分开的即混型组合物：(a)粉剂形式的干燥的蛋白质组合物，其包含从人类脂肪源性干细胞调制培养基纯化的蛋白质级分和至少一种可美容用赋形剂，其中所述蛋白质级分包含在除去小于1kDa的组分后剩余的蛋白质和粒子；和(b)水性重构组合物，其包含水和至少一种可美容用赋形剂，用于重构所述冻干的蛋白质组合物以形成适合于局部施用到受试者皮肤的组合物，其中所述两种组分保持分开并在使用前混合。22.权利要求21所述的美容产品，其中所述蛋白质级分包含在除去小于3kDa的组分后剩余的蛋白质和粒子。23.权利要求21或权利要求22所述的美容产品，其中所述干燥的蛋白质组合物包含至少109个外泌体/mg蛋白质。24.权利要求21
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23中的任一项所述的美容产品，其中所述蛋白质级分基本上不含所述人类脂肪源性干细胞所生长的细胞培养基的组分。25.权利要求21
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24中的任一项所述的美容产品，其中将所述人类脂肪源性干细胞在含血清培养基中生长至少24小时，随后在无血清培养基中生长至少48小时，然后收集所述培养基。26.权利要求21
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25中的任一项所述的美容产品，其中所述干燥的蛋白质组合物的蛋白质含量为至少0.2μg/mg粉剂。27.权利要求21...

【专利技术属性】
技术研发人员：约纳，
申请(专利权)人：干细胞医药有限公司，
类型：发明
国别省市：