一种细胞培养基质制造技术

本发明专利技术解决了目前细胞培养基质不能完全模拟细胞生长微环境的问题，提供了一种最接近人体细胞生长所需微环境的基质，有利于体外细胞的培养和分化，一种细胞培养基质，其特征在于，包括：10

【技术实现步骤摘要】
一种细胞培养基质


[0001]本专利技术涉及生物材料领域，具体涉及一种细胞培养基质。

技术介绍

[0002]细胞培养技术已广泛应用于科研、生产和临床应用,正在发挥着日益重要的作用。细胞培养中除了对培养容器、培养基、温度、溶氧和pH等有精确的要求外，用于对支持细胞贴壁生长的细胞培养基质载体有着更高的要求。细胞培养基质载体对获得优异的科研、生产和临床应用效果起着关键作用，对于优质高效的细胞培养基质载体，有着越来越紧迫的需求。传统的细胞培养基质材料主要包括天然、合成和半合成材料。天然材料由于具有良好的细胞相容性，为目前主要研究对象。细胞培养过程要求能尽量模拟体内生长所需要的微环境，尤其是生物微环境。近年来人们主要应用胶原蛋白、Matrigel等基质进行细胞培养，相对于合成材料而言，这些材料在生物活性成分上有了一定改进，在科研、生产和临床应用中都获得了一定的效果。但是考虑到人体微环境的复杂性，这些细胞培养基质材料在模拟生物微环境方面，距离理想的生物微环境尚远，仍有很大的提升空间。
[0003]以Matrigel为例，Matrigel是由富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中分离获得，其主要成分由层粘连蛋白，Ⅳ型胶原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等组成，还包含生长因子和基质金属蛋白酶等。一方面matrigel来源于小鼠肿瘤组织，可能具备一定的肿瘤组织特异性成分，另一份其生物活性成分不够丰富，难以很好地模拟细胞生长所需要的微环境。因此，专利技术人认为，目前还缺乏一种能够较完全模拟细胞体内生长微环境的基质产品用于细胞的体外培养。r/>
技术实现思路

[0004]本专利技术解决了目前细胞培养基质不能完全模拟细胞生长微环境的问题，提供了一种最接近人体细胞生长所需微环境的基质，有利于体外细胞的培养和分化。
[0005]根据本专利技术的第一个方面，提供了一种细胞培养基质，其特征在于，包括：10
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30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5
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10wt％脱细胞羊膜基质、60
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80wt％胶原蛋白I型。
[0006]进一步地，所述的小肠粘膜来源包括：猪、牛、羊。
[0007]进一步地，所述的脱细胞小肠粘膜下层基质与脱细胞羊膜基质的制备方法包括以下步骤：
[0008]步骤一：化学萃取，取动物小肠粘膜下层/羊膜，依次使用Triton X100、脱氧胆酸钠水溶液对其进行化学萃取，用蒸馏水漂洗后冻干；
[0009]步骤二：粉碎消化，冻干后使用迷离粉碎机粉碎，获得脱细胞猪小肠粘膜下层基质粉末，将粉末置于胃蛋白酶的盐酸溶液中消化，其中，基质粉末与胃蛋白酶的质量比为10:1，直至基质粉末溶液变为均匀、半透明态；
[0010]步骤三：冻干，超速离心除去未消化的颗粒物，得到的消化液在
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40℃下冻存，冷冻干燥后获得脱细胞小肠粘膜下层/羊膜基质。
[0011]根据本专利技术的第二个方面，提供了一种细胞培养基质，其特征在于，由80wt％的胶原蛋白I型、10wt％的脱细胞猪小肠粘膜下层基质和10wt％的脱细胞羊膜基质组成。
[0012]本专利技术的有益效果如下：
[0013](1)本专利技术相对于现有细胞培养基质具有丰富的细胞生长所需各种生长因子，利用细胞粘附、增殖；
[0014](2)本专利技术相对于现有细胞培养基质具有具有促血管化再生的生长因子，利用后期组织培养的血管再生；
[0015](3)本专利技术相对于现有细胞培养基质含有具有免疫特性脱细胞羊膜基质，利于组织培养及临床应用。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图
[0017]图1为本专利技术实施例的细胞增殖比较图；
[0018]图2为本专利技术实施例心肌细胞免疫荧光照片。
具体实施方式
[0019]为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获的的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0020]本专利技术提供一组不同配比的细胞培养基质的实施例，由此确定其各组份的使用范围，其配方遵循如下的内容：
[0021]一种细胞培养基质，由10
‑
30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5
‑
10wt％脱细胞羊膜基质、60
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80wt％胶原蛋白I型组成。
[0022]其中，胶原蛋白I型为市场购买产品；但是，脱细胞小肠粘膜下层基质和脱细胞羊膜基质是专利技术人基于其对脱细胞技术的研究特别研发的制备方法，其具体步骤以及试剂使用的最佳用量如下：
[0023]骤一：化学萃取，取动物小肠粘膜下层/羊膜，依次使用Triton X100、脱氧胆酸钠水溶液对其进行化学萃取，用蒸馏水漂洗后冻干；
[0024]步骤二：粉碎消化，冻干后使用迷离粉碎机粉碎，获得脱细胞猪小肠粘膜下层基质粉末，将粉末置于胃蛋白酶的盐酸溶液中消化，其中，基质粉末与胃蛋白酶的质量比为10:1，直至基质粉末溶液变为均匀、半透明态；
[0025]步骤三：冻干，超速离心除去未消化的颗粒物，得到的消化液在
‑
40℃下冻存，冷冻干燥后获得脱细胞小肠粘膜下层/羊膜基质。
[0026]上述提到的小肠粘膜下层取自猪或者羊或者牛或者其他动物。
[0027]为了获得各优选组份以及优选的使用量，设计多个实施例进行相关实验验证，实施例具体如下：
[0028][0029]需要进一步说明的是，各实施例涉及的细胞培养基质是如何达到既提供细胞生长微环境又同时具有抗菌及抑制降解的功能的，其主要是专利技术人基于各组份的功能进行具体试剂选择、配比研究以及功效验证，其组份的功能如下：
[0030]胶原蛋白I型:胶原蛋白I型是细胞外基质的主要成分，主要提供细胞培养的蛋白质结构支架，为细胞培养提供主要的结构性基质，为细胞培养提供最基本的微环境。
[0031]脱细胞小肠粘膜下层基质：主要为细胞培养的促血管化成分支持及提供特异性血管化再生因子，为细胞培养提供主要的血管化活性基质及抗菌特性。SIS中含有多种生长因子，主要包括成纤维细胞生成因子(FGF
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2)、转化生长因子(TGF
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β)和血管内皮生长因子(VEGF)等，尤其是血管内皮生长因子(VEGF)等促血管化相关因子，对于细胞培养及后续组织培养过程中血管形成具有关键作用。
[0032]脱细胞羊膜基质：主要为细胞培养提供最丰富复合生长因子支持，及提供免疫抑制特性。脱细胞羊膜基质富含各类生长因子，包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞培养基质，其特征在于，包括：10
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30wt％脱细胞小肠粘膜下层基质、5
‑
10wt％脱细胞羊膜基质、60
‑
80wt％胶原蛋白I型。2.根据权利要求1所述的细胞培养基质，其特征在于，所述的小肠粘膜来源包括：猪、牛、羊。3.根据权力要求1所述的细胞培养基质，其特征在于，所述的脱细胞小肠粘膜下层基质与脱细胞羊膜基质的制备方法包括以下步骤：步骤一：化学萃取，取动物小肠粘膜下层/羊膜，依次使用Triton X100、脱氧胆酸钠水溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨习锋，陈诗浩，曾晨光，周启明，丁雪玲，
申请(专利权)人：广州新诚生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：