一种化合物在制备治疗肝癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种化合物在制备治疗肝癌药物中的应用，属于生物医药技术领域，本发明专利技术通过对化合物蛇菰素B影响小鼠肝癌细胞Hepa1

【技术实现步骤摘要】
一种化合物在制备治疗肝癌药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及化合物蛇菰素B在制备治疗肝癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]肝癌是全球常见的恶性肿瘤，其发病率与死亡率居高不下，并且一直呈上升趋势。根据世界癌症研究机构公布的数据，每年因肝癌死亡的患者达到60万。肝细胞癌(HCC)是原发性肝癌的主要病理类型，HCC的发生与慢性肝炎病毒感染、致癌物长期暴露、过度饮酒、非酒精性脂肪肝、血色素沉着症等因素有关。传统的治疗方法如手术切除、系统化疗和局部消融等有效地解决局部病变，然而并不能完全消除残留的癌细胞，这些残留的癌细胞会导致肿瘤的复发和转移。肝癌近年发病率有升高的趋势，且预后较差，如何改善患者预后仍在不断探索，且治疗方案尚无共识，因此进一步开发肝癌治疗药物或寻找更多新型药物治疗靶点的工作日渐凸显重要性。

技术实现思路

[0003]本专利技术目的是提供化合物蛇菰素B在制备治疗肝癌药物中的应用，化合物蛇菰素B如式1所示：
[0004][0005]本专利技术通过对小鼠肝癌细胞Hepa1
‑
6细胞的活性测试、集落形成能力，以及凋亡水平测定，发现化合物蛇菰素B在50μM的浓度下对于Hepa1
‑
6细胞的活力抑制率为44％。实验结果表明：化合物蛇菰素B具有显著的肝癌细胞毒活性。因此，化合物蛇菰素B能应用于制备抗肝癌的药物，特别是对肝癌细胞Hepa1
‑
6具有细胞毒活性的药物。
[0006]因此，本专利技术提供了化合物蛇菰素B在制备治疗肝癌药物中的应用。
[0007]所述的治疗肝癌药物是对肝癌细胞Hepa1
‑
6细胞具有毒活性的药物。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供一种治疗肝癌药物，其特征在于，含有有效量的化合物蛇菰素B作为活性成分
[0009]本专利技术的第三个目的是提供化合物蛇菰素B在制备通过抑制细胞能量代谢发挥作用的药物中的应用。
[0010]本专利技术的第四个目的是提供一种细胞能量代谢抑制剂的药物，其特征在于，含有有效量的化合物蛇菰素B作为活性成分。
[0011]本专利技术公开了化合物蛇菰素B在制备治疗肝癌药物中的应用。本专利技术通过对化合物蛇菰素B影响肝癌Hepa1
‑
6细胞的实验发现，化合物蛇菰素B可以抑制Hepa1
‑
6细胞的糖酵
解水平和葡萄糖摄取，影响糖酵解储备能力，从而加重细胞能量危机，最后导致细胞的生命活动受到不可逆转的破坏。因此，化合物蛇菰素B能应用于制备肝癌能量代谢抑制剂的药物中。本专利技术为研究与开发新的抗肝癌药物提供了候选药物。
[0012]附图说明(**p<0.01，*p<0.05)：
[0013]图1是化合物蛇菰素B对小鼠肝癌Hepa1
‑
6细胞活性的影响。
[0014]图2是化合物蛇菰素B对小鼠肝癌Hepa1
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6细胞集落形成能力的影响。
[0015]图3是化合物蛇菰素B对小鼠肝癌Hepa1
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6细胞凋亡的影响。
[0016]图4是化合物蛇菰素B对小鼠肝癌Hepa1
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6细胞胞外酸化率的影响。
[0017]图5是化合物蛇菰素B对小鼠肝癌Hepa1
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6细胞糖酵解能力的影响。
[0018]图6是化合物蛇菰素B对小鼠肝癌Hepa1
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6细胞葡萄糖摄取的影响。
[0019]图7是化合物蛇菰素B对Hepa1
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6细胞荷瘤小鼠肿瘤体积的影响。
[0020]图8是化合物蛇菰素B对Hepa1
‑
6细胞荷瘤小鼠生存期的影响。
具体实施方式：
[0021]以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制。
[0022]本研究采用细胞为：小鼠肝癌Hepa1
‑
6细胞。细胞接种于含10％FBS的DMEM基础培养基常规培养，培养条件为37℃，5％CO2。
[0023]实施例1：
[0024]利用噻唑蓝(MTT)检测化合物蛇菰素B对小鼠肝癌细胞Hepa1
‑
6细胞的活性影响。收集对数期Hepa1
‑
6细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100uL，铺板使待测细胞调密度至1000
‑
10000孔，(边缘孔用无菌PBS填充)；在5％CO2，37℃条件下孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，加入梯度浓度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药；5％CO2，37℃孵育24小时，倒置显微镜下观察；每孔加入20uL MTT溶液(5mg/mL，即0.5％MTT)，继续培养4h；终止培养，小心吸去孔内培养液；每孔加入二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解；在酶联免疫检测仪OD490 nm处测量各孔的吸光值。
[0025]实验结果如图1所示，化合物蛇菰素B对小鼠肝癌细胞Hepa1
‑
6细胞具有较强的细胞毒性，随着化合物蛇菰素B的浓度增加，Hepa1
‑
6细胞活性显著降低，50μM化合物蛇菰素B处理后，细胞活性降低到空白组的56％。
[0026]实施例2：
[0027]取出贴壁率＞90％的细胞(处于对数生长期)消化离心，重悬细胞并进行细胞计数；6孔板种板，实验分组，每个孔中加入1000个细胞，放入培养箱培养；培养一周后，当肉眼可见集落形成时，取出6孔板，弃除培养液，每孔加入2mL甲醇固定30min，弃除甲醇，每孔加入0.1％结晶紫染色3min，然后清洗掉结晶紫，数码相机拍照，光镜下计数集落。
[0028]实验结果如图2所示，蛇菰素B明显抑制小鼠肝癌细胞的集落形成。
[0029]实施例3：
[0030]采用AnnexinV
‑
FITC/PI双染法，通过流式细胞仪分析化合物蛇菰素B处理Hepa1
‑
6细胞24h后的细胞凋亡情况。将Hepa1
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6细胞以每孔7
×
105的数量接种于6孔板中，过夜培养贴壁后，加入含蛇菰素B的完全培养液继续培养。24h后，收集细胞和上层清液。离心洗涤细胞两次后，将细胞重悬于100μL binding buffer中，加入5μL AnnexinV
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FITC，室温下孵化
30min后，再继续加入5μL PI染液，于暗处室温孵化15min。最后，补加400μL binding buffer缓冲液到细胞悬液中，混匀后用流式进行凋亡检测，并用FlowJo软件进行数据处理。本实验设置两个DMSO对照孔，其中一个对照孔细胞经55℃水浴15min后一分为二，分别用于AnnexinV
‑
FITC和PI单染，以供调节补偿用。
[0031]实验结果如图3，50μM化合物蛇菰素B处理后，细胞凋亡水平可从空白组的7.78本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化合物在制备治疗肝癌药物中的应用，其特征在于，所述化合物的结构式如式I所示：2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的治疗肝癌药物是对小鼠肝癌细胞Hepa1
‑
6细胞具有细胞毒作用的...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋捷，宁青，钟荣玲，夏智，
申请(专利权)人：江苏省中医药研究院，
类型：发明
国别省市：