一种粪便免核酸提取样本释放剂制造技术

本发明专利技术“一种粪便免核酸提取样本释放剂”属于分子生物学技术领域，公开了一种可以新型的无需进行后续核酸提取又能直接作用于粪便样本PCR检测的样本释放剂，且裂解后的粪便样本中的核酸可以稳定的保存的样本释放剂的制备及使用方法,该样本释放剂包含了Tween

【技术实现步骤摘要】
一种粪便免核酸提取样本释放剂


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种新型的无需进行后续核酸提取又能直接作用于粪便样本PCR检测的样本释放剂，且裂解后的粪便样本中的核酸可以稳定的保存的样本释放剂的制备及使用方法。

技术介绍

[0002]近年来，肠道微生物以及脱落细胞的研究正在成为研究热点，如肠道内的益生菌和有害菌的检测、肿瘤脱落细胞的检测等等。
[0003]对于肠道微生物及脱落细胞涉及的检测方法和手段也很多，如传统的分离培养、基因组测序，扩增子测序以及荧光定量PCR。其中，绝大多数的研究和应用集中在病原微生物的检测和肿瘤脱落细胞的检测。
[0004]荧光定量PCR由于相对费用低廉、检测时长较短，因此目前所采用的方法也多是荧光PCR法，该方法首先通过收集受试者的粪便，提取其中的核酸，然后再进行后续的PCR检测。但由于粪便中含有大量的PCR抑制剂，如胆盐和多糖物质，这些物质的去除依赖于专门的商用试剂盒，不仅费用昂贵，操作复杂，而且效果不太理想。
[0005]市面上的商用试剂盒多采用磁珠法进行提取粪便中的核酸，还可以选择柱体法进行提取粪便中的核酸，因为粪便中的成分极其复杂，目前尚未出现可以直接对粪便样本进行直接处理的方法。
[0006]综上可知，现有的方法操作繁琐，耗时长且不能直接对粪便样本进行免核酸提取，显然存在明显的缺陷与不便，所以有必要加以改进。

技术实现思路

[0007]为解决上述技术的不足，我们专利技术了一种可以直接处理粪便进行PCR检测的样本释放剂，只需将一定量的粪便与本专利技术的样本释放剂混合离心后，上清液即可作为PCR检测的模板，整个处理流程在2分钟内完成，且效果好于现有的提取试剂盒。
[0008]本专利技术“一种粪便免核酸提取样本释放剂”提供了一种无需后续提取核酸又可对其进行保存的样本释放剂，该样本释放剂包含了Tween
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20（0.01%
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10%，V/V）、TritonX
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100（0.01%
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10%，V/V）、氢氧化钠（0.01%
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5%，g/ml）、活性炭（0.01%
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30%，g/ml）、研磨珠（0.01%
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10%，g/ml），溶剂为无酶无菌水。
[0009]本专利技术“一种粪便免核酸提取样本释放剂”的操作方法：将粪便样本与所述一种粪便免提取样本释放剂充分混合，将混合液经12000rpm/min离心后，取上清液，上清液即可作为PCR检测所用的模板。
[0010]Tween
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20和TritonX
‑
100是两种作用温和的去垢剂，可以崩解细菌和细胞的生物膜，释放出胞内核酸物质。
[0011]氢氧化钠作为一种强碱，不仅有利于各种生物膜的崩解，同时弱碱性的环境还有利于核酸的长期保存。
[0012]活性炭作为常见的吸附剂，在本专利技术中的释放剂中起到吸附粪便中各种杂质的作用，例如可将胆盐和多糖类物质吸附沉淀，从而达到去除这些PCR抑制剂的目的。
[0013]在本专利技术的样本释放剂中，研磨珠通过剧烈震荡，研磨珠与粪便中的细菌或细胞互相碰撞、研磨，可进一步提高核酸释放效率。
附图说明
[0014]图1为样本1的检测结果。
[0015]图2为样本2的检测结果。
[0016]图3为样本3的检测结果。
[0017]图4为样本4的检测结果。
[0018]图5为样本5的检测结果。
具体实施方式
[0019]以下具体实施方式进一步阐明本专利技术“一种粪便免核酸提取样本释放剂”的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、条件、 步骤及应用所做的修改或替换，均属于本专利技术的范围。
[0020]本专利技术“一种粪便免核酸提取样本释放剂”提供了一种无需后续提取核酸又可对其进行保存的样本释放剂，该样本释放剂包含了Tween
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20（0.01%
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10%，V/V）、TritonX
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100（0.01%
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10%，V/V）、氢氧化钠（0.01%
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5%，g/ml）、活性炭（0.01%
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530%，g/ml）、研磨珠（0.01%
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10%，g/ml），溶剂为无酶无菌水。
[0021]实施例中所用的试剂和设备如表1所示。
[0022]实施例中使用的引物和探针以及检测靶点如表2所示。
[0023]表1 实施例中的试剂和耗材信息一览表
表2 引物、探针以及其检测靶点一览表实施例1：同一个人的粪便样本的核酸检测。
[0024]一、步骤一：取样。
[0025]采集2例新鲜粪便样本，编号为1号和2号。用植绒性拭子轻轻蘸取约小米粒到绿豆
粒大小的粪便。
[0026]二、步骤二：混匀，离心。
[0027]将采集的粪便立即置于本专利技术：“一种粪便免核酸提取样本释放剂”的样本释放剂中，上下左右混匀后，剧烈振荡15s，然后12000rpm/min离心1min，取上清液作为qPCR的模板。
[0028]三、步骤三：PCR反应体系配置。
[0029]按照表3的反应体系配制qPCR反应体系。
[0030]表3 单个qPCR反应体系名称加样量（μl）EF
‑
F0.4EF
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R0.4EF
‑
P0.4RNP
‑
F0.4RNP
‑
R0.4RNP
‑
P0.4PerfectStart
®
IIProbeqPCRSuperMixUDG10处理后的粪便样本7.6四、步骤四：上机检测。
[0031]配制好反应体系后，用ABI 7500进行qPCR检测，反应体系如表4所示。
[0032]表4 qPCR的反应体系实施例二。
[0033]实施例2：不同人的粪便样本的核酸检测。
[0034]一、步骤一：取样。
[0035]采集3例不同人的新鲜粪便样本，编号为3号和4号和5号。用植绒性拭子轻轻蘸取约小米粒到绿豆粒大小的粪便。
[0036]二、步骤二：混匀，离心。
[0037]将采集的粪便立即置于本专利技术：“一种粪便免核酸提取样本释放剂”的样本释放剂中，上下左右混匀后，剧烈振荡15s，然后12000rpm/min离心1min，取上清液作为qPCR的模板。
[0038]三、步骤三：PCR反应体系配置。
[0039]按照表3的反应体系配制qPCR反应体系。
[0040]四、步骤四：上机检测。
[0041]配制好反应体系后，用ABI 7500进行qPCR检测，反应体系如表4所示。
[0042]实验结果。
[0043]检测结果如图1～5所示。所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粪便免提取样本释放剂，其特征在于，该样本释放剂包含了Tween
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20（0.01%
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10%，V/V）、TritonX
‑
100（0.01%
‑
10%，V/V）、氢氧化钠（0.01%
‑
5%，g/ml）、活性炭（0.01%
‑
30%，g/ml）、研磨珠（0.01%
‑
10%，g/ml），溶剂为无酶无...

【专利技术属性】
技术研发人员：王珺飞，李文天，
申请(专利权)人：江苏臻石生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：