基因疗法制造技术

病毒载体，其中所述病毒载体包含COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因。COL4A4或COL4A5转基因。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基因疗法
专利

[0001]本专利技术涉及包含COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因和肾特异性启动子的病毒载体，以及该病毒载体在治疗Alport综合征中的用途。
[0002]专利技术背景
[0003]Alport综合征(AS)是一种遗传病况，影响欧洲大陆和美国的所有个体中约5,000
‑
10,000人中的1人。AS又称家族性肾炎、遗传性肾炎、薄基底膜病和薄基底膜肾病。这种病况通常出现在儿童时期，并与一系列表型相关，包括进行性肾功能丧失，还可能包括听力丧失和眼睛异常。
[0004]AS是由COL4A3、COL4A4和COL4A5基因的致病变异引起的，这些变异导致基底膜的胶原蛋白IVα345网络异常。该病况可以以X连锁、常染色体显性或常染色体隐性模式传播，其中X连锁是常见的，而常染色体隐性和常染色体显性分别占病例的15％和20％左右。
[0005]在没有治疗的情况下，具有X连锁形式的所有男性以及具有常染色体隐性形式的所有男性和女性中，肾病从显微血尿(microhematuria)进展为蛋白尿、进行性肾功能不全和终末期肾病。
[0006]AS可以通过遗传检测来诊断，并且目前的治疗包括血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂或血管紧张素受体阻滞剂(ARB)以延缓终末期肾病的发作。然而，目前还没有办法预防终末期肾衰竭，肾移植是唯一的选择。
[0007]在开发成功的AS基因疗法方面存在重大挑战需要克服。首先是COL4A5、COL4A3和COL4A4蛋白各自有1685、1670和1690个氨基酸，由于AAV载货能力有限，使得这些蛋白通过腺相关病毒(AAV)载体进行运输是有挑战的。第二个重大挑战是成功地将基因疗法递送至肾小球中的足细胞，这些细胞在肾小球基底膜中产生胶原IV。
[0008]本专利技术旨在提供新的基因疗法载体，其可以有效地将COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因递送至足细胞，从而提供治疗Alport综合征的疗法。

技术实现思路

[0009]本专利技术提供了病毒载体，其中该病毒载体包含COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因。可以使用该病毒载体以靶向肾小球内的足细胞，以便治疗Alport综合征。
[0010]不受理论束缚，本专利技术人相信足细胞为肾病中的基因疗法方法提供高度易处理的靶标，并且通过将COL4A3、COL4A4或COL4A5靶向到足细胞，可以改变肾小球基底膜的胶原蛋白IVα345网络并且在至少部分正常化。
[0011]在一方面，本专利技术提供了病毒载体，其中该病毒载体包含COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因。
[0012]COL4A3转基因可以编码COL4A3多肽或其片段，所述COL4A3多肽包含与SEQ ID NO：1具有至少70％同一性的多肽序列，或由与SEQ ID NO：1具有至少70％同一性的多肽序列组成；COL4A4转基因可以编码COL4A4多肽或其片段，所述COL4A4多肽包含与SEQ ID NO：2具有至少70％同一性的多肽序列，或由与SEQ ID NO：2具有至少70％同一性的多肽序列组成；
和/或COL4A5转基因可以编码COL4A5多肽或其片段，所述COL4A5多肽包含与SEQ ID NO：3具有至少70％同一性的多肽序列，或由与SEQ ID NO：3具有至少70％同一性的多肽序列组成。在一些实施方案中，COL4A3转基因编码全长COL4A3多肽，COL4A4转基因编码全长COL4A4多肽；和/或COL4A5转基因编码全长COL4A5多肽。适当地，COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因是人的和/或包含血凝素(HA)标签。
[0013]优选地，病毒载体包含足细胞特异性启动子。适当地，足细胞特异性启动子是最小nephrin启动子NPHS1或podocin启动子NPHS2。在一些实施方案中，足细胞特异性启动子是最小nephrin启动子NPHS1。
[0014]本专利技术人已经开发最小nephrin启动子，它比已知的最小nephrin启动子短并且令人惊讶地能够驱动足细胞中的转基因表达。启动子还令人惊讶地保留足细胞特异性。这种最小nephrin启动子可以用于最小化货物尺寸并帮助全长COL4A3、COL4A4或COL4A5的包装。因此，最小nephrin启动子NPHS1可以包含如SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO：10至少70％相同的变体，或由如SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO：10至少70％相同的变体组成。
[0015]适当地，病毒载体是腺相关病毒(AAV)。适当地，AAV载体是AAV载体颗粒的形式。在一些实施方案中，AAV载体颗粒是足细胞特异性AAV载体。在一些实施方案中，AAV载体是AAV血清型2/9、LK03或3B。
[0016]在一些实施方案中，COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因是小基因(mini
‑
gene)。
[0017]在一些实施方案中，病毒载体另外包含土拨鼠肝炎转录后调节元件(WPRE)。在一些实施方案中，病毒载体不包含土拨鼠肝炎转录后调节元件(WPRE)。
[0018]在一些实施方案中，病毒载体另外包含在启动子和COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因之间的Kozak序列。
[0019]适当地，病毒载体另外包含多腺苷酸化信号，诸如牛生长激素(bGH)多腺苷酸化信号或早期SV40多腺苷酸化信号。在一些实施方案中，多腺苷酸化信号是早期SV40多腺苷酸化信号。
[0020]在一方面，本专利技术提供了病毒载体基因疗法，其中病毒载体包含COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因。
[0021]在优选的实施方案中，病毒载体是根据本专利技术的病毒载体。
[0022]在一方面，本专利技术提供了病毒载体基因疗法，其中该基因疗法包括：
[0023]第一病毒载体，其包含COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因的至少一部分；和
[0024]第二病毒载体，其包含相应COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因的至少部分。
[0025]在优选的实施方案中，第一病毒载体是根据本专利技术的病毒载体，和/或第二病毒载体是根据本专利技术的病毒载体。
[0026]在一方面，本专利技术提供了根据本专利技术的病毒载体或病毒载体基因疗法，其用于治疗或预防Alport综合征。
[0027]适当地，将病毒载体或病毒载体基因疗法施用于人患者。在一些实施方案中，病毒载体或病毒载体基因疗法是全身施用的。在一些实施方案中，病毒载体或病毒载体基因疗法通过静脉内注射施用。在一些实施方案中，病毒载体或病毒载体基因疗法通过注射至肾动脉中来施用。
[0028]病毒载体
[0029]腺相关病毒(AAV)载体
[0030]病毒载体可以是腺相关病毒(AAV)并且合适的AAV载体血清型包括2/9、LK03和3B。
[0031]病毒载体可以是AAV载体颗粒的形式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.病毒载体，其中所述病毒载体包含COL4A3、COL4A4或COL4A5转基因。2.根据权利要求1的病毒载体，其中：(i)所述COL4A3转基因编码COL4A3多肽或其片段，所述COL4A3多肽包含与SEQ ID NO：1具有至少70％同一性的多肽序列，或由与SEQ ID NO：1具有至少70％同一性的多肽序列组成；(ii)所述COL4A4转基因编码COL4A4多肽或其片段，所述COL4A4多肽包含与SEQ ID NO：2具有至少70％同一性的多肽序列，或由与SEQ ID NO：2具有至少70％同一性的多肽序列组成；和/或(iii)所述COL4A5转基因编码COL4A5多肽或其片段，所述COL4A5多肽包含与SEQ ID NO：3具有至少70％同一性的多肽序列，或由与SEQ ID NO：3具有至少70％同一性的多肽序列组成。3.根据权利要求1或2的病毒载体，其中：(i)所述COL4A3转基因编码全长COL4A3多肽，(ii)所述COL4A4转基因编码全长COL4A4多肽；和/或(iii)所述COL4A5转基因编码全长COL4A5多肽。4.根据前述权利要求中任一项的病毒载体，其中所述病毒载体包含足细胞特异性启动子。5.根据前述权利要求中任一项的病毒载体，其中所述足细胞特异性启动子是最小nephrin启动子NPHS1或podocin启动子NPHS2，优选地其中所述足细胞特异性启动子是最小nephrin启动子NPHS1。6.根据权利要求5的病毒载体，其中所述最小nephrin启动子NPHS1包含如SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO：10至少70％相同的变体，或由如SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列或与SEQ ID NO：10至少70％相同的变体组成。7.根据前述权利要求中任一项的病毒载体，其中所述病毒载体是腺相关病毒(AAV)。8.根据权利要求7的病毒载体，其中所述AAV载体是AAV载体颗粒的形式。9.根据权利要求7或8的病毒载体，其中所述AAV载体颗粒是足细胞特异性AAV载体。10.根据权利要求7至9中任一项的病毒载体，其中所述AAV载体是AAV血清型2/9、L...

【专利技术属性】
技术研发人员：D施密特，V库兹穆克，M萨里姆，G韦尔什，
申请(专利权)人：辛科纳投资管理有限公司，
类型：发明
国别省市：