重组抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种重组抗体及其应用，该重组抗体为双链抗体，包括：第一条肽链，包括CD16单链抗体、IL

【技术实现步骤摘要】
重组抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体地，涉及重组抗体及其应用，更具体地，涉及重组抗体、核酸分子、表达载体、重组细胞、组合物以及所述重组抗体或抗原结合片段、核酸分子、表达载体、重组细胞或组合物在制备药物中的用途和试剂盒。

技术介绍

[0002]癌症是一种严重威胁人民群众的生命健康的疾病，近年来全球癌症的发生率、死亡率却不断上升。目前已有的癌症治疗手段，包括手术切除、放疗、化疗、小分子靶向治疗、抗体靶向治疗、大分子免疫治疗等仅能够在部分癌症患者中发挥有限的作用，癌症仍是困扰人类生命健康的难题。
[0003]近年来，重组抗体成为了免疫治疗中的研究热点。重组抗体是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，能够在靶细胞(肿瘤细胞)和效应细胞(免疫细胞)之间架起桥梁，产生导向性杀伤肿瘤的效应功能。因此，开发低免疫原性、强亲和力的特异性抗体对于治疗肿瘤具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本申请是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：
[0005]肿瘤组织中CD155相对于正常组织的差异化高表达，且CD155结合免疫检查点受体TIGIT，进而抑制免疫细胞的抗癌功能，CD16抗体单链可变片段(ScFv)能够结合NK细胞，因此，专利技术人设计了重组抗体CD16
×
TIGIT，更进一步地，专利技术人惊喜地发现在所述双特异性抗体中加入人白细胞介素21(IL
‑
21)后，获得的重组抗体(CD16
×
IL
‑r/>21
×
TIGITextra)的抗癌能力显著强于CD16
×
TIGIT extra双特异性抗体，并且重组抗体(CD16
×
IL
‑
21
×
TIGITextra)诱导产生的炎性细胞因子IL
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6显著低于CD3
×
TIGIT extra和CD16
×
TIGIT extra双特异性抗体。
[0006]因此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种重组抗体。根据本专利技术的实施例，所述重组抗体为双链抗体，包括：第一条肽链，包括CD16单链抗体、IL
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21分子和第一Fc区，所述CD16单链抗体包括重链可变区、轻链可变区；以及第二条肽链，包括TIGIT胞外区和第二Fc区；其中，所述CD16单链抗体的C端与所述IL
‑
21分子的N端相连，所述IL
‑
21分子的C端与所述第一Fc区的N端相连，所述TIGIT胞外区的C端与所述Fc区的N端相连。根据本专利技术实施例的重组抗体可以同时与CD16a、CD155和IL
‑
21R进行结合，有效介导NK细胞对高表达CD155的肿瘤细胞的杀伤作用，且促使免疫细胞产生更少的促炎性细胞因子IL
‑
6，具有较强的肿瘤抑制能力和较高的安全性。
[0007]在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种核酸。根据本专利技术的实施例，所述核酸编码第一方面所述的重组抗体。根据本专利技术实施例的核酸可以在一定条件下表达重组抗体，所述重组抗体可以同时与CD16a、CD155和IL
‑
21R进行结合，有效介导NK细胞对高表达CD155的肿瘤细胞的杀伤作用，且促使免疫细胞产生更少的促炎性细胞因子IL
‑
6，具有较强的肿
瘤抑制能力和较高的安全性。
[0008]在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了一种表达载体。根据本专利技术的实施例，携带第二方面所述的核酸。所述表达载体可包括可选的控制序列，所述控制序列与所述核酸分子可操作地连接。其中，所述控制序列为可指导所述核酸分子在宿主中表达的一个或多个控制序列。本专利技术实施例所提出的表达载体可在适合的宿主细胞中高效表达重组抗体，所述重组抗体可以同时与CD16a、CD155和IL
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21R进行结合，有效介导NK细胞对高表达CD155的肿瘤细胞的杀伤作用，且促使免疫细胞产生更少的促炎性细胞因子IL
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6，具有较强的肿瘤抑制能力和较高的安全性。
[0009]在本专利技术的第四方面，本专利技术提出了一种制备第一方面所述的重组抗体的方法。根据本专利技术的实施例，包括：将第三方面所述的表达载体引入到细胞中；将所述细胞在适于蛋白表达和分泌的条件下进行培养，以便获得所述重组抗体。根据本专利技术实施例的方法可以有效获得所述重组抗体，所述重组抗体可以同时与CD16a、CD155和IL
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21R进行结合，有效介导NK细胞对高表达CD155的肿瘤细胞的杀伤作用，且促使免疫细胞产生更少的促炎性细胞因子IL
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6，具有较强的肿瘤抑制能力和较高的安全性。
[0010]在本专利技术的第五方面，本专利技术提出了一种重组细胞。根据本专利技术的实施例，所述重组细胞携带第一方面所述的重组抗体、第二方面所述的核酸、或第三方面所述的表达载体。所述重组细胞是通过转染或者转化所述表达载体获得的。根据本专利技术的一些具体实施例，所述重组细胞在合适条件下可高效表达重组抗体，所述重组抗体可以同时与CD16a、CD155和IL
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21R进行结合，有效介导NK细胞对高表达CD155的肿瘤细胞的杀伤作用，且促使免疫细胞产生更少的促炎性细胞因子IL
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6，具有较强的肿瘤抑制能力和较高的安全性。
[0011]在本专利技术的第六方面，本专利技术提出了一种组合物。根据本专利技术的实施例，包括：第一方面所述的重组抗体、第二方面所述的核酸、第三方面所述的表达载体或第五方面所述的重组细胞。如前所述，本专利技术实施例的重组抗体可以有效与CD155蛋白分子结合，进而可特异性识别肿瘤细胞，同时与CD16a和IL
‑
21R进行结合，从而促使NK细胞选择性地定位到肿瘤局部而不是在外周循环，避免全身活化，包含所述重组抗体的组合物，如食品组合物、药物组合物等，同样具有显著的治疗或预防肿瘤的作用，且具有较高的安全性。
[0012]在本专利技术的第七方面，本专利技术提出了第一方面所述的重组抗体、第二方面所述的核酸、第三方面所述的表达载体、第五方面所述的重组细胞或第六方面所述的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗或者预防癌症。如前所述，本专利技术实施例的重组抗体可以有效与CD155蛋白分子结合，进而可特异性识别肿瘤细胞，同时与CD16a和IL
‑
21R进行结合，从而促使NK细胞选择性地定位到肿瘤局部而不是在外周循环，避免全身活化，包含所述重组抗体的组合物，如食品组合物、药物组合物等，同样具有显著的治疗或预防肿瘤的作用，且具有较高的安全性。
[0013]在本专利技术的第八方面，本专利技术提出了一种药物。根据本专利技术的实施例，所述药物包括：第一方面所述的重组抗体、第二方面所述的核酸、第三方面所述的表达载体、第五方面所述的重组细胞或第六方面所述的组合物。根据本专利技术的实施例，所述药物用于治疗癌症。如前所述，本专利技术实施例的重组抗体可以有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组抗体，其特征在于，所述重组抗体为双链抗体，包括：第一条肽链，包括CD16单链抗体、IL
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21分子和第一Fc区，所述CD16单链抗体包括重链可变区、轻链可变区；以及第二条肽链，包括TIGIT胞外区和第二Fc区；其中，所述CD16单链抗体的C端与所述IL
‑
21分子的N端相连，所述IL
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21分子的C端与所述第一Fc区的N端相连，所述TIGIT胞外区的C端与所述Fc区的N端相连。2.根据权利要求1所述的重组抗体，其特征在于，进一步包括连接肽1，所述连接肽1的N端与所述重链可变区的C端相连，所述连接肽1的C端与所述轻链可变区的N端相连；任选地，所述连接肽1包括SEQ ID NO：15所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的重组抗体，其特征在于，进一步包括连接肽2，所述连接肽2的N端与所述轻链可变区的C端相连，所述连接肽2的C端与所述IL
‑
21分子的N端相连；任选地，所述连接肽2包括SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1
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3任一项所述的重组抗体，其特征在于，进一步包括连接肽3，所述连接肽3的N端与所述IL
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21分子的C端相连，所述连接肽3的C端与所述第一Fc区的N端相连；任选地，所述连接肽3包括SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列。5.根据权利要求1
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4任一项所述的重组抗体，其特征在于，进一步包括连接肽4，所述连接肽4的N端与所述TIGIT胞外区的C端相连，所述连接肽4的C端与所述第二Fc区的N端相连；任选地，所述连接肽4包括SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列。6.根据权利要求1所述的重组抗体，其特征在于，所述第一Fc区和第二Fc区通过knob into hole结构进行连接。7.根据权利要求6所述的重组抗体，其特征在于，所述第一Fc区和第二Fc区的至少一部分来自于鼠源抗体、人源抗体、灵长目源抗体或其突变体的至少之一，任选地，所述第一Fc区和第二Fc区的至少一部分来自鼠源抗体、人源抗体、灵长目源IgG抗体或其突变体；任选地，所述第一Fc区和第二Fc区的至少一部分来自人源IgG1或其突变体。8.根据权利要求6所述的重组抗体，其特征在于，所述第一Fc区与野生型IgG1 Fc区相比具有缺少CH1区、T366W突变中的至少之一，所述第二Fc区与野生型IgG1 Fc区相比具有缺少CH1区、T366S、L368A、Y407V突变中的至少之一。9.根据权利要求6
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8任一项所述的重组抗体，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：田志刚，曹国帅，肖卫华，孙汭，孙昊昱，
申请(专利权)人：合肥天港免疫药物有限公司，
类型：发明
国别省市：