一种延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法技术

本发明专利技术提供了一种延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法，包括如下步骤：将乌菜嫩叶叶柄剪切成叶柄段后清洗干净；将叶柄段置于无菌环境中消毒；将无菌的乌菜嫩叶叶柄段切成叶柄块，再接种到诱导培养基上诱导培养；将愈伤组织转到继代培养基上继代培养；同时，在继代培养基中添加50～200mg/kg TIBA，控制培养温度为10～18℃，调整光质为红蓝复合光，且红/蓝光比例为1:3、1:1，控制光照强度为10～70μmol/(m2·

【技术实现步骤摘要】
一种延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法。

技术介绍

[0002]乌菜又名塌菜、塌棵菜、塌地松、黑菜，为十字花科芸苔属芸苔种白菜亚种的一个变种；其基生叶少，密生，短且宽，显著皱缩，圆卵形或倒卵形；其以叶片供食，原产中国，主要分布在长江流域。乌菜的叶片肥嫩，可炒食、作汤、凉拌，色美味鲜，营养丰富。
[0003]植物组织培养，又称植物离体培养，是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。利用植物组织培养技术培育乌菜，不但能保证乌菜品系的纯度，还能大大地提高繁殖系数，缩短出圃周期，更有利于乌菜生产良种的推广应用。因此，植物组织培养技术成为乌菜商品化生产的最佳选择。
[0004]然而，在乌菜的工厂化组培过程中发现：当需要转瓶转苗时，出于人工劳动力不足或者田地数量有限的原因，往往无法在短时内将全部乌菜苗都移栽到田地里，造成适龄苗因无法下地而产生浪费，带来经济损失。据此，需要提出一种能有效延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法，从而有效控制适龄苗的下地时间。
[0005]光质、光强、光照时间等是影响植物生长发育的重要环境因子。研究表明，不同的光质条件对植物生长发育的各个阶段发挥重要的调控作用。发光二极管(LED)能发出精准波谱的单色光，波长范围较窄，且能通过调控装置而控制光强。红光能够促进植株茎叶的径向生长，有利于可溶性糖和淀粉的积累，降低色素含量。而蓝光能够逆转此效应，促进色素和可溶性蛋白的合成且利于其茎叶的横向生长，只在全红光条件下植株不能正常生长。红蓝组合光有利于植株的生长，增强了光系统反应中心的开放程度与光能转换效率。然而，目前的研究都集中于快繁体系相对成熟的物种，对于乌菜组织培养中尤其利用红蓝配比光照及时间来延缓组培继代培养的应用尚未报道。
[0006]叶片是植物利用光能、合成有机化合物的重要场所，在植物生长发育过程中起着重要作用。叶片的衰老是个极其复杂的过程，它对叶菜类蔬菜的货架期的延迟、组培苗移栽人工压力的减小、组培苗单株优良性状的保持均产生影响。低温可以降低光合速率和呼吸速率，使植株生长延缓。
[0007]三碘苯甲酸(TIBA)是一种生长抑制剂，亦称生长延缓剂，是指人工合成或天然的能阻碍整个植物或植物的某个特定器官生长的物质，是植物生长调节剂中的一种类型。TIBA在化学结构上和生长素类似，其主要是通过竞争性抑制产生与生长素相反的作用，有利于降低株高、减少倒伏，还具有抑制顶端生长的作用。
[0008]因此，若尝试将红蓝光间歇光照、适度低温和在培养基中添加TIBA方法相结合，并用于乌菜组培培养，将有望获得一种能有效延缓乌菜组培苗继代生长速率的新方法。

技术实现思路

[0009]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种同时使用红蓝光间歇光照、适度低温和培养基添加TIBA方法来延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法。
[0010]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0011]一种延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法，包括如下步骤：
[0012](1)外植体的选择
[0013]将乌菜嫩叶叶柄剪切成叶柄段后清洗干净；
[0014](2)外植体的消毒
[0015]将清洗干净的乌菜嫩叶叶柄段置于无菌环境中进行消毒；
[0016](3)诱导培养
[0017]将无菌的乌菜嫩叶叶柄段切成叶柄块，再接种到诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养；
[0018](4)继代培养
[0019]将培养出的愈伤组织转接到继代培养基上进行继代培养；同时，在所述继代培养基中添加50～200mg/kg TIBA，控制培养温度为10～18℃，调整光质为红蓝复合光，且红/蓝光比例为1:3、1:1，控制光照强度为10～70μmol/(m2·
s)，控制光照时间为光照1天/黑暗1～3天。
[0020]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(1)中，将从田间采回来的乌菜嫩叶叶柄剪切成叶柄段后放到广口瓶中，先利用流水冲洗20min，接着再采用0.05％安利洗涤液振荡洗涤10min，再用自来水洗至完全没有泡沫时，视为清洗干净。
[0021]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(2)中，将清洗干净的乌菜嫩叶叶柄段移至超净工作台后，先用无菌水洗涤4次，再倒入70％～75％乙醇灭菌10s，用无菌水洗涤2～3次，用0.1％HgCl2溶液振荡灭菌30s，接着用无菌水振荡洗涤6次。
[0022]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(3)中，将无菌的乌菜嫩叶叶柄段切成0.2cm大小的叶柄块，再接种到诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养。
[0023]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(3)中，诱导培养基的配方为：MS+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH 5.8～6.0；诱导培养条件为：培养温度25℃，光质为荧光灯，光照时间为14h昼/10h夜、光照强度70μmol/(m2·
s)。
[0024]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中，未添加TIBA的继代培养基配方为：MS+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH 5.8～6.0。
[0025]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中，继代培养基中添加的TIBA浓度具体为100mg/kg。
[0026]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中，继代培养温度具体为18℃。
[0027]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中，红蓝复合光的红/蓝光比例具体为1:3，且光照强度为70μmol/(m2·
s)。
[0028]作为本专利技术的优选方式之一，所述步骤(4)中，红蓝复合光的光照时间具体为光照1天/黑暗2天。
[0029]技术原理：
[0030]光质、光强、光照时间等是影响植物生长发育的重要环境因子。红光能够促进植株
茎叶的径向生长，有利于可溶性糖和淀粉的积累，降低色素含量，而蓝光能够逆转此效应，促进色素和可溶性蛋白的合成且利于其茎叶的横向生长。低温可以降低光合速率和呼吸速率，使植株生长延缓。三碘苯甲酸(TIBA)在化学结构上和生长素类似，通过竞争性抑制，产生与生长素相反的作用，有利于降低株高、减少倒伏，还具有抑制顶端生长的作用。
[0031]本专利技术相比现有技术的优点在于：
[0032](1)本专利技术通过将红蓝光间歇光照、适度低温和在培养基中添加TIBA方法相结合，并用于乌菜组培培养，获得一种能有效延缓乌菜组培苗继代生长速率的新方法；该方法可将乌菜组培苗的继代生长时间最高可延长142％；
[0033](2)本专利技术所使用试剂微量高效、操作简单。
具体实施方式
[0034]下面对本专利技术的实施例作详细说明，本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)外植体的选择将乌菜嫩叶叶柄剪切成叶柄段后清洗干净；(2)外植体的消毒将清洗干净的乌菜嫩叶叶柄段置于无菌环境中进行消毒；(3)诱导培养将无菌的乌菜嫩叶叶柄段切成叶柄块，再接种到诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养；(4)继代培养将培养出的愈伤组织转接到继代培养基上进行继代培养；同时，在所述继代培养基中添加50～200mg/kg TIBA，控制培养温度为10～18℃，调整光质为红蓝复合光，且红/蓝光比例为1:3、1:1，控制光照强度为10～70μmol/(m2·
s)，控制光照时间为光照1天/黑暗1～3天。2.根据权利要求1所述的延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，将从田间采回来的乌菜嫩叶叶柄剪切成叶柄段后放到广口瓶中，先利用流水冲洗20min，接着再采用0.05％安利洗涤液振荡洗涤10min，再用自来水洗至完全没有泡沫时，视为清洗干净。3.根据权利要求1所述的延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将清洗干净的乌菜嫩叶叶柄段移至超净工作台后，先用无菌水洗涤4次，再倒入70％～75％乙醇灭菌10s，用无菌水洗涤2～3次，用0.1％HgCl2溶液振荡灭菌30s，接着用无菌水振荡洗涤6次。4.根据权利要求1所述的延缓乌菜组培苗继代生长速率的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁凌云，张利婷，汪承刚，朱世东，赵冠艳，黄兴学，单国雷，侯金锋，陈国户，唐小燕，张泽根，
申请(专利权)人：安徽省皖江蔬菜产业技术研究院有限责任公司，
类型：发明
国别省市：