一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的方法技术

本发明专利技术涉及一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的方法，属于化合物单体的分离纯化技术领域。本发明专利技术是以半夏为原料，经提取、浓缩、AB

【技术实现步骤摘要】
一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的方法


[0001]本专利技术涉及一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的方法，属于化合物单体的分离纯化


技术介绍

[0002]半夏，始载于《神农本草经》，《礼记
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月令》中记载：“五月半夏生，盖当夏之半也，故名，又名守田、水玉，守田会意，水玉因形”。半夏为天南星科植物半夏Pinelliaternate（Thumb）.Breit.的干燥块茎，味辛，性温，有毒，归脾、胃、肺经，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效。其于临床上多为复方应用，在张仲景所著的《伤寒论》《金贵要略》书中，含半夏的方剂共42 方（去除重复方），占总方的13.25％。
[0003]目前，经对半夏单味药的研究发现，其化学成分包括生物碱类、有机酸类、挥发油类、黄酮类、甾体类和糖类等多种成分；其药理学研究表明，半夏除具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结等作用外，还具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗癫痫等药理活性；其毒性主要为刺激性毒性、肝肾毒性、妊娠毒性。近年来，对半夏研究进展的综述文献多侧重于药理作用研究，对其化学成分的总结不直观、针对性不强。
[0004]夏佛塔苷（Schaftoside），分子式为C
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H
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O
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，分子量为564.50，结构式如下：胡芦巴碱（Trigonelline hydrochloride），分子式为C7H8ClNO2，分子量为173.60，结构式如下：夏佛塔苷、胡芦巴碱来源于天南星科植物半夏Pinelliaternate（Thumb）.Breit.的干燥块茎，是半夏药材中的主要活性成分，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结等功效。目前，主要采用硅胶柱层析与结晶相结合的方法进行夏佛塔苷、胡芦巴碱单体的精制，但涉及的生产周期长，试剂浪费严重，产品收率低。
[0005]现有技术“UPLC测定半夏中胡芦巴碱的含量”中公开：取半夏粉末2g，精密称定，置50mLBP管中，精密加入20ml50%的甲醇溶液，称重，浸泡1h，超声45min，冷却，再次称重，并用50%的甲醇补足失重，摇匀，静置，取上清液1.0mL于离心管中，吹干，用乙腈
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甲醇（75:25）液500μL复液，涡旋5min，超声10min，13000r/min离心30min，即得供试品溶液。其重要是基于UPLC，测定半夏中胡芦巴碱的含量。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在解决现有技术问题，而提出了一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的方法。在本技术方案中，以半夏为原料，经提取、浓缩、AB
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8柱层析、过滤、制备型高效液相色谱仪分离及产品回收，得到夏佛塔苷和胡芦巴碱单体。其中，涉及的分离效率高，生产周期短，工艺稳定，操作简便，成本低廉，可实现夏佛塔苷单体、胡芦巴碱单体的高纯度（面积归一法99%以上）分离。
[0007]为了实现上述技术目的，提出如下的技术方案：本技术方案提出：一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的方法，具体包括如下步骤：X1.提取：将半夏粉碎为1
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4mm的粗粉，以每千克半夏粗粉加入乙醇溶液10
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20升计，加入浓度为70%的乙醇溶液，提取3
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4次，每次提取2
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3h，收集，合并，过滤，得提取液；X2.浓缩：将所得的提取液在60℃条件下浓缩，得浓缩液；X3.富集和洗脱：将所得的浓缩液通入至活化的AB
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8大孔树脂柱中富集，用纯化水清洗至无色，然后，以浓度为70%的乙醇溶液解析，回收乙醇，剩余水溶液即为层析液；X4.过滤：将所得的层析液用0.45μm的滤膜过滤，得到包括夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体的过滤液；X5.分离：将所得的过滤液向制备型高效液相色谱仪中进样，进行夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体的制备，收集夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体的制备液；其中，制备型高效液相色谱仪中的色谱条件包括：色谱柱填料：C18填料；流动相：甲醇
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0.1%磷酸水溶液V/V=30︰70；进样量：1.0
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1.5L/针；检测：紫外光，检测波长为270nm；X6.产品回收：将所得的夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体的制备液，回收甲醇，剩余水溶液用C18富集和纯甲醇解析，在45
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55℃条件下分别浓缩至干，干燥，即得夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体，纯度均为99%以上。
[0008]进一步的，在进行制备型高效液相色谱仪分离前，通过液
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质联用法确定制备型高效液相色谱仪中夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体各自的峰形，即取经步骤X4所得的过滤液进样，进行夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体的制备分离，根据质谱检测结果，确定夏佛塔苷单体及胡芦巴碱单体在液相色谱中对应的峰形。
[0009]本技术方案还提出：一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的纯度检测方法，采用分析型高效液相色谱仪；其中，分析型高效液相色谱仪中的色谱条件包括：
色谱柱填料：十八烷基硅烷键合硅胶，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径5μm；流动相：甲醇为流动相A，以水为流动相B；流速：0.9mL/min；检测波长：270nm；柱温：30℃，梯度洗脱如下；。
[0010]采用本技术方案，带来的有益技术效果为：1）本专利技术采用制备型高效液相色谱系统对夏佛塔苷单体、胡芦巴碱单体进行分离纯化，达到了很好的分离效果，且通过在线紫外检测，针对性的收集夏佛塔苷单体、胡芦巴碱单体，目标明确，避免了常规柱层析等造成的资源浪费，而且便于控制产品质量，产品纯度可达99%以上；2）由于高效液相色谱对样品的色泽、纯度等要求较高，通过简单处理得到的提取液不能直接进样，因此，若在进行高效液相色谱分离前，未对进样溶液进行有效的前处理，这不仅使得分离效果不好，而且还可能对仪器造成严重影响（如：缩短寿命等），进而增加产品的生产成本，以及，影响分离工艺的正常进行；3）本专利技术针对半夏药材中存在的各种成分的理化性质，进行了X1
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X3步骤的适当顺序搭配，以及适当的参数组合，有效的提取出夏佛塔苷、胡芦巴碱等成分，并除去了大量杂质，由此，获得了可进入制备型高效液相色谱系统的样品溶液，而不至对高效液相色谱系统造成大的影响，尽量延长其使用周期，节约了生产成本；4）在高效液相色谱分离过程中，各色谱条件的选择及其组合极为重要，其直接影响物质成分的出峰时间、峰形等。其中，色谱条件主要包括色谱柱（包括填料、柱长、柱温等）、流动相（包括成分、流速等）、检测器及检测波长等，本专利技术通过大量的试验研究和对比分析，确定了特定的色谱条件，从而使物质成分的出峰时间、峰形、分离效果等达到最佳化，实现了夏佛塔苷单体、胡芦巴碱单体的高效分离。
附图说明
[0011]图1为实施例3中夏佛塔苷单体产品的HPLC图谱；图2本实施例3中胡芦巴碱单体产品的HPLC图谱（其中，从下至上依次为：胡芦巴碱盐酸盐对照品溶液、半夏RK20032002、半夏RK21120701、半本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从半夏中同时分离夏佛塔苷和胡芦巴碱的方法，其特征在于，包括如下步骤：X1.提取：将半夏粉碎为1
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4mm的粗粉，以每千克半夏粗粉加入乙醇溶液10
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20升计，加入浓度为70%的乙醇溶液，提取3
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4次，每次提取2
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3h，收集，合并，过滤，得提取液；X2.浓缩：将所得的提取液在60℃条件下浓缩，得浓缩液；X3.富集和洗脱：将所得的浓缩液通入至活化的AB
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8大孔树脂柱中富集，用纯化水清洗至无色，然后，以浓度为70%的乙醇溶液解析，回收乙醇，剩余水溶液即为层析液；X4.过滤：将所得的层析液用0.45μm的滤膜过滤，得到包括夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体的过滤液；X5.分离：将所得的过滤液向制备型高效液相色谱仪中进样，进行夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体的制备，收集夏佛塔苷单体和胡芦巴碱单体的制备液；其中，制备型高效液相色谱仪中的色谱条件包括：色谱柱填料：C18填料；流动相：甲醇
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0.1%磷酸水溶液V/V=30︰70；进样量：1.0
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1.5L/针；检测：紫外光，检测波长为270nm；X6.产品回收：将所得的夏佛塔苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔穗桃，
申请(专利权)人：乔穗桃，
类型：发明
国别省市：