一种抗人MICA/Bα3区二价纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，公开了一种抗人MICA/B α3区二价纳米抗体及其应用。该二价纳米抗体的重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或者包括与SEQ ID NO:1具有相似或相近生物学活性的氨基酸序列。本发明专利技术的抗人MICA/B α3区二价纳米抗体具有纳米抗体的优势，且能够在体内长时间稳定存在，特异性地结合人MICA/B α3区，有效抑制肿瘤细胞表面MICA/B的水解脱落，进而恢复NK细胞的免疫监视，实现肿瘤的靶向治疗。实现肿瘤的靶向治疗。实现肿瘤的靶向治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种抗人MICA/B α
3区二价纳米抗体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种抗人MICA/B α3区二价纳米抗体及其应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一，发病率及死亡率在我国均逐渐上升，带来较大的社会及经济负担。有效干预及阻断结直肠癌转移对改善患者预后及延长生存预期具有重要意义，然而目前尚无理想的治疗手段。激活或改造自身活性免疫细胞对肿瘤转移“窗口期”的肿瘤细胞进行免疫监视和清除是目前一个理想的治疗手段，然而如何有效干预肿瘤免疫逃逸并恢复免疫细胞监视是抗肿瘤免疫治疗中的关键问题。MICA/B是自然杀伤细胞（Natural killer cell，NK）等多种免疫效应细胞识别肿瘤细胞的重要配体，与NKG2D受体高亲和性结合后促进NK细胞释放穿孔素和颗粒素等溶解肿瘤细胞或诱导其死亡。有研究表明，高侵袭性的肿瘤细胞尤其是肿瘤转移“窗口期”的肿瘤细胞可释放多种蛋白酶通过水解MICA/B α3区促使MICA/B从肿瘤细胞表面脱落，造成NK细胞不能有效识别和杀灭侵入脉管系统的肿瘤细胞，从而使肿瘤细胞实现“免疫逃逸”。抑制MICA/B从肿瘤细胞表面脱落可以恢复NK细胞对其杀伤作用，是实现免疫监视肿瘤细胞的重要环节。
[0003]骆驼科动物（如羊驼、骆驼等）和一些软骨鱼类（如鲨鱼、鼠鱼等）的外周血中存在一种天然轻链缺失而只包含一个重链可变区（VHH）和两个常规的CH2和CH3区的抗体，是自然存在可以和抗原结合的最小片段。VHH可以单独稳定地存在于体外并具有独立抗原识别能力，被称为纳米抗体或驼类单域抗体，纳米抗体晶体宽度为2.5 mm，长4 nm，分子量仅为传统抗体的1/10。和传统的抗体相比，纳米抗体分子量小且结构简单，有更高的理化性质稳定性（良好的溶解性，不同的温度和pH中均具有良好的稳定性），与靶点结合特异性强，有更高的组织穿透力（更好地渗透到组织中并能够识别隐藏的、传统抗体无法结合的表位），适合工业化大规模生产（在细菌和酵母中可大量生产），更容易改造和优化，并且更容易人源化（可在不显著改变其特异性及活性的情况下通过取代少数氨基酸而进行人源化）。此外，这些可变域的结构与人类免疫球蛋白IgG3的一个亚类的可变域高度同源，不会在人体中引起剧烈的免疫反应。纳米抗体在未来的研究和临床诊断、治疗中可被广泛应用，有广阔的前景。
[0004]研发一种抗人MICA/B α3区的二价纳米抗体，用以特异性结合MICA/B α3区，抑制MICA/B从肿瘤细胞表面水解脱落，从而恢复NK细胞的免疫监视，是一种靶向治疗肿瘤的可能策略。纳米抗体分子量小且结构简单，在人体内代谢较快，而二价纳米抗体提高了纳米抗体在人体内的稳定性，延长抗体在体内的生物作用时间。然而，目前尚无特异性结合MICA/B α3区二价纳米抗体的相关报道。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中没有特异性结合MICA/B α3区的二价纳米抗体的技术问题，
本专利技术提供了一种抗人MICA/B α3区二价纳米抗体及其应用。本专利技术的抗人MICA/B α3区二价纳米抗体具有纳米抗体的优势，且能够在人体内长时间稳定存在，特异性地结合人MICA/B α3区，有效抑制肿瘤细胞表面MICA/B蛋白的水解脱落，进而恢复NK细胞的免疫监视，实现肿瘤的靶向治疗。
[0006]本专利技术的具体技术方案为：第一方面，本专利技术提供了一种抗人MICA/B α3区二价纳米抗体，包括重链可变区；所述重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或者包括与SEQ ID NO:1具有相似或相近生物学活性的氨基酸序列。
[0007]MICA/B是NK细胞等多种免疫效应细胞识别肿瘤细胞的重要配体，高侵袭性的肿瘤细胞特别是肿瘤转移“窗口期”的细胞，通过释放多种蛋白水解MICA/B α3区而促进肿瘤细胞表面MICA/B的脱落，从而使肿瘤细胞实现“免疫逃逸”。而本专利技术的抗人MICA/B α3区二价纳米抗体能够特异性地结合人MICA/B α3区，有效抑制肿瘤细胞表面MICA/B的水解脱落，进而恢复NK细胞的免疫监视，有望在一定程度上治疗肿瘤的转移、复发等。
[0008]并且，作为一种二价纳米抗体，本专利技术的抗人MICA/B α3区二价纳米抗体能够在人体内长时间稳定存在，延长纳米抗体在体内的生物作用时间，理化性质稳定，亲和力高，组织穿透力高，能够大规模生产，且易应用于抗体偶联物，并且能够根据靶标的表达水平以及治疗的安全性要求进行相应的工程化设计，具有较好的临床应用前景。
[0009]可选地，所述二价纳米抗体还包括重链恒定区；所述重链恒定区包括如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或者包括与SEQ ID NO:3具有相似或相近生物学活性的氨基酸序列。
[0010]可选地，所述二价纳米抗体还包括轻链恒定区；所述轻链恒定区包括如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或者包括与SEQ ID NO:4具有相似或相近生物学活性的氨基酸序列。
[0011]第二方面，本专利技术提供了一种编码所述二价纳米抗体的氨基酸序列，包括编码重链可变区的核苷酸序列；所述编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0012]第三方面，本专利技术提供了一种包含所述核酸分子的克隆或表达载体。
[0013]表达载体可为噬菌体。
[0014]第四方面，本专利技术提供了一种含有所述核酸分子或所述载体的宿主细胞。
[0015]宿主细胞可选自CHO细胞或大肠杆菌。
[0016]第五方面，本专利技术提供了所述二价纳米抗体或所述核酸分子或所述表达载体或所述宿主细胞的应用，具体包括：第一，所述二价纳米抗体或所述核酸分子或所述表达载体或所述宿主细胞在制备特异性结合人MICA/B α3区的药物中的应用。
[0017]第二，所述二价纳米抗体或所述核酸分子或所述表达载体或所述宿主细胞在制备抑制肿瘤细胞表面MICA/B分子水解脱落的药物中的应用。
[0018]第三，所述二价纳米抗体或所述核酸分子或所述表达载体或所述宿主细胞在制备靶向治疗肿瘤的抗体药物或抗体偶联物产品中的应用。
[0019]第四，所述二价纳米抗体或所述核酸分子或所述表达载体或所述宿主细胞在制备结合MICA/B α3区蛋白的检测试剂中的应用，所述检测试剂为免疫组织化学试剂或酶联免
疫吸附试验（ELISA）检测试剂或蛋白质印迹（Western Blotting）检测试剂。
[0020]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：（1）本专利技术的抗人MICA/B α3区二价纳米抗体能够特异性地结合人MICA/B α3区，有效抑制肿瘤细胞表面MICA/B的水解脱落，进而恢复NK细胞的免疫监视，实现肿瘤的靶向治疗；（2）作为一种二价纳米抗体，本专利技术的抗人MICA/B α3区二价纳米抗体分子质量较大，理化性质稳定、亲和力高且组织穿透力高，能在体内长时间发挥生物功能，并能够大规模生产，具有较大的应用前景。
附图说明
[0021]图1为抗人MI本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人MICA/B α3区的二价纳米抗体，其特征在于，包括重链可变区；所述重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或者包括与SEQ ID NO:1具有相似或相近生物学活性的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的二价纳米抗体，其特征在于，还包括重链恒定区；所述重链恒定区包括如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，或者包括与SEQ ID NO:3具有相似或相近生物学活性的氨基酸序列。3.如权利要求1所述的二价纳米抗体，其特征在于，还包括轻链恒定区；所述轻链恒定区包括如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，或者包括与SEQ ID NO:4具有相似或相近生物学活性的氨基酸序列。4.一种编码如权利要求1~3之一所述二价纳米抗体的核酸分子，其特征在于，包括编码重链可变区的核苷酸序列；所述编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。5.一种包含如权利要求4所述核酸分子的克隆或表达载体。6.一种含有如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱永良，吴敬妮，吴有禾，余琳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：