唑来膦酸注射液中有关物质的检测方法技术

本发明专利技术涉及药物分析检测技术领域，特别涉及一种唑来膦酸注射液中有关物质的检测方法，使用高效液相色谱法进行检测时，流动相中离子对为四丁基氢氧化铵。此方法大大降低了分析成本；避免了进口注册标准中繁琐的流动相配制过程及高PH流动相对色谱柱的损坏。程及高PH流动相对色谱柱的损坏。程及高PH流动相对色谱柱的损坏。

【技术实现步骤摘要】
唑来膦酸注射液中有关物质的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析检测
，特别涉及一种唑来膦酸注射液中有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]唑来膦酸作为瑞士诺华公司研发的第三代膦酸盐类药物，是迄今为止临床试验显示药理活性最强的双膦酸盐类药物，现用于治疗绝经后妇女的骨质疏松症及Paget,s病，唑来膦酸是一种含氮双膦酸化合物，化学名：1
‑
羟基
‑2‑
（咪唑
‑1‑
基）
‑
亚乙基
‑
1，1
‑
二磷酸，常用形式为其一水化合物，化合式如下：唑来膦酸主要作用于人体骨骼，通过抑制破骨细胞的活化和活化破骨细胞的增生来抑制骨吸收，减少骨基质生长因子的释放或抑制癌细胞黏附于骨基质，唑来膦酸对矿化骨具有高度亲和力，在体内优先聚集于骨形成或吸收加速的部位，同时其对骨生成抑制作用较小，减轻了前两代药物可能出现的过度骨抑制的不良反应，具有良好的临床应用前景。
[0003]唑来膦酸口服易产生明显的胃肠道不耐受及副反应，故以静脉注射给药，可增加患者依从性，减轻用药负担。
[0004]目前唑来膦酸注射液质量控制中涉及检测未知杂质和总杂，单杂含量要求≤0.2%，总杂含量要求≤0.4%。有关物质检测仍然普遍采用高效液相色谱法进行，该类化合物含有两个膦酸基团，化合物活性极强，在非极性固定相色谱柱上不保留，因此主要通过建立阴离子交换高效液相色谱法和反相离子对高效液相色谱法进行样品及其杂质分析。
[0005]在离子交换色谱法中，因双膦酸药物是四元膦酸，存在多级电离，为了保证它们以单一的电离形式保留，需要采用强碱或强酸流动相，并且固定相大多选用价格昂贵的耐强酸或强碱的阴离子交换柱，分析成本高。
[0006]唑来膦酸注射液有关物质检测方法各药典均未收载，只有进口注册标准，标准中需要用到的离子对是硫酸氢四己铵，价格昂贵且用量较大，分析成本过高。
[0007]因此提供一种可以普遍应用的、成本较低的检测唑来膦酸注射液有关物质的高效液相色谱条件成了一个亟待解决的问题。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了一种可以普遍应用的、成本较低的唑来膦酸注射液中有关物质的检测方法。
[0009]本专利技术是通过以下步骤得到的：
一种唑来膦酸注射液中有关物质的检测方法，使用高效液相色谱法进行检测时，流动相中离子对为四丁基氢氧化铵。
[0010]优选色谱柱为端盖苯基己基硅硅胶色谱柱，流动相由缓冲液和乙腈混合而成，其中缓冲液体积分数85%～95%：乙腈体积分数15%～5%，缓冲液的制备方法为：1000mL浓度为0.05～0.10%的冰醋酸， 用三乙胺调节pH至3.0～4.0，加入90mL～110mL浓度为0.1%的四丁基氢氧化铵水溶液，混匀，即得。
[0011]优选高效液相色谱法流动相流速为0.5mL/min,柱温：30℃，样品温度：15℃，检测波长：215nm。
[0012]优选缓冲液制备中使用的冰醋酸溶液浓度为0.08%，用三乙胺调节pH至3.5 。
[0013]优选缓冲液制备中加入100mL浓度为0.1%的四丁基氢氧化铵水溶液。
[0014]优选流动相中缓冲液体积分数90%：乙腈体积分数10%。
[0015]本专利技术的有益效果：（1）用平价的离子对试剂10%四丁基氢氧化铵水溶液代替价格昂贵的离子对试剂硫酸氢四己铵，且由进口注册标准中配1000mL流动相约用4.5g硫酸氢四己铵，本申请方法配制1000mL流动相只需要0.9
‑
1.1mL浓度10%四丁基氢氧化铵水溶液（90mL～110mL浓度0.1%的四丁基氢氧化铵水溶液），硫酸氢四己铵，5g/瓶，约3000元；10%四丁基氢氧化铵水溶液，50g/瓶，约100元,大大降低了分析成本；（2）流动相中加入四丁基氢氧化铵后解决了唑来膦酸在非极性色谱柱上不保留的问题，供试品主峰与杂质D分离度符合规定，可以达到检测要求；（3）由于四丁基氢氧化铵在流动相中加入量少，避免了进口注册标准中繁琐的流动相配制过程及高PH流动相对色谱柱的损坏。
附图说明
[0016]图1为使用进口注册标准（JX20170216）中方法空白辅料图谱，图2为使用进口注册标准（JX20170216）中方法唑来膦酸注射液图谱，图3为使用实施例1方法检测唑来膦酸注射液的图谱，图4为使用实施例1方法检测出的杂质D定位溶液图谱，图5为使用实施例1方法检测空白辅料得到的图谱，图6为使用实施例2方法检测唑来膦酸注射液得到的图谱，图7为使用实施例3方法检测空白辅料图谱，图8为唑来膦酸对照品图谱，图9为使用实施例4方法检测空白辅料得到的图谱，图10为使用实施例4方法检测唑来膦酸注射液得到的图谱。
具体实施方式
[0017]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明：唑来膦酸注射液进口注册标准（JX20170216）中检测方法为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Phenomenex Luna C18柱，250*4.6mm，5μm或效能相当的色谱柱）以磷酸盐缓冲液（PH7.9）为流动相【磷酸盐缓冲液（PH7.9）：取磷酸氢二钠二水合物6.2g、硫酸氢
四己铵4.5g，加水900mL使溶解，加乙腈100mL与乙二胺四醋酸溶液2mL，用2mol/L氢氧化钠溶液调节PH至7.9，混匀即得。】（乙二胺四醋酸二钠溶液：取乙二胺四醋酸0.365g，加2mol/L氢氧化钠溶液5mL使溶解，加水至100mL，混匀即得）检测波长：215nm，流速：每分钟1.2mL。理论塔板数按唑来膦酸峰计算不低于2000，唑来膦酸与枸橼酸钠色谱峰之间的分离度应符合要求。进口注册标准运行图谱空白辅料如图1，供试品图谱如图2。
[0018]进口注册标准中检测方法存在的缺点为流动相配制繁琐，用盐量大，成本高，且PH7.9在色谱柱使用高限上，对色谱柱损坏严重。
[0019]为了解决以上问题，本实施例提供一种唑来膦酸注射液中有关物质的检测方法，使用高效液相色谱法进行检测时，选择离子对为四丁基氢氧化铵。
[0020]使用高效液相色谱法进行检测时，色谱柱优选使用端盖苯基己基硅硅胶色谱柱，流动相配置方法为：选用0.05%～0.10%浓度的冰醋酸溶液， 1000mL冰醋酸溶液用三乙胺调节pH至3.0～4.0，加入90mL～110mL浓度0.1%的四丁基氢氧化铵水溶液，混匀，即得缓冲液；缓冲液体积占比85%～95%，乙腈体积占比15%～5%，配置成流动相。
[0021] 优选高效液相色谱法流动相流速为0.5mL/min,柱温：30℃，样品温度：15℃，检测波长：215nm。
[0022]实施例1高效液相色谱检测条件如下：色谱柱：端盖苯基己基硅硅胶色谱柱(Phenomenex Luna 5μm Phenyl
‑
Hexyl 100A 250*4.6mm或效能相当的色谱柱)；流动相：缓冲液：0.08%冰醋酸溶液1000mL，用三乙胺调节本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种唑来膦酸注射液中有关物质的检测方法，其特征在于使用高效液相色谱法进行检测时，流动相中离子对为四丁基氢氧化铵。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于色谱柱为端盖苯基己基硅硅胶色谱柱，流动相由缓冲液和乙腈混合而成，其中缓冲液体积分数85%～95%：乙腈体积分数15%～5%，缓冲液的制备方法为：1000mL浓度为0.05～0.10%的冰醋酸， 用三乙胺调节pH至3.0～4.0，加入90mL～110mL浓度为0.1%的四丁基氢氧化铵水溶液，混匀，即得。3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫志猛，徐鹏，屈汝锋，莫倩倩，刘宗银，
申请(专利权)人：山东瑞安药业有限公司，
类型：发明
国别省市：