一种发酵液中γ-氨基丁酸的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种发酵液中γ

【技术实现步骤摘要】
一种发酵液中
γ
‑
氨基丁酸的测定方法


[0001]本专利技术属于检测
，具体涉及一种发酵液中γ
‑
氨基丁酸的测定方法。

技术介绍

[0002]γ
‑
氨基丁酸(γ
‑
Aminobutyric acid，GABA)，是分布于哺乳动物、植物和微生物中的非蛋白氨基酸，在生物体内由L
‑
谷氨酸(L
‑
Glu)或L
‑
谷氨酸钠(L
‑
MSG) 经过谷氨酸脱羧酶的作用，脱去一分子羧基而形成。GABA同样作为一种重要的抑制性神经递质，存在于脊椎动物中枢神经系统中，能够起到抑制作用。但年龄增长和精神压力的不断变大会影响人体内谷氨酸转化为GABA，并且当人体缺乏GABA时，会出现焦躁、失眠、疲劳等症状，而通过日常饮食摄入GABA 是补充该功效物质的一种有效方式。
[0003]乳酸菌(Lactic acid bacteria，LAB)是一种存在于人类体内的益生菌，广泛应用于食品行业。LAB作为一种食品安全级的微生物，具有谷氨酸脱羧酶 (glutamic acid decarboxylase，GAD)活性，可以催化L
‑
谷氨酸及其钠盐合成 GABA。因此，挖掘得到一株产GABA的乳酸菌菌株一直是乳酸菌领域的研究热点。
[0004]目前，产GABA乳酸菌菌株的筛选和检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法等，但这些方法都存在着缺陷，比如耗时长、灵敏度低、样品前处理方法繁琐等。因此，开发一种简单、快速筛选产GABA乳酸菌菌株的方法一直是GABA研究的重点，并将其开发应用到食品有待进一步研究。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种发酵液中γ
‑
氨基丁酸的测定方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]一种发酵液中γ
‑
氨基丁酸的测定方法，包括以下步骤：
[0008](1)将发酵液离心，得到第一次上清液；
[0009](2)在所述第一次上清液中加入乙腈，离心得到第二次上清液；
[0010](3)将第二次上清液通过高效液相三重四极杆串联质谱测定γ
‑
氨基丁酸。
[0011]本专利技术中样品前处理简单，通过利用高效液相三重四极杆串联质谱仪快速筛选产γ
‑
氨基丁酸菌株，利于大量样品的检测。
[0012]作为优选，步骤(1)中，离心时间为5
‑
10min，离心转速为8000
‑
10000rpm。
[0013]作为优选，步骤(2)中，所述乙腈和上清液体积比例为1～3：1。
[0014]作为优选，步骤(2)中，所述离心温度为4℃，离心时间为10～20min，离心转速为10000～15000rpm。
[0015]作为优选，所述高效液相三重四极杆串联质谱测定的条件为：
[0016]ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(3.0
×
100mm，1.8μm)，进样量1μL，流动相A相：0.01％甲酸+2mM甲酸铵水溶液，B相：0.01％甲酸+2mM甲酸铵甲醇溶液；
[0017]采用以下梯度：
[0018]95％A：0.0
‑
1.0min，95
‑
10％A：1.0
‑
4.0min，10％A：4.0
‑
6.0min，10
‑
95％A： 6.0
‑
6.1min，95％A：6.1
‑
8.0min。总运行时间为8min，流速为0.40mL/min。
[0019]本专利技术中的检测方法可以适用于多种发酵液的检测，作为优选，所述发酵液由短乳杆菌接种于培养基中发酵得到，所述短乳杆菌分类命名为Lactobacillusbrevis，菌株号为YSJ
‑
3，已于2021年8月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23307。
[0020]作为优选，所述培养基为MRSG肉汤培养基，所述发酵条件为：培养温度 37℃，培养时间为48h。
[0021]本专利技术从野生蘑菇中分离得到一株产γ
‑
氨基丁酸的短乳杆菌YSJ
‑
3，经过上述方法检测，在MRSG肉汤培养基中γ
‑
氨基丁酸含量达1.30mg/mL，本专利技术拓展了产γ
‑
氨基丁酸的乳酸菌菌株来源，为以后乳酸菌，γ
‑
氨基丁酸的工业化生产和应用奠定了基础。
[0022]作为优选，所述培养基由胡萝卜汁以及加入所述胡萝卜汁中的配料混合而成，所述配料包括L
‑
谷氨酸钠、牛肉粉以及葡萄糖；所述发酵条件为：培养温度37℃，培养时间为48h。
[0023]短乳杆菌YSJ
‑
3在以胡萝卜汁为主的培养基里发酵，经过上述方法检测，可以大大提高γ
‑
氨基丁酸的产量，γ
‑
氨基丁酸含量大于2.0mg/mL，并且得到的胡萝卜发酵液可制备得到一种新型的富含γ
‑
氨基丁酸的发酵胡萝卜汁，可以为富含γ
‑
氨基丁酸的食品的发展奠定基础。
[0024]本专利技术中配料的配比对于γ
‑
氨基丁酸产量也有着不同的影响，作为优选，所述L
‑
谷氨酸钠、牛肉粉和葡萄糖在所述胡萝卜汁中的质量百分比分别为 0.3～0.7％、0.3～0.7％和3.0～7.0％。
[0025]作为进一步优选，所述L
‑
谷氨酸钠、牛肉粉和葡萄糖在所述胡萝卜汁中的质量百分比分别为0.5％、0.5％和5％。
[0026]本专利技术与现有技术相比的有益效果是：
[0027]本专利技术利用高效液相三重四极杆串联质谱仪快速筛选产γ
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氨基丁酸菌株的方法，该方法中样品的前处理简单，特异性强，灵敏度高，检出限低，耗时短，节省了时间成本，利于大量样品的快速检测，提供了一种快速、操作简便的γ
‑ꢀ
氨基丁酸测定方法。
[0028]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步描述。
附图说明
[0029]为了更清楚地说明本专利技术实施例技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030]图1为实施例1中LC
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MS/MS测定短乳杆菌YSJ
‑
3发酵液中γ
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氨基丁酸峰图。
[0031]图2为实施例1中LC...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种发酵液中γ
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氨基丁酸的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将发酵液离心，得到第一次上清液；(2)在所述第一次上清液中加入乙腈，离心得到第二次上清液；(3)将第二次上清液通过高效液相三重四极杆串联质谱测定γ
‑
氨基丁酸。2.如权利要求1所述的发酵液中γ
‑
氨基丁酸的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，离心时间为5
‑
10min，离心转速为8000
‑
10000rpm。3.如权利要求1所述的发酵液中γ
‑
氨基丁酸的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙腈和上清液体积比例为1～3：1。4.如权利要求1所述的发酵液中γ
‑
氨基丁酸的测定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述离心温度为4℃，离心时间为10～20min，离心转速为10000～15000rpm。5.如权利要求1～3任一所述的发酵液中γ
‑
氨基丁酸的测定方法，其特征在于，所述高效液相三重四极杆串联质谱测定的条件为：ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(3.0
×
100mm，1.8μm)，进样量1μL，流动相A相：0.01％甲酸+2mM甲酸铵水溶液，B相：0.01％甲酸+2mM甲酸铵甲醇溶液；采用以下梯度：95％A：0.0
‑
1.0min，95
‑
10％A：1.0
‑
4.0min，10％A：4.0
‑
6.0min，10
...

【专利技术属性】
技术研发人员：章检明，易华西，刘玳瑶，刘大群，陈娟，张程程，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：