一种可操控的小鼠肺损伤模型的构建方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种可操控的小鼠肺损伤模型的构建方法和用途，该方法包括取OT I、OTII或WT小鼠的脾脏和淋巴结，研磨制备单细胞悬液，分离纯化，获得静息态T细胞或B细胞；将所述静息态T细胞或B细胞通过尾静脉注射入Rag1

【技术实现步骤摘要】
一种可操控的小鼠肺损伤模型的构建方法和用途


[0001]本专利技术涉及动物模型构建
，具体涉及一种可操控的小鼠肺损伤模型的构建方法和用途。

技术介绍

[0002]呼吸道哮喘、细菌/病毒性肺炎、急性呼吸窘迫综合征等导致的免疫性肺损伤均是临床棘手的医学问题，到目前为止仍有很多的肺损伤相关疾病仅能临床缓解，无法完全治愈。肺组织通过呼吸道与外界相连，同时也是血管丰度最高的组织之一，肺组织中存在大量的不同类型的免疫细胞，在外界抗原的急性/反复性刺激下，诱发免疫系统过度激活，释放出的细胞因子极易产生炎症，诱导免疫性肺损伤。但是何种免疫细胞发挥最为关键的作用，免疫细胞层层级联激活的模式如何评估等等问题，依然是尚未解决的问题，这也限制了靶向治疗肺损伤药物的研发。其原因之一是缺乏一个快速有效的、可操控观察某种免疫细胞亚群激活、分化和趋化等功能的小鼠模型。
[0003]现阶段常用的肺损伤模型有内毒素(LPS)诱导的肺损伤模型、抗原(尘螨、花粉、卵清蛋白)反复刺激诱导的呼吸道过敏/哮喘模型、细菌或病毒感染所致肺损伤模型等。然而，LPS诱导的肺损伤模型仅能观察到固有免疫系统激活，无法评估适应性免疫细胞发挥的功能；呼吸道过敏/哮喘模型仅能评估Th2
‑
B细胞
‑
肥大细胞的免疫轴的生物学功能，且周期较长；细菌或病毒感染需要专业的生物安全实验室，无法广泛使用。此外，以上模型均存在一个共同的缺陷：仅能观察到肺组织的损伤，以及不同种类免疫细胞的动态变化，但无法建立起何种免疫细胞主导肺损伤的直接关联，更无法评估单一免疫细胞亚群的激活能否直接或协同导致肺损伤的产生。机体免疫体系错综复杂，明确肺损伤中多种免疫细胞亚群如何互作，寻找有效的药物研发的免疫靶点，这依赖于可操控观察的肺损伤模型的建立。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。
[0005]为此，根据本专利技术的实施例，本专利技术在一方面提出了一种可操控的小鼠肺损伤模型的构建方法，其包括以下步骤：
[0006]取OT I、OT II或WT小鼠的脾脏和淋巴结，研磨制备单细胞悬液，分离纯化，获得静息态T细胞或B细胞；
[0007]将所述静息态T细胞或B细胞通过尾静脉注射入Rag1
‑
/
‑
小鼠体内，隔天，对Rag1
‑
/
‑
小鼠进行OVA
‑
Alum免疫，激活小鼠免疫系统，构建出CD4
+
T介导的、CD4
+
T+B介导的或CD8
+
T介导的小鼠肺损伤模型。
[0008]根据本专利技术实施例的一种可操控的小鼠肺损伤模型的构建方法，该方案选用后天免疫系统缺失的转基因免疫缺陷的Rag1
‑
/
‑
小鼠为基底，通过向Rag1
‑
/
‑
小鼠体内过继后天免疫细胞(CD4
+
T细胞、CD8
+
T细胞及B细胞)特异性的重赋Rag1
‑
/
‑
小鼠免疫系统，构建在体的、可操控的、T/B细胞介导的肺损伤模型，用于评估靶向作用于后天免疫细胞引起肺损伤的药物
功效或者活性物质的生物学功能。通过检测OVA蛋白特异性识别并激活、分化的T细胞受体转基因小鼠OT II小鼠的CD4
+
T细胞、OT I小鼠的CD8
+
T细胞、B细胞和天然免疫细胞的比例以及细胞数，分析各种免疫细胞亚群释放细胞因子的比例，评估该模型肺损伤的情况及主要作用的细胞亚群。该模型主要呈现出可操控的优势，可根据实验需求调整过继的细胞亚群和比例，控制小鼠肺损伤轻重情况，且实验周期短，具有良好的应用前景。
[0009]另外，根据本专利技术上述实施例提出的一种可操控的小鼠肺损伤模型的构建方法，还可以具有如下附加的技术特征：
[0010]可选地，分离纯化采用anti
‑
biotin microbeads吸附进行磁珠阴性分选。
[0011]可选地，静息态T细胞或B细胞包括CD4
+
T细胞、CD4
+
T+B细胞、CD8
+
T细胞。
[0012]进一步地，所述CD4
+
T细胞为CD4
+
CD62L
+
的Naive CD4
+
T细胞；所述CD4
+
T+B细胞为CD4
+
CD62L
+
的Naive T细胞以及B细胞；所述CD8
+
T细胞为CD8
+
CD62L
+
的Naive CD8
+
T细胞。
[0013]可选地，在尾静脉注射过程，给予每只Rag1
‑
/
‑
小鼠1
×
106个细胞。
[0014]可选地，还包括在第8～10天对Rag1
‑
/
‑
小鼠进行每天OVA滴鼻刺激，诱导小鼠产生T/B细胞特异性介导的肺损伤症状。
[0015]根据本专利技术的实施例，本专利技术在第二方面提出了一种上述的可操控的小鼠肺损伤模型制得的小鼠损伤模型的用途，该模型用于筛选或鉴定能够缓解或治疗肺损伤的药物。
[0016]可选地，在第8～10天对Rag1
‑
/
‑
小鼠进行每天OVA滴鼻刺激，同时对Rag1
‑
/
‑
小鼠进行药物干预。
[0017]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0018]图1为根据本专利技术实施例1中OTII CD4
+
T细胞介导的小鼠肺损伤模型构建的模式图；
[0019]图2为根据本专利技术实施例1的肺损伤表观图及炎症因子释放图；
[0020]图3为根据本专利技术实施例1的肺部淋巴细胞中的天然免疫细胞比例图；
[0021]图4为根据本专利技术实施例2的OTII CD4
+
T+B cell介导的小鼠肺损伤模型构建的模式图；
[0022]图5为根据本专利技术实施例2的肺损伤表观图及炎症因子释放图；
[0023]图6为根据本专利技术实施例2的肺部淋巴细胞中的天然免疫细胞比例图；
[0024]图7为根据本专利技术实施例3的OTI CD8
+
T细胞介导的小鼠肺损伤模型构建的模式图；
[0025]图8为根据本专利技术实施例3的肺损伤表观图及炎症因子释放图；
[0026]图9为根据本专利技术实施例3的肺部淋巴细胞中的天然免疫细胞比例图；
[0027]图10为根据本专利技术实施例4的小檗碱对CD4
+
T细胞介导的小本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可操控的小鼠肺损伤模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：取OT I、OT II或WT小鼠的脾脏和淋巴结，研磨制备单细胞悬液，分离纯化，获得静息态T细胞或B细胞；将所述静息态T细胞或B细胞通过尾静脉注射入Rag1
‑
/
‑
小鼠体内，隔天，对Rag1
‑
/
‑
小鼠进行OVA
‑
Alum免疫，激活小鼠免疫系统，构建出CD4
+
T介导的、CD4
+
T+B介导的或CD8
+
T介导的小鼠肺损伤模型。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，分离纯化采用anti
‑
biotin microbeads吸附进行磁珠阴性分选。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，静息态T细胞或B细胞包括CD4
+
T细胞、CD4
+
T+B细胞、CD8
+
T细胞。4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述CD4
+
T细胞为CD4
+
CD62L
+
的Naive CD4
+
T...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光明，谷福蝶，刘庆梅，刘文贤，刘晨风，周钰，洪雅贞，刘红，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：