一种同时测定血清中多种类固醇激素的试剂盒及方法技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及一种同时测定血清中多种类固醇激素的试剂盒及方法。本发明专利技术提供了检测试剂，包括：校准品、质控品、内标准品、萃取剂、复溶剂和缓冲液；所述萃取剂包括甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷或正庚烷中的一种或多种；所述复溶剂包括甲醇水溶液。本发明专利技术提供的试剂盒，仅需200μL血清样本即可达到同时检测多种类固醇激素浓度的目的，仅采用二步萃取法即可准确测定血中极低浓度(ng/mL级别)的多种类固醇激素的含量，与现有检测多种类固醇激素技术相比，本发明专利技术提供的试剂盒操作简单、灵敏准确、线性动态范围广(400倍)、可同时测定多种类固醇激素，可用于临床血清中多种类固醇激素的常规检测。床血清中多种类固醇激素的常规检测。

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定血清中多种类固醇激素的试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，尤其一种同时测定血清中多种类固醇激素的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]类固醇激素(Steroid hormones)又称甾体激素，是一类脂溶性小分子激素，由胆固醇经一系列酶催化代谢产生，包括盐皮质激素、糖皮质激素和性激素，是以环戊烷多氢菲为母核，按化学结构分为雄甾烷、雌甾烷和孕甾烷。类固醇激素在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。类固醇激素主要通过血液传递，以很小的剂量与受体结合而发挥作用，具有极高的专属性。当体内类固醇激素水平紊乱时，会引起一些疾病，如先天性类固醇代谢紊乱(如先天性肾上腺增生、先天性发育障碍和先天性盐稳态失调等)和获得性类固醇代谢紊乱(如原发性醛固酮增多症、库欣综合征、艾迪生病、高雄激素血症及精神状态疾病)等。
[0003]类固醇激素在生物体内含量很低、结构相似、种类繁多、浓度差距大，一般在nmol/L和pmol/L数量级，并且随年龄、性别的不同而异，所以准确定量类固醇激素对仪器的灵敏度及方法的准确度有极高的要求。
[0004]目前，类固醇激素的检测方法主要为化学免疫法、气相色谱
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质谱联用技术、液相色谱串联质谱法。20世纪前，化学免疫法因操作简单快速，在临床广泛应用，但传统的化学免疫法存在很多缺陷：1)灵敏度低，当样本浓度很低时，需要较大的样本量富集、纯化；2)适用性差，待测物的抗体易与结构相似的内源性物质或代谢产物产生交叉反应，造成假阳性结果；3)分析效率低，通常1次只能测定1种物质，无法同时进行多种激素的定性和定量分析，因此，化学免疫法已逐渐被色谱法替代。气相色谱
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质谱联用技术灵敏度高，但往往需要烦琐的衍生化步骤以及较长的分析时间(一般≥30min)，并且目前缺乏一种适用于所有类固醇激素的衍生化试剂。液相色谱串联质谱法避免了气相色谱法烦琐的衍生化步骤，且专属性强，能够很好地排除基质中类似结构物质的干扰，是目前最可靠的检测方法。
[0005]因此，建立一种可以同时准确测定多种类固醇激素的分析方法对于临床疾病的诊断具有非常重要的指导意义。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了一种同时测定血清中多种类固醇激素的试剂盒及方法。本申请提供了一种同时测定血清中多种类固醇激素的试剂盒，包括多种类固醇激素混合校准品工作液、多种类固醇激素混合质控品工作液、多种类固醇激素混合稳定同位素内标液、第一萃取剂、第二萃取剂、第一复溶剂、第二复溶剂、缓冲液，本方案操作简便、特异性高、批间差异小、灵敏度高、动态范围宽，可满足临床对多种类固醇激素的检测需求。本申请还提供了一种同时测定血清中多种类固醇激素的方法，无需衍生化处理，通过液液萃取，提取和净化标本，使检测步骤简化。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了检测试剂，包括：校准品、质控品、内标准品、萃取剂、复溶剂和缓冲液；
[0009]所述萃取剂包括甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷或正庚烷中的一种或多种；
[0010]所述复溶剂包括甲醇水溶液。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述甲基叔丁基醚和所述乙酸乙酯的体积比为1:1。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述质控品包括可的松、皮质醇质、皮质酮、11
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脱氧皮质醇、雄烯二酮、睾酮、脱氢表雄酮、17
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羟孕酮质、孕酮、17
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羟孕烯醇酮或硫酸脱氢表雄酮中的一种或多种。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述可的松的浓度为2和20ng/mL；所述皮质醇的浓度为5和50ng/mL；所述皮质酮的浓度为0.2和2ng/mL；所述11
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脱氧皮质醇的浓度为0.1和1ng/mL；所述雄烯二酮的浓度为0.1和1ng/mL；所述睾酮的浓度为0.15和1.5ng/mL；所述脱氢表雄酮的浓度为2和20ng/mL；所述17
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羟孕酮的浓度为0.2和2ng/mL；所述孕酮的浓度为0.4和4ng/mL；所述17
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羟孕烯醇酮的浓度为1和10ng/mL；所述硫酸脱氢表雄酮的浓度为50和500ng/mL。
[0014]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述内标准品包括可的松
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d8、皮质醇
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d4、皮质酮
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d4、11
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脱氧皮质醇
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d7、雄烯二酮
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d7、睾酮
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d3、脱氢表雄酮
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d5、17
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羟孕酮
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d8、孕酮
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d9、17
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羟孕烯醇酮
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d3或硫酸脱氢表雄酮
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d6中的一种或多种。
[0015]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述可的松
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d8的浓度为15ng/mL；所述皮质醇
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d4的浓度为100ng/mL；所述皮质酮
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d4的浓度为1ng/mL；所述11
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脱氧皮质醇
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d7的浓度为0.5ng/mL；所述雄烯二酮
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d7的浓度为1ng/mL；所述睾酮
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d3的浓度为0.75ng/mL；所述脱氢表雄酮
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d5的浓度为10ng/mL；所述17
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羟孕酮
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d8的浓度为2.5ng/mL；所述孕酮
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d9的浓度为2ng/mL；所述17
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羟孕烯醇酮
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d3的浓度为5ng/mL；所述硫酸脱氢表雄酮
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d6的浓度为250ng/mL。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述甲醇水溶液的浓度为30％～100％。
[0017]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述甲醇水溶液的浓度为30％、50％、60％、70％、80％或100％。
[0018]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述校准品包括可的松、皮质醇、皮质酮、11
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脱氧皮质醇、雄烯二酮、睾酮、脱氢表雄酮、17
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羟孕酮、孕酮、17
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羟孕烯醇酮或硫酸脱氢表雄酮中的一种或多种；所述缓冲液包括：4
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羟乙基哌嗪乙磺酸、磷酸钠或硼酸钠缓冲液中的一种或多种。
[0019]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测试剂中，所述可的松的浓度为0.5～200ng/mL；所述皮质醇的浓度为1.25～500ng/mL；所述11
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脱氧皮质醇的浓度为0.025～10ng/mL；所述雄烯二本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测试剂，其特征在于，包括：校准品、质控品、内标准品、萃取剂、复溶剂和缓冲液；所述萃取剂包括甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷或正庚烷中的一种或多种；所述复溶剂包括甲醇水溶液。2.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述甲醇水溶液的浓度为30％～100％。3.如权利要求1或2所述的检测试剂，其特征在于，所述校准品包括可的松、皮质醇、皮质酮、11
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脱氧皮质醇、雄烯二酮、睾酮、脱氢表雄酮、17
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羟孕酮、孕酮、17
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羟孕烯醇酮或硫酸脱氢表雄酮中的一种或多种；所述缓冲液包括：4
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羟乙基哌嗪乙磺酸、磷酸钠或硼酸钠缓冲液中的一种或多种。4.如权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，所述可的松的浓度为0.5～200ng/mL；所述皮质醇的浓度为1.25～500ng/mL；所述11
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脱氧皮质醇的浓度为0.025～10ng/mL；所述雄烯二酮的浓度为0.025～10ng/mL；所述睾酮的浓度为0.0375～15ng/mL；所述脱氢表雄酮的浓度为0.5～200ng/mL；所述17
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羟孕酮的浓度为0.05～20ng/mL；所述孕酮的浓度为0.1～40ng/mL；所述17
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羟孕烯醇酮的浓度为0.25～100ng/mL；所述硫酸氢表雄酮的浓度为12.5～5000ng/mL。5.检测试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李艳妍，江振作，季正超，
申请(专利权)人：吉林大学第一医院，
类型：发明
国别省市：