一种间充质干细胞外囊泡的微流控芯片电泳检测方法技术

本发明专利技术公开了一种间充质干细胞外囊泡的微流控芯片电泳检测方法，属于细胞外囊泡检测技术领域。该方法包括以下步骤：将间充质干细胞外囊泡样本加入微流控芯片电泳通道中，进行检测，分别得到间充质干细胞外囊泡样本的亚群外泌体和微囊泡的信号峰，根据信号峰对间充质干细胞外囊泡亚群进行定性分析；检测过程中使用的电泳缓冲液包括质量比为1:1的2

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞外囊泡的微流控芯片电泳检测方法


[0001]本专利技术涉及细胞外囊泡检测
，特别是涉及一种间充质干细胞外囊泡的微流控芯片电泳检测方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞具有增殖能力强、免疫原性低、多向分化潜能等特点，被广泛地应用于再生医学和各种疾病的组织修复与治疗中。间充质干细胞通过旁分泌机制分泌细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)，内含蛋白质、mRNAs、miRNAs和DNA等多种物质，在细胞通讯中发挥作用。研究表明细胞外囊泡与母体细胞具有相似的作用，其免疫原性更低，并且具有无肿瘤形成的优点，因此引起了研究人员的广泛关注。根据颗粒尺寸大小可将EVs分为两个不同的亚群：外泌体，直径在30
‑
150nm内；微囊泡，直径在200
‑
1000nm内。它们在细胞间通讯和许多生理、病理过程的调控中各自发挥着重要的作用，但由于大小、密度和生物组成的重叠特性，使得它们难以完全区分，因此在研究EVs时单一亚群的个体特征信息可能会被掩盖或丢失，为了更多地了解外泌体和微囊泡的共有和特有的物理化学性质，发展新的检测方法是必不可少的。
[0003]目前常用于检测细胞外囊泡的方法有透射电镜，纳米粒径跟踪分析,蛋白免疫印迹，酶联免疫吸附试验和流式细胞术等。然而这些方法面临着步骤复杂、分析时间长等问题，难以应用于临床。毛细管电泳分离方法是一类新型的液相分离技术，使分析生物分子得以从微升水平进入纳升水平，并使单细胞分析，乃至单分子分析成为可能。有研究使用毛细管电泳结合紫外光检测器或激光诱导荧光检测器实现了外泌体的检测分析，初步显示了基于电泳分离分析的优势，但是这些方法都需要繁杂的衍生化反应，存在低信噪比和光漂白等问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种间充质干细胞外囊泡的微流控芯片电泳检测方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法能够在1min内实现间充质干细胞外囊泡两个亚群的分离与检测，弥补了传统的细胞外囊泡分析方法无法对亚群进行分离分析的不足。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一种间充质干细胞外囊泡的微流控芯片电泳检测方法，包括以下步骤：
[0007]将间充质干细胞外囊泡样本加入微流控芯片电泳通道中，进行检测，分别得到间充质干细胞外囊泡样本的亚群外泌体和微囊泡的信号峰，根据信号峰对间充质干细胞外囊泡亚群进行定性分析；
[0008]检测过程中使用的电泳缓冲液包括质量比为1:1的2
‑
(N
‑
吗啉)
‑
乙磺酸和L
‑
组氨酸。
[0009]进一步地，所述电泳缓冲液的浓度为40mM，pH值为6.0。
[0010]进一步地，所述检测的过程为：
[0011]进样阶段，样品由负极到正极，进样电压为500v，进样时间为40s；分离阶段，样品由负极到正极，分离电压为1000v，运行温度25℃，并将分离阶段的样品电导信号转为电压信号，至出现两个明显的信号峰，结束检测。
[0012]进一步地，先出现的信号峰为间充质干细胞外囊泡亚群外泌体，后出现的信号峰为间充质干细胞外囊泡亚群微囊泡。
[0013]进一步地，所述间充质干细胞外囊泡样本是将间充质干细胞外囊泡与所述电泳缓冲液按体积比1:1混匀后得到的。
[0014]进一步地，所述间充质干细胞外囊泡样本的浓度为109‑
10
11
颗粒/mL。
[0015]进一步地，进行检测前，分别用0.1M氢氧化钠、去离子水和所述电泳缓冲液清洗电泳通道20min。
[0016]进一步地，所述电泳缓冲液进行过滤后再使用。
[0017]本专利技术公开了以下技术效果：
[0018]本专利技术实现了间充质干细胞外囊泡快速高效的检测，可以在短时间内分离并检测出外泌体和微囊泡两个亚群的峰信号，并且操作简单、无需衍生化处理、样品消耗量少，大大降低了成本。本专利技术为含有细胞外囊泡样品的质量控制提供了一个有用且易于使用的方案，可高效便捷地获取间充质干细胞外囊泡不同亚群的定性信息。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为间充质干细胞外囊泡的检测方案示意图；
[0021]图2为不同种类电泳缓冲液对间充质干细胞外囊泡分离检测的影响；
[0022]图3为不同浓度的MES/His电泳缓冲液对间充质干细胞外囊泡分离检测的影响；
[0023]图4为不同pH值的MES/His电泳缓冲液对间充质干细胞外囊泡分离检测的影响；
[0024]图5为间充质干细胞外囊泡样本1的电泳结果图谱；
[0025]图6为间充质干细胞外囊泡样本2的电泳结果图谱；
[0026]图7为不同浓度间充质干细胞外囊泡与信号峰总面积的线性拟合图。
具体实施方式
[0027]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0028]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0029]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0030]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0031]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0032]本专利技术所使用的材料、仪器及试剂如无特殊说明，均可由商业途径获得；所使用的实验方法如无特殊说明，均为本领域常规实验方法。
[0033]1材料和方法
[0034]1.1实验方法
[0035]选择微芯片电泳无机离子便捷式检测仪(设备型号：MEP
‑
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞外囊泡的微流控芯片电泳检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将间充质干细胞外囊泡样本加入微流控芯片电泳通道中，进行检测，分别得到间充质干细胞外囊泡样本的亚群外泌体和微囊泡的信号峰，根据信号峰对间充质干细胞外囊泡亚群进行定性分析；检测过程中使用的电泳缓冲液包括质量比为1:1的2
‑
(N
‑
吗啉)
‑
乙磺酸和L
‑
组氨酸。2.根据权利要求1所述的微流控芯片电泳检测方法，其特征在于，所述电泳缓冲液的浓度为40mM，pH值为6.0。3.根据权利要求2所述的微流控芯片电泳检测方法，其特征在于，所述检测的过程为：进样阶段，样品由负极到正极，进样电压为500v，进样时间为40s；分离阶段，样品由负极到正极，分离电压为1000v，运行温度25℃，并将分离阶段的样...

【专利技术属性】
技术研发人员：王立升，孙瑞，尤晖，刘亚平，黄红日，王辉煌，刘旭，
申请(专利权)人：广西泰美人生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：