一种维血宁合剂的HPLC检测方法技术

本发明专利技术公开了一种维血宁合剂及其中间品的HPLC检测方法，它包括如下步骤：1)对照品溶液制备；2)供试品溶液制备；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪。本发明专利技术首次采用HPLC建立维血宁合剂中表儿茶素、木犀草素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、儿茶素和白藜芦醇8种成分的含量测定方法，并且采用外标法和一测多评法对比维血宁合剂的含量差异，验证实验方法的可行性。同时，通过建立3批维血宁合剂提取液、清膏、成品的指纹图谱，并识别出27个共有峰，建立从“中间体

【技术实现步骤摘要】
一种维血宁合剂的HPLC检测方法


[0001]本专利技术涉及一种维血宁合剂的HPLC检测方法。

技术介绍

[0002]维血宁合剂收载于2020版《中国药典》一部，由虎杖、炒白芍、仙鹤草、地黄、鸡血藤、熟地黄、墨旱莲和太子参8味药材组成，具有滋养阴液、益气生血、清热解毒的功效，临床常用于外感风热所致的出血，血小板减少症，化疗后白细胞减少，小儿贫血等。
[0003]目前，对维血宁合剂的质量控制还停留在对方中单个成分进行定量研究，主要集中在大黄素、虎杖苷、芍药苷麦角甾苷和白藜芦醇等成分的定量。不能全面反映维血宁合剂整体质量。多组份整体质量控制已成为中药复方制剂质量控制发展的必由之路。
[0004]曹瑞等，维血宁的HPLC指纹图谱研究[J]，其只能测定维血宁中的虎杖苷,大黄素
‑8‑
O
‑
β
‑
D葡萄糖苷,大黄素甲醚
‑8‑
O
‑
β
‑
D葡萄糖,大黄素和大黄素甲醚共5种成分，仍然不实现中药复方制剂维血宁合剂的高效的质量控制。

技术实现思路

[0005]为解决上述问题，本专利技术提供了一种维血宁合剂及其中间品的HPLC检测方法，它包括如下步骤：
[0006]1)对照品溶液制备：取儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和/或木犀草素对照品，加甲醇溶液溶解稀释成溶液，即得对照品溶液；
[0007]2)供试品溶液制备：取待检样品，加甲醇溶液溶解，过滤，取滤液作为供试品溶液；
[0008]3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪；色谱条件如下：
[0009]色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸水为流动相B；梯度洗脱程序0～5min，75％B；5～15min，75％B
→
65％B；15～25min，65％B
→
55％B；25～35min，55％B
→
40％B；35～45min，40％B
→
30％B；45～55min，30％B
→
20％B；55～60min，20％B
→
65％B；60～62min，65％B
→
75％B。
[0010]进一步地，步骤1)所述对照品与甲醇溶液的质量体积比为0.5～250μg：1ml。
[0011]进一步地，步骤2)所述待检样品和甲醇的体积比为1～5ml：1～50ml。
[0012]更进一步地，所述待检样品为维血宁合剂或其中间品。
[0013]更进一步地，所述中间品为维血宁合剂的原料药提取液或原料药提取液浓缩的清膏。
[0014]进一步地，步骤3)所述色谱条件中色谱柱：Acclaim120 C18，250mm
×
4.6mm,5μm，柱温30℃，进样量10～50μL，流速为1ml/min，检测波长：210nm。
[0015]进一步地，所述维血宁合剂及其中间品的指纹图谱中有应有27个共有特征峰，所述共有特征峰包含与儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和木犀草素相应的色谱峰。
[0016]本专利技术还提供了一种维血宁合剂及其中间品指标成分的含量测定方法，它包括如
下步骤：
[0017]1)取维血宁合剂及其中间品，以及儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和/或木犀草素对照品，按前述方法检测；
[0018]2)按外标法以峰面积计算维血宁合剂及其中间品中儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和/或木犀草素的含量。
[0019]或：
[0020]1)取维血宁合剂及其中间品，以及儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇、木犀草素对照品中的任意一种，按前述方法检测；
[0021]2)先按外标法以峰面积计算对照品对应成分含量，再使用相对校正因子计算待测样品中其余成分的含量。
[0022]进一步地：所述相对校正因子按照下述方法得到：
[0023]取儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和木犀草素对照品，根据前述方法检测，择一对照品为内参物，根据如下公式计算：
[0024]f
s/i
＝f
s
/f
i
＝A
s
×
C
i
/(A
i
×
C
s
)；式中A
s
为内参物s峰面积，C
s
为内参物s浓度，A
i
为组分i峰面积，C
i
为组分i浓度。
[0025]进一步地，所述内参物为虎杖苷时，虎杖苷与儿茶素的相对矫正因子为0.3754，虎杖苷与表儿茶素的相对矫正因子为0.3486，虎杖苷与染料木素的相对矫正因子为0.5887，虎杖苷与芒柄花素的相对矫正因子为0.6599，虎杖苷与槲皮素的相对矫正因子为0.5972，虎杖苷与白藜芦醇的相对矫正因子为0.5853，虎杖苷与木犀草素的相对矫正因子为0.5176。
[0026]本专利技术首次采用HPLC建立维血宁合剂中表儿茶素、木犀草素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、儿茶素和白藜芦醇8种成分的含量测定方法，并且采用外标法和一测多评法对比维血宁合剂的含量差异，验证实验方法的可行性。同时，通过建立3批维血宁合剂提取液、清膏、成品的指纹图谱，并识别出27个共有峰，建立从维血宁合剂“中间体
‑
成品”的质量管理体系，完善了维血宁合剂的质量控制方法。
[0027]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0028]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0029]图1维血宁合剂色谱图(1儿茶素2表儿茶素3虎杖苷4白藜芦醇5槲皮素6木犀草素7染料木素8芒柄花素A混合对照品ⅠB供试品C阴性样品
[0030]图2维血宁合剂指纹图谱(1～8儿茶素、表儿茶素、虎杖苷、白藜芦醇、槲皮素、木犀草素、染料木素、芒柄花素)
具体实施方式
[0031]本专利技术具体实施方式中使用的试剂、试药、设备均为已知产品，通过购买市售产品
获得。
[0032]实施例1本专利技术维血宁合剂中成分含量测定方法(外标法)
[0033]1)对照品溶液的制备
[0034]分别精确称取儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷和白藜芦醇对照品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度线，获本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种维血宁合剂及其中间品的HPLC检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：1)对照品溶液制备：取儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲皮素、虎杖苷、白藜芦醇和/或木犀草素对照品，加甲醇溶解稀释成溶液，即得对照品溶液；2)供试品溶液制备：取待检样品，加甲醇溶液溶解，过滤，取滤液作为供试品溶液；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪；色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸水为流动相B；梯度洗脱程序0～5min，75％B；5～15min，75％B
→
65％B；15～25min，65％B
→
55％B；25～35min，55％B
→
40％B；35～45min，40％B
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30％B；45～55min，30％B
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20％B；55～60min，20％B
→
65％B；60～62min，65％B
→
75％B。2.根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤1)所述对照品与甲醇的质量体积比为0.5～250μg：1ml。3.根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤2)所述待检样品和甲醇的体积比为1～5ml：1～50ml。4.根据权利要求3所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述待检样品为维血宁合剂或其中间品。5.根据权利要求4所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述中间品为维血宁合剂的原料药提取液或原料药提取液浓缩的清膏。6.根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤3)所述色谱条件中色谱柱：Acclaim120 C18，250mm
×
4.6mm,5μm，柱温30℃，进样量10～50μL，流速为1ml/min，检测波长：210nm。7.根据权利要求1～6任意一项所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述维血宁合剂及其中间品的指纹图谱中有应有27个共有特征峰，所述共有特征峰包含与儿茶素、表儿茶素、染料木素、芒柄花素、槲...

【专利技术属性】
技术研发人员：董泰玮，邹俊波，秦媛，张小飞，史亚军，孙静，问思华，杨焕，
申请(专利权)人：陕西中医药大学，
类型：发明
国别省市：