ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用，本发明专利技术中的ResolvinD1对肠道细胞凋亡的缓释作用是下调GRP78基因和Caspase

【技术实现步骤摘要】
ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用。

技术介绍

[0002]肠道上皮是动物肠道屏障抵抗病原入侵的第一道防线，具有发达的内质网结构。内质网参与可溶性蛋白质和膜蛋白质的生物合成、折叠、加工和修饰，也是调节钙离子存储和脂类(胆固醇、类固醇)合成代谢的重要场所。肠上皮的众多细胞群也依赖于内质网稳态，以保持其正常功能和肠道屏障的稳定。
[0003]仔猪受早期断奶、病原菌入侵(主要是大肠杆菌及其细胞壁成分脂多糖(LPS)刺激)和营养缺乏等多种生理或病理因素刺激，容易引发内质网应激及其介导的肠上皮细胞凋亡，进而导致肠上皮细胞损伤和肠道屏障损坏。因此，减少内质网应激及其介导的肠上皮细胞凋亡对于保护动物肠道健康和防治肠道疾病具有重要意义。
[0004]Resolvin是一类由n
‑
3多不饱和脂肪酸衍生而来的具有生物活性的脂质介质，目前关于Resolvin对肠道屏障的调控作用的研究主要集中在炎症病理模型上。研究表明，Resolvin D1(简写为RvD1)可减轻结肠炎小鼠的炎症，其作用是抑制NLRP3炎性小体信号通路；具体地，Resolvin D1处理诱导了肠道碱性磷酸酶的表达并增强其活性，它具有保护肠道粘膜免受细胞脂多糖的损害，进而改善结肠炎小鼠的肠道炎症。
[0005]尽管目前研究表明Resolvin能够减少肠道炎症进而维护肠道屏障健康，但是Resolvin对内质网应激介导的肠上皮细胞凋亡具有怎样的影响作用目前尚未明确。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中存在的上述问题，本专利技术提供一种ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用。
[0007]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0008]ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用。
[0009]本专利技术的有益效果为：本专利技术药物中的ResolvinD1抑制内质网应激基因GRP78和凋亡基因Caspase
‑
3的表达，同时促进抗凋亡基因Bcl
‑
2的表达，进而缓释了肠道细胞凋亡。
[0010]在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进：
[0011]进一步，该药物是通过下调GRP78基因和Caspase
‑
3基因的表达以及上调Bcl
‑
2基因的表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。
[0012]进一步，该药物是通过抑制GRP78基因的mRNA表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。
[0013]进一步，该药物是通过抑制Caspase
‑
3基因的mRNA表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。
[0014]进一步，该药物是通过促进Bcl
‑
2基因的mRNA表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。
[0015]进一步，该药物是通过抑制GRP78蛋白的表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。
[0016]进一步，该药物是通过抑制Caspase
‑
3蛋白的表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。
[0017]进一步，该药物是通过促进Bcl
‑
2蛋白的表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。
[0018]进一步，一种缓解肠道细胞凋亡药物，主要活性成份为ResolvinD1。
[0019]本专利技术具有以下有益效果：
[0020]本专利技术利用具有生物活性的脂质介质ResolvinD1来缓解动物肠道细胞凋亡，不仅获得一种新的维护动物肠道屏障正常功能和保护肠道健康的方法外，另外，该生物活性物质无毒副作用，在一定程度上减少了抗生素等化学物质的使用。
[0021]本专利技术首先通过衣霉素刺激构建肠上皮细胞内质网应激
‑
细胞凋亡模型，在此基础上用不同浓度ResolvinD1缓解，发现1nM的ResolvinD1显著缓解了衣霉素诱导的肠上皮细胞内质网应激和凋亡，并且早期、晚期和总的细胞凋亡率分别降低了21.67％、29.67％和26.03％(P<0.05)；在小鼠上的试验结果表明，ResolvinD1处理使得小鼠采食量增加了10.05％(P<0.05)，空肠隐窝深度减少了15.21％(P<0.05)，空肠上皮细胞凋亡率降低了32.28％(P<0.05)。本专利技术中ResolvinD1对肠道细胞凋亡缓释的机理是，ResolvinD1与内质网应激基因GRP78和凋亡基因Caspase
‑
3的表达下调以及抗凋亡基因Bcl
‑
2的表达上调有密切关系，具体为：ResolvinD1抑制内质网应激基因GRP78和凋亡基因Caspase
‑
3的表达，同时促进抗凋亡基因Bcl
‑
2的表达。
附图说明
[0022]图1为衣霉素诱导肠上皮细胞内质网应激
‑
凋亡模型，其中，图1中的A图为不同浓度tuni处理下GRP
‑
78和内参基因Gapdh的蛋白条带，图1中的B图为不同浓度tuni处理下GRP
‑
78蛋白的相对表达量，图1中的C图为tuni不同处理时间下GRP
‑
78和内参基因Gapdh的蛋白条带，图1中的D图为tuni不同处理时间下GRP
‑
78蛋白的相对表达量，图1中的E图为正常细胞和1μg/mL tuni处理9h后细胞的AO/EB染色结果图；
[0023]图2为ResolvinD1的毒性检测及其对细胞活力的影响，其中，图2中的A图为不同浓度ResolvinD1下LDH的释放率，图2中的B图为不同浓度ResolvinD1下细胞活率；
[0024]图3为ResolvinD1缓解内质网应激和细胞凋亡的有效浓度测定，其中，图3中的A图为tuni刺激下的不同浓度ResolvinD1处理的细胞活率(％)，图3中的B图为GRP
‑
78基因的mRNA相对表达量，图3中的C图为Caspase
‑
3基因的mRNA相对表达量；
[0025]图4为ResolvinD1缓解内质网应激诱导的肠上皮细胞凋亡，其中，图4中的4
‑
1为AO/EB染色结果，图4中的4
‑
2为流式细胞仪检测结果，图4中的4
‑
3为细胞凋亡率；
[0026]图5为内质网应激和凋亡相关基因mRNA表达水平；
[0027]图6为内质网应激和凋亡相关蛋白的表达水平；
[0028]图7为小鼠体重与采食量结果图，其中，图7中的A图为采食量结果，图7中的B图为试验末小鼠体重结果；
[0029]图8为ResolvinD1对小鼠空肠细胞凋亡的影响，其中，图8中的A图为Tunel检测结果，图8中的B图为小肠细胞凋亡率结果；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用。2.根据权利要求1所述的ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用，其特征在于，该药物是通过下调GRP78基因和Caspase
‑
3基因的表达以及上调Bcl
‑
2基因的表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。3.根据权利要求2所述的ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用，其特征在于，该药物是通过抑制GRP78基因的mRNA表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。4.根据权利要求2所述的ResolvinD1在制备缓解肠道细胞凋亡药物中的应用，其特征在于，该药物是通过抑制Caspase
‑
3基因的mRNA表达对肠道细胞凋亡起缓释作用。5.根据权利要求2所述的ResolvinD1在制备缓解肠道细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：王敬，齐仁立，邱小宇，王琪，杨飞云，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：