EPA在制备治疗系统性红斑狼疮的药物上的应用技术方案

本发明专利技术公开了一种EPA在制备治疗系统性红斑狼疮的药物上的应用。在本发明专利技术研究中发现在cGVH狼疮小鼠模型中，EPA可以显著上调Treg细胞，下调Th17细胞，进一步抑制IgG的分泌，从而发挥免疫抑制作用。通过cGVH狼疮动物模型，我们发现在97％EPA治疗组中，具有免疫调节功能的Treg细胞显著增加，而作为SLE主要致病效应细胞的Th17细胞比例明显的降低，其外周血中总IgG的分泌量也显著下降。综合结果表明EPA是通过增加Treg细胞，减少Th17细胞的分化比例缓解SLE发病严重度。总而言之，我们的数据表明高纯度EPA在调控SLE病理中具有关键作用，可为SLE治疗提供新可供选择的药物。治疗提供新可供选择的药物。治疗提供新可供选择的药物。

【技术实现步骤摘要】
EPA在制备治疗系统性红斑狼疮的药物上的应用


[0001]本专利技术涉及医药
中的自身免疫疾病治疗领域，具体涉及EPA在制备治疗系统性红斑狼疮的药物上的应用。

技术介绍

[0002]系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)是一种多发于青年女性的累及多脏器的自身免疫性结缔组织病，具有广泛的临床表现。有研究表明其免疫病理反应主要表现为细胞因子、B细胞免疫和T细胞信号转导的异常。传统的SLE治疗以非特异性的激素和免疫抑制剂为主，长期使用可引起严重的副作用和不良反应。因此需要寻找到一种安全可靠的有效治疗，替代或减少激素和免疫抑制剂的使用是SLE长期治疗的一个重要方向。
[0003]人类和动物研究表明ω
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3多不饱和脂肪酸(ω
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3polyunsaturated fatty acids, ω
‑
3PUFAs)可以抑制炎症。ω
‑
3PUFAs主要包括3种，分别为α
‑
亚麻酸(18:3；ω
‑
3；α
‑
LA)，二十二碳五烯酸(20:5；ω
‑
3；EPA)，和二十二碳六烯酸(22:6；ω
‑
3； DHA)。它们是必需脂肪酸，人体不能自主合成，需从外界摄入。研究表明，低比例的ω
‑
6/ω
‑
3PUFAs(接近1:1)可以降低许多慢性疾病的风险，如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化症和Ⅰ型糖尿病(Xiaoxi Li,Xinyun Bi, Shuai Wang,Zongmeng Zhang,(2019).Therapeutic potential ofω
‑
3polyunsaturatedfatty acids in human autoimmune diseases,Frontiers in Immunology,10,2241.)。
[0004]在系统性红斑狼疮中，T细胞参与了自身免疫的启动和持续，B细胞可通过抗体依赖性或非依赖性促进或抑制自身免疫。一项独立研究发现富含ω
‑
3PUFAs 的饮食可延缓狼疮小鼠的发作并显著减轻自身免疫性肾小球肾炎，血浆自身抗体和蛋白尿的严重程度。近年来越来越多的研究聚焦于ω
‑
3PUFAs中关键成分EPA 对各种疾病的影响。有研究已证明纯化的EPA(而非DHA)具有潜在的抗动脉粥样硬化性抗氧化剂和膜稳定作用。因此，利用高纯度EPA作为免疫调节药物，辅助或减少副作用明显的激素类药物和免疫抑制药治疗系统性红斑狼疮。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种安全有效的药物
‑
高纯度EPA，应用于辅助或减少副作用明显的激素类药物和免疫抑制药治疗系统性红斑狼疮。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0007]SLE狼疮小鼠模型构建方法，本专利技术使用慢性移植抗宿主病模型(Chronicgraft versus host disease,cGVH)，该模型是通过骨髓移植诱导小鼠的狼疮特征。将bm12小鼠淋巴细胞腹腔注射到C57BL/6J(B6)小鼠体内，建立cGVH小鼠模型，该模型受体的抗原提呈细胞(Antigen presenting cells,APCs)对供体CD4+T 细胞的异源激活导致cGVH，其症状与SLE相似。
[0008]进一步地，使用高纯度EPA对狼疮小鼠进行治疗。
[0009]进一步地，检测狼疮小鼠脾脏淋巴细胞Treg、Th17细胞亚群分化情况。
[0010]进一步地，检测狼疮小鼠血清中总IgG含量。
[0011]上述药物的给药方式可通过口服给药，包括胶囊剂、滴丸，或其他不容易暴露在空气中的其他制剂。
[0012]本专利技术与现有技术相比，具有的优势：本专利技术首次研究了高纯化EPA对 cGVH狼疮小鼠模型的免疫调节作用，探索纯化EPA对狼疮小鼠T淋巴细胞亚群的调控作用，为进一步探索高纯度EPA应用于系统性红斑狼疮的临床治疗提供可行性分析和前期数据，为将来利用高纯度EPA作为免疫调节药物，辅助或减少副作用明显的激素类药物和免疫抑制药物提供研究依据。
附图说明
[0013][0014]图1是cGVH小鼠造模和给药时间分布。
[0015]图2是高纯度EPA上调狼疮小鼠脾脏Treg淋巴细胞亚群。其中，PBS组：正常对照组；cGVH组：模型对照组；EPA组：97％EPA干预组。(n＝8)，与 PBS组相比，**P<0.01；与cGVH组相比，
##
P<0.01。
[0016]图3是高纯度EPA下调狼疮小鼠脾脏Th17淋巴细胞亚群。其中，PBS组：正常对照组；cGVH组：模型对照组；EPA组：97％EPA干预组。(n＝8)，与 PBS组相比，**P<0.01；与cGVH组相比，
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P<0.05。
[0017]图4是高纯度EPA抑制狼疮小鼠血清中IgG的分泌。其中，PBS组：正常对照组；cGVH组：模型对照组；EPA组：97％EPA干预组。(n＝8)，与PBS 组相比，**P<0.01；与cGVH组相比，
#
P<0.05。
具体实施方式
[0018]根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。
[0019]验证：
[0020]1.cGVH狼疮小鼠构建及治疗分组
[0021]1)提取bm12小鼠脾脏单个淋巴细胞悬液：脱颈椎处死小鼠，75％酒精放置10min，在超净工作台内取小鼠脾脏，放入无菌PBS中，用镊子拉碎，70 目筛网过滤除去组织和团块，4℃、300g离心10min，加入预冷的红细胞裂解液，充分混匀振荡，4℃静置5min，4℃、300g离心10min，去上清，适量无菌PBS重悬，获得无菌脾脏单个细胞悬液。
[0022]2)小鼠分组：C57BL/6J小鼠被随机分为正常对照组，模型对照组，EPA组，每组8只。模型组和EPA组小鼠均接受腹腔注射1
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108个供体bm12小鼠脾脏悬液细胞，建立cGVH模型小鼠，正常对照组腹腔注射等体积PBS。从造模当天开始，EPA组灌胃含97％EPA的乙酯型鱼油(4g/kg/d)，正常和模型对照组灌胃生理盐水，连续2周。于末次给药后第2天，所有小鼠均处死，进行免疫指标检测，并取实验小鼠的血样。小鼠模型建立和给药时间分布如图1所示。
[0023]2.检测狼疮小鼠外周血EPA含量
[0024]1)脂肪酸的分离提取：
[0025]标注第一套锥形玻璃管
[0026]A.将100μl小鼠血清样品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种EPA在制备治疗系统性红斑狼疮的药物上的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物...

【专利技术属性】
技术研发人员：李芳红，曾靖雯，刘傲璐，王帅，赵子建，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：