一种基于CP8基因的猫滴虫病的实时荧光PCR诊断方法技术

本发明专利技术公开了一种基于CP8基因的猫滴虫病的实时荧光PCR诊断方法，包括以下步骤：包括引物设计与合成、猫滴虫DNA标准模板CP8

【技术实现步骤摘要】
一种基于CP8基因的猫滴虫病的实时荧光PCR诊断方法


[0001]本专利技术涉及病毒检测领域，确切地说是一种基于CP8基因的猫滴虫病的实时荧光PCR诊断方法。

技术介绍

[0002]猫滴虫除了寄生胃肠道外，也可寄生在猫的泌尿生殖道中，导致猫子宫积脓，但在已经接受过卵巢子宫切除术或去势术治疗的健康猫中尤其罕见。滴虫体外虫体培养也是一种猫滴虫病敏感性特别强的检测手段，常用的体外商品化培养系统有两种，TF培养系统和改良的Diamond培养基。但由于价格昂贵加之培养技术困难且耗时较长，故不适合大量推广使用。急需建立一种快速、敏感的猫滴虫病检测手段以供临床所需。本研究以重组质粒标准品CP8
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pUCm
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T Vector为模板，通过对一系列反应条件的优化，建立一种猫滴虫SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR诊断方法，有望为临床猫滴虫病的诊断提供一种更快速、更准确的检测手段。
[0003]实时荧光定量PCR是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CP8基因的猫滴虫病的实时荧光PCR诊断方法，其特征在于，包括以下步骤(1)引物设计与合成根据基因序列表所得序列，应用Primer Primer 5.0软件设计一对特异性引物，F2：5'
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ACAAGTTCGCTGCTATGACCC
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3'，R2：5'
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AACAACGCCCTTTTCACGCC
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3'，扩增预期片段大小为137bp，引物经Primer
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BLAST初步验证，后进行合成；(2)制备猫滴虫DNA标准模板CP8
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pUCm
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T Vector质粒标准品；(3)荧光定量PCR反应反应总体系20μL，其中SYBR GreenⅠMaster荧光染料10μL，10μmol/μL上下游引物各0.4μL，CP8
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pUCm
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T Vector标准品模板2μL，用ddH2O补足至20μL；反应程序为：首先95℃预变性3min，95℃5s，59.3℃30s，65℃5s，共40个循环，最后95℃延伸5min。2.根据权利要求1所述的一种基于CP8基因的猫滴虫病的实时荧光PCR诊断方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵洪喜，刘继兵，昝晓庆，丁宝隆，
申请(专利权)人：宁夏大学，
类型：发明
国别省市：