一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法技术

一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法，属于生物制兽药领域。本发明专利技术利用原生态奶牛乳房炎的病原菌和病毒，并加入奶牛乳房炎主要菌类金黄色葡萄球菌和埃希氏大肠杆菌以增强生物诱导力，通过弱超声波激活各种菌和病毒活力。在智能化培育过程中，强势诱导大头金蝇幼虫体内产生相对应的抗菌肽和抗菌蛋白，该抗菌肽和抗菌蛋白具有生物活性高、作用广谱性特点，临床治疗效果表明，本发明专利技术制备的药物疗效好，有效率高。本发明专利技术生产过程易于工业化控制，产品一致性好，节省能源，适合规模化生产。适合规模化生产。适合规模化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法


[0001]本专利技术属于生物制兽药领域，具体涉及一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法。

技术介绍

[0002]奶牛乳房炎是饲养奶牛时的常见病，症状为乳房实质、间质的炎症，病因是由机械性刺激、病原微生物侵入或者化学物理损伤所致。
[0003]特别是随着奶牛业的集约化、规模化程度的提高，乳房炎的发生率也日益增多。其中病原体感染涉及150多种病原微生物，包括发病率较高的金黄色葡萄球菌、链球菌，也有大肠杆菌、克雷伯氏杆菌、溶血性沙门氏菌、枸橼酸杆菌。同时还有霉形体、念珠菌、隐球菌和曲霉菌，有疱疹病毒、牛痘病毒、口蹄疫病毒等各种生物性因素导致的奶牛乳房炎。因此，奶牛乳房炎是一大类多种原因引发的疾病。
[0004]现在用于治疗奶牛乳房炎的常用药物是生物药物、中药、抗生素等药物。
[0005]CN106117315A公开了五肽在治疗金葡菌奶牛乳房炎中的医用用途，所说的五肽序列为Leu
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Pro
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Arg
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Asp
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Ala，可抑制金葡菌分选酶催化活性，降低细菌表面蛋白锚定，阻碍黏附定殖，对金葡菌乳房炎具有较好的治疗效果。
[0006]CN106188233A公开了一种治疗金葡菌奶牛乳房炎的多肽及制备工艺，所说五肽序列为Leu
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Pro
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Arg
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Asp
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Ala。
[0007]CN107802654A公开了灭活乳酸菌在防治牛细菌性疾病药物中的应用，其特征在于对所述的灭活乳酸菌保持完整菌体形态，药物为混悬剂或粉针剂。
[0008]CN106916830A公开了一种金黄色葡萄球菌黏附素蛋白的制备方法，其特征在于经过重组质粒、诱导表达、蛋白大量表达及纯化，制备了黏附素蛋白。
[0009]CN105597082A公开了一种含有抗菌肽的奶牛乳房注入剂及其制备方法，其注入剂是由盐酸林可霉素、乳酸链球菌肽、甘油硬脂酸酯、润湿剂、注射用油组成。
[0010]CN103386115A公开了胸腺五肽在制备治疗乳房炎药物中的应用。
[0011]CN102304185A公开了预防奶牛乳房炎的融合蛋白SIP
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TRAP及其制备方法和应用，该蛋白是将无乳链球菌的Sip基因和金黄色葡萄球菌的Trap基因连接后的融合基因插入载体进行表达纯化获得。
[0012]CN1981827A公开了一种治疗牛乳房炎的乳房注入剂，它是以山楂为原料经提取加工的中药药物。
[0013]马保臣等在中国兽医杂志2003年第7期发表的论文“17种中药对奶牛乳腺炎4种病原菌的抑菌实验”，用17种常见的中草药组成3个药方，对奶牛乳腺炎4种病原体做了抑菌实验。结果表明，中草药按一定比例配制后对引发奶牛乳腺炎的病原菌有较强的抑菌作用。
[0014]谭泽民等人在今日畜牧兽医2009年第10期发表的论文“基因药物、中药、抗生素治疗奶牛乳房炎效果比较”，用基因工程药物、中药、抗生素分别对奶牛乳房炎的治疗效果进行比较，不同药物治疗效果差异较大。

技术实现思路

[0015]本专利技术的目的是为了解决现有治疗奶牛乳房炎效果不显著的问题，提供一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法，该方法利用原生态奶牛乳房炎的病原菌和病毒，并加入奶牛乳房炎主要菌类金黄色葡萄球菌和埃希氏大肠杆菌以增强生物诱导力，通过弱超声波激活各种菌和病毒活力。在智能化培育过程中，强势诱导大头金蝇幼虫体内产生相对应的抗菌肽和抗菌蛋白，该抗菌肽和抗菌蛋白具有生物活性高、作用广谱性特点，临床治疗效果表明，本专利技术制备的药物疗效好，有效率高。本专利技术生产过程易于工业化控制，产品一致性好，节省能源，适合规模化生产。
[0016]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0017]一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法，所述方法具体步骤为：
[0018]步骤一：将1000mL
‑
5000mL牛奶和1000g
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5000g牛肉糊用10g
‑
200g胰蛋白酶水解成水解物并加入1.0g
‑
5.0g金黄色葡萄球菌冻干粉、2.0g
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10.0g埃希氏大肠杆菌冻干粉、0.5g
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10g ZnSO4、0.5g
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20g Ca(OH)2、1.0g
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5.0g CuSO4和奶牛乳房炎病体物5g
‑
100g，用超声波激活各种病原体和病毒，同时充分混匀，成为基本培养基；
[0019]步骤二：将5g
‑
15g大头金蝇虫卵在常温条件下，用H2O2水溶液浸泡一段时间，再用纯净水冲洗两次，消毒好的大头金蝇虫卵备用；
[0020]步骤三：取步骤一得到的3％
‑
5％的基本培养基加入培养槽中，将(2)的大头金蝇虫卵接种到基本培养基中，加入20～50g鱼粉，设置温度为20～30℃进行培养，当大头金蝇卵蜕变长到1龄虫时，再次加入步骤一得到的15％～20％的基本培养基，加入3g～5g埃希氏大肠杆菌冻干粉和200～500g鱼粉，温度不变继续培养，当大头金蝇幼虫长到2龄时，将步骤一得到的剩余培养基全部加入培养槽中，加入5g～10g埃希氏大肠杆菌冻干粉和1000g～3000g蛋白粉，设置温度为20～35℃，培养120h～180h；
[0021]步骤四：培养的3龄大头金蝇幼虫在培养系统中爬出，自动分离后收集的幼虫用H2O2水溶液浸泡一段时间，用纯净水冲洗两次，再用KMnO4水溶液浸泡一段时间，用纯净水冲洗5
‑
10次，将大头金蝇幼虫放入脱水机中，以200r/min
‑
750r/min脱水3
‑
5分钟，用板框过滤机在0.2
‑
5kg/cm2压力下挤压，收集的液体加入10g
‑
20g固体硫酸铵沉淀，沉淀物用25％
‑
40％乙醇溶剂洗涤，离心分离得到含抗菌肽和抗菌蛋白的固形物，将此固形物实现固液分离，得到含抗菌肽和抗菌蛋白固形物的大头金蝇幼虫体液冷冻干燥，干燥后的抗菌肽和抗菌蛋白干品瞬间灭菌即可。
[0022]本专利技术相对于现有技术的有益效果为：通过生物免疫应答制备药物，该药物具有广谱性，使用时，可以同时杀灭多种引起奶牛乳房炎的病原体及病毒。
附图说明
[0023]图1为智能化在线控制培养系统图；
[0024]其中，1
‑
培养槽，2
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高分辨探头，3
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数据处理中心，4
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转换器，5
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基本培养基控制阀，6
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温度控制仪，7
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埃希氏大肠杆菌冻干粉控制阀，8
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鱼粉控制阀，9
‑
基本培养基贮罐，10
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法，其特征在于：所述方法具体步骤为：步骤一：将1000mL
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5000mL牛奶和1000g
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5000g牛肉糊用10g
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200g胰蛋白酶水解成水解物并加入1.0g
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5.0g金黄色葡萄球菌冻干粉、2.0g
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10.0g埃希氏大肠杆菌冻干粉、0.5g
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10g ZnSO4、0.5g
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20g Ca(OH)2、1.0g
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5.0g CuSO4和奶牛乳房炎病体物5g
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100g，用超声波激活各种病原体和病毒，同时充分混匀，成为基本培养基；步骤二：将5g
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15g大头金蝇虫卵在常温条件下，用H2O2水溶液浸泡一段时间，再用纯净水冲洗两次，消毒好的大头金蝇虫卵备用；步骤三：取步骤一得到的3％
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5％的基本培养基加入培养槽中，将(2)的大头金蝇虫卵接种到基本培养基中，加入20～50g鱼粉，设置温度为20～30℃进行培养，当大头金蝇卵蜕变长到1龄虫时，再次加入步骤一得到的15％～20％的基本培养基，加入3g～5g埃希氏大肠杆菌冻干粉和200～500g鱼粉，温度不变继续培养，当大头金蝇幼虫长到2龄时，将步骤一得到的剩余培养基全部加入培养槽中，加入5g～10g埃希氏大肠杆菌冻干粉和1000g～3000g蛋白粉，设置温度为20～35℃，培养120h～180h；步骤四：培养的3龄大头金蝇幼虫在培养系统中爬出，自动分离后收集的幼虫用H2O2水溶液浸泡一段时间，用纯净水冲洗两次，再用KMnO4水溶液浸泡一段时间，用纯净水冲洗5
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10次，将大头金蝇幼虫放入脱水机中，以200r/min
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750r/min脱水3
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5分钟，用板框过滤机在0.2
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5kg/cm2压力下挤压，收集的液体加入10g
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20g固体硫酸铵沉淀，沉淀物用25％
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40％乙醇溶剂洗涤，离心分离得到含抗菌肽和抗菌蛋白的固形物，将此固形物实现固液分离，得到含抗菌肽和抗菌蛋白固形物的大头金蝇幼虫体液冷冻干燥，干燥后的抗菌肽和抗菌蛋白干品瞬间灭菌即可。2.根据权利要求1所述的一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法，其特征在于：所述步骤一具体为：(1)用整料刮板刮下奶牛乳房炎的病体物，收集100g，待用；(2)将5000mL新鲜牛奶和5000g牛肉糊混合均匀，加入0.20mol/L，pH8.0磷酸盐缓冲溶液，再加入效价＞2500单位/mg的胰蛋白酶200g，保持温度20℃
‑
35℃，时间300min，然后用0.20mol/L盐酸调节pH6.0，制备成水解物；(3)上述水解物分别加入5.0g金黄色葡萄球菌冻干粉，10.0g埃希氏大肠杆菌冻干粉，10g ZnSO4，20g Ca(OH)2，1.0g CuSO4，搅拌均匀，在培养箱中温度25℃
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30℃，湿度70％
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80％，放置150min，然后再将收集的100g奶牛乳房炎病体物加入配制好的水解物中，然后用功率1.0W
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10.0W，频率20KHz，辐射时间2.0秒超声波激活各种病原体和病毒，同时充分混匀，成为基本培养基。3.根据权利要求1所述的一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法，其特征在于：步骤一中，所述超声波激活的具体参数为功率1.0W
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10.0W，频率20KHz
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25KHz，辐射时间0.1秒
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2.0秒。4.根据权利要求1所述的一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法，其特征在于：步骤二中，所述H2O2水溶液的浓度为0.01％
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0.50％，浸泡时间为10min
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60min。5.根据权利要求1所述的一种治疗奶牛乳房炎药物的制备方法，其特征在于：所述步骤二具体为：将10g大头金蝇虫卵在常温条件下，用500mL 0.20％
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0.50％H2O2水溶液浸泡30min
‑
50min，取出后用5000mL纯净水洗涤两次，消毒好的大头金蝇卵备用...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玲玲，董青，宋予震，米俊宪，吕玉金，
申请(专利权)人：河南牧业经济学院，
类型：发明
国别省市：