基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法技术

本发明专利技术公开了基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法，涉及分析检测领域，所述方法是利用广泛靶向代谢组学技术，通过差异性分析现有的江华苦茶野生茶以及所有江华苦茶栽培品种的代谢物信息，筛选出组间差异代谢物，然后再对待鉴定样品进行分析，判断所述待鉴定样品是否为江华苦茶野生茶。本发明专利技术的基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法，建立了一种广泛靶向代谢组学分析方法对江华苦茶野生茶进行特征鉴别，准确找出江华苦茶野生茶的差异显著性代谢物，根据差异显著性代谢物相对含量进行数据可视化，可以进行江华苦茶野生茶真假的鉴定的方法，且技术方法先进，结果可靠。结果可靠。结果可靠。

【技术实现步骤摘要】
基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法


[0001]本专利技术涉及分析检测
，尤其涉及基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法。

技术介绍

[0002]江华苦茶产于湖南省南岭山脉的特异性古老茶树种质资源，为湖南四大茶树原生种群之一，经过长期的自然选择和人工选育，形成了野生茶类型和栽培品种类型，野生茶因资源相对稀少、生态有机和某些功能成分含量超常量，深受消费市场追棒。但由于江华苦茶野生茶类型和栽培品种类型鲜叶形态相似度高，导致江华苦茶野生茶市场混乱现象常有发生，为最大程度地保护消费者利益，政府相关监管部门对鲜叶抽样检查就必须找到一个有效的鉴别工具。
[0003]目前，形态特征观察仍然是江华苦茶类型鉴定的主要方法，实践表明该方法受各种因素影响较大，主观性强、可靠性差，因此迫切需要更有效的鉴定手段。广泛靶向代谢组检测技术可以实现高通量、高灵敏、广覆盖检测目标物体上千种内源性小分子代谢物成分，目前基于代谢组学法方法来鉴别野生茶与栽培品种类型的研究未见报道。

技术实现思路

[0004]针对上述问题，本专利技术的目的在于设计提供基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法，建立了一种广泛靶向代谢组学分析方法对江华苦茶野生茶进行特征鉴别，准确找出江华苦茶野生茶差异显著性代谢物，根据差异显著性代谢物相对含量进行数据可视化，可以进行江华苦茶野生茶真假的鉴定的方法。
[0005]本专利技术通过以下技术手段解决上述技术问题：
[0006]基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法，所述方法是利用广泛靶向代谢组学技术，通过差异性分析现有的江华苦茶野生茶以及所有江华苦茶栽培品种的代谢物信息，筛选出VIP>1，p<0.05的变量作为组间差异代谢物，然后再对待鉴定样品进行分析，判断所述待鉴定样品是否为江华苦茶野生茶，所述组间差异代谢物包括5种生物碱、11种黄烷醇、9种二聚黄烷醇、15种黄酮醇糖苷、4种氨基酸、4种酚酸、3种香气前体、6种脂类和4种其它化合物。
[0007]进一步，所述组间差异代谢物具体包括：苦茶碱、可可碱、1,3,7
‑
三甲基尿酸、5'
‑
甲硫腺苷、磷酸胆碱、表没食子酸儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素、没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、3"
‑
O
‑
甲基表没食子儿茶素没食子酸酯、3"
‑
O
‑
甲基表儿茶素没食子酸酯、表阿福豆素
‑3‑
没食子酸酯、表阿夫儿茶精、原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3、聚酯型儿茶素B、表儿茶素
‑
(4beta
‑
>8)
‑
表没食子酸儿茶素、表儿茶素
‑
(4alpha
‑
>8)
‑
表儿茶素没食子酸酯、表儿茶素
‑
(4beta
‑
>8)
‑
表没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子酸儿茶素
‑
(4beta
‑
>8)
‑
表儿茶素没食子酸酯、没食子酸儿茶素
‑
(4beta
‑
>8)
‑
表儿茶素、山奈酚3
‑
葡萄糖芸香糖苷、山奈酚3
‑
半乳糖芸香糖苷、山奈酚
‑3‑
葡
萄糖苷、山奈酚3
‑
双香豆葡萄糖苷、山奈酚
‑3‑
香豆葡萄糖苷、山奈酚3
‑
双香豆半乳糖糖苷、槲皮素
‑3‑
葡萄糖苷、槲皮素
‑3‑
半乳糖苷、槲皮素双葡萄糖苷、槲皮素三葡萄糖苷、槲皮素3
‑
(2G
‑
葡萄糖芸香糖苷)、杨梅素3
‑
葡萄糖苷、杨梅素3
‑
半乳糖苷、杨梅素3'
‑
葡萄糖苷、柚皮素、缬氨酸、色氨酸、精氨酸、脯氨酸、茶没食子素、绿原酸、5
‑
甲氧基水杨酸、6
‑
O
‑
没食子酰甲基
‑
β
‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷、苯乙醇樱草糖苷、苯甲醇樱草糖苷、(S)
‑3‑
辛醇葡萄糖苷、溶血磷脂酰胆碱(18:2)、溶血磷脂酰胆碱(18:3(9Z,12Z,15Z)/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(18:3(6Z,9Z,12Z)/0:0)、单酰甘油酯(18:3)、鞘氨醇、1,4
‑
壬二醇二乙酸酯、羟基茉莉酸葡萄糖苷、血卟啉IX、苄基异喹啉、去氢番木瓜碱I。
[0008]进一步，所述江华苦茶野生茶样品中苦茶碱、1,3,7
‑
三甲基尿酸，儿茶素、没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素没食子酸酯，3"
‑
O
‑
甲基表没食子儿茶素没食子酸酯、3"
‑
O
‑
甲基表儿茶素没食子酸酯的含量显著高，而黄酮醇糖苷含量显著低。
[0009]进一步，所述方法具体包括以下步骤：
[0010]S1：收集具有代表性的苦茶野生茶以及所有苦茶栽培品种的鲜叶，冷冻干燥得到样品；
[0011]S2：将收集得到的样品分别进行前处理进行有效成分提取，得到提取液进行UPLC
‑
Q
‑
TOF/MS检测；
[0012]S3：检测获得的原始数据，经Agilent Muss Hunter Profinder B08.00软件进行提取分析处理，并手动检查，将处理后的数据导入SIMCA
‑
P 14.1软件进行多元统计分析，即先采用PCA分析各样本整体之间的总体分布和离散程度，然后用PLS
‑
DA对组间数据进行分析，结合T
‑
test检验，筛选出VIP>1，p<0.05的变量作为组间差异代谢物；
[0013]S4：选取待鉴定野生茶与已知野生茶，按照上述步骤S1
‑
S2，获得代谢组学数据，然后进行多元统计法进行分析，得到PCA图和PLS
‑
DA图，通过聚类分析初步判定该待鉴定野生茶与已知野生茶的组间差异度，再运用步骤S3将筛选的共有差异显著代谢物生成差异代谢物heatmap图，然后结合PCA和PLS
‑
DA聚类分析判别待鉴定野生茶是否与已知野生茶聚类一起或heatmap图丰度是否相吻合，如达到聚类一起和heatmap图丰度相吻合条件，则认为待鉴定野生茶是真实野生茶。
[0014]进一步，所述S2步骤的前处理具体为：将冷冻干燥的样品研磨成茶粉，称取茶粉于离心管中，加入经过预热的甲醇本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法，其特征在于，所述方法是利用广泛靶向代谢组学技术，通过差异性分析现有的江华苦茶野生茶以及所有江华苦茶栽培品种的代谢物信息，筛选出VIP>1，p<0.05的变量作为差异代谢物，然后再对待鉴定样品进行分析，判断所述待鉴定样品是否为江华苦茶野生茶，所述组间差异代谢物包括5种生物碱、11种黄烷醇、9种二聚黄烷醇、15种黄酮醇糖苷、4种氨基酸、4种酚酸、3种香气前体、6种脂类和4种其它化合物。2.根据权利要求1所述的基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法，其特征在于，所述组间差异代谢物具体包括：苦茶碱、可可碱、1,3,7
‑
三甲基尿酸、5'
‑
甲硫腺苷、磷酸胆碱、表没食子酸儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素、没食子儿茶素、儿茶素没食子酸酯、3"
‑
O
‑
甲基表没食子儿茶素没食子酸酯、3"
‑
O
‑
甲基表儿茶素没食子酸酯、表阿福豆素
‑3‑
没食子酸酯、表阿夫儿茶精、原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3、聚酯型儿茶素B、表儿茶素
‑
(4beta
‑
>8)
‑
表没食子酸儿茶素、表儿茶素
‑
(4alpha
‑
>8)
‑
表儿茶素没食子酸酯、表儿茶素
‑
(4beta
‑
>8)
‑
表没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子酸儿茶素
‑
(4beta
‑
>8)
‑
表儿茶素没食子酸酯、没食子酸儿茶素
‑
(4beta
‑
>8)
‑
表儿茶素、山奈酚3
‑
葡萄糖芸香糖苷、山奈酚3
‑
半乳糖芸香糖苷、山奈酚
‑3‑
葡萄糖苷、山奈酚3
‑
双香豆葡萄糖苷、山奈酚
‑3‑
香豆葡萄糖苷、山奈酚3
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双香豆半乳糖糖苷、槲皮素
‑3‑
葡萄糖苷、槲皮素
‑3‑
半乳糖苷、槲皮素双葡萄糖苷、槲皮素三葡萄糖苷、槲皮素3
‑
(2G
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葡萄糖芸香糖苷)、杨梅素3
‑
葡萄糖苷、杨梅素3
‑
半乳糖苷、杨梅素3'
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葡萄糖苷、柚皮素、缬氨酸、色氨酸、精氨酸、脯氨酸、茶没食子素、绿原酸、5
‑
甲氧基水杨酸、6
‑
O
‑
没食子酰甲基
‑
β
‑
D
‑
吡喃葡萄糖苷、苯乙醇樱草糖苷、苯甲醇樱草糖苷、(S)
‑3‑
辛醇葡萄糖苷、溶血磷脂酰胆碱(18:2)、溶血磷脂酰胆碱(18:3(9Z,12Z,15Z)/0:0)、溶血磷脂酰胆碱(18:3(6Z,9Z,12Z)/0:0)、单酰甘油酯(18:3)、鞘氨醇、1,4
‑
壬二醇二乙酸酯、羟基茉莉酸葡萄糖苷、血卟啉IX、苄基异喹啉、去氢番木瓜碱I。3.根据权利要求2所述的基于广泛靶向代谢组学技术鉴别江华苦茶野生茶的方法，其特征在于，所述江华苦茶野生茶样...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文亮，张曙光，刘振，银霞，刘淑娟，段继华，邢瑞雪，黄静，
申请(专利权)人：湖南省茶叶研究所湖南省茶叶检测中心，
类型：发明
国别省市：