克拉维酸钾中乙醛的检测方法技术

本发明专利技术具体提供了如下克拉维酸钾中乙醛检测方法，包括如下内容：衍生反应后，再用高效液相色谱法进行检测。本发明专利技术方法专属性、灵敏度良好，具有可信的精密度和准确度，是一个合适的有关物质分析方法，可用于克拉维酸钾中乙醛的日常检测。醛的日常检测。醛的日常检测。

【技术实现步骤摘要】
克拉维酸钾中乙醛的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物检测领域，具体涉及克拉维酸钾中乙醛的检测方法。

技术介绍

[0002]克拉维酸钾，是一种高效的β
‑
lactamase抑制剂，常与青霉素类药物联合应 用以克服微生物产β
‑
内酰胺酶而引起的耐药性，提高疗效。
[0003]现有研究表明，克拉维酸钾在碱性或者中性环境下会产生乙醛。根据国际癌 症研究中心(IARC)致癌物分类，乙醛属2B类致癌物(对人可能致癌，此类致癌 物对人致癌性证据有限，对实验动物致癌性证据并不充分；或对人类致癌性证据 不足，对实验动物致癌性证据充分)，拟按基因毒性杂质进行控制，故需对克拉 维酸钾中可能存在的乙醛进行检测。
[0004]目前还未见对克拉维酸钾中乙醛的检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术拟采用高效液相色谱法对克拉维酸钾中乙醛进行检测。待测物质乙 醛极性较大，液相保留弱，紫外末端吸收，故拟采用液相柱前衍生的方法进行研 究控制。
[0006]现有技术中已有采用柱前衍生法对液体中乙醛进行检测方法，例如
“ꢀ
李颖，等.2,4
‑
二硝基苯肼柱前衍生
‑
高效液相色谱法测定水中的微量乙醛.《食品 安全质量检测学报》，2019(010),016”，将样品在60℃水浴中用2,4
‑
二硝基苯 肼衍生化20min，由正己烷萃取,以乙腈∶水(52∶48,V∶V)为流动相,于365nm 波长下进行测定，结果：加标回收率为80.2％～99.8％,相对标准偏差为4.6％～ 7.4％,方法最低检出浓度为0.003mg/L。又如“陆梅，2,4
‑
二硝基苯肼衍生高效 液相色谱法测定水中乙醛、丙烯醛.环境监控与预警，2010年”，是加入DNPH 后，室温反应1小时，衍生化后再利用液相色谱进行检测，其甲标回收率为 80.2～95.3％，RSD为5.1％。
[0007]在提供本专利技术检测方法之前，采用现有技术进行柱前衍生，发现乙醛的检出 量极不稳定，检出的乙醛含量都比实际含量更高，即参照现有技术进行检测，在 水溶液中、室温至60℃条件下进行衍生化反应，供试品溶液中乙醛含量有逐渐 增大趋势，无明显衍生终点，即便是在25℃、30℃也同样如此，无法实现较为 准确的乙醛检测(参见表1)。
[0008]专利技术人经过多种尝试，最终发现，若在冰浴条件下、特定的时间内进行衍生 化反应，虽然反应温度明显低于现有技术，但是，乙醛的检测结果反而更为稳定 可靠。
[0009]表1乙醛含量考察统计表
[0010]衍生条件0.5h0.75h1h2h5h30℃0.027％0.040％0.056％0.18％N/A25℃0.020％0.032％0.038％0.12％N/A冰水浴0.0026％0.0042％0.0055％0.0054％0.0059％
[0011]根据专利技术人的研究结果，本专利技术具体提供了如下克拉维酸钾中乙醛检测方 法，包括如下内容：衍生反应后，再用高效液相色谱法进行检测；所述衍生反应 中，以2，4
‑
二硝基
苯肼为衍生试剂，水为溶剂，在0～5℃下反应。
[0012]为了使得乙醛完全反应，本专利技术中衍生试剂可以过量使用。
[0013]在冰水浴条件下，乙醛含量先增加后趋于稳定，表明供试品溶液需衍生1 小时以上才能衍生完全，反应1～5小时检测结果依然稳定。
[0014]在冰水浴条件下，分别考察衍生0.2、0.35、0.5、0.75、0.85、1小时后，乙 醛含量变化情况；因各数据点分布近似于直线，且2020年版《中国药典》四部
ꢀ“
9306遗传毒性杂质控制指导原则”中明确可接受摄入量可按化合物特异性风 险评估计算(即线性外推法)，故假设乙醛含量增加随时间按恒定增长率变化， 并按线性外推法建立趋势图，以外推0小时本品中乙醛含量。本专利技术中反应所用 溶剂的温度亦可参照反应温度0～5℃，例如可以选冰水，标准大气压下温度为 0℃。
[0015]克拉维酸钾在水中极易溶解，且待测成分乙醛可与水互溶，根据二者的溶解 特性，初步选择水作为溶剂，经过实验确认，水作溶剂不干扰乙醛检测，故最终 选择水做溶剂。
[0016]其中，所述衍生试剂采用如下方式配置：取2，4
‑
二硝基苯肼、酸、流动相 混匀。
[0017]本专利技术中乙醛与衍生试剂反应，为先亲核加成，再消除失水，在酸性环境下，才能促进 亲核加成反应进行。此处所用“酸”，只要满足亲核加成反应即可，例如磷酸、醋酸、盐酸 等等。
[0018]其中，2，4
‑
二硝基苯肼与酸的用量比例可以是16mg：0.1～1ml。
[0019]流动相稀释定容后，2，4
‑
二硝基苯肼浓度可以是16mg/10～30ml。
[0020]高效液相色谱法中，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙 腈
‑
水＝(60～70)：(40～30)。经过柱前衍生，各色谱峰分离度良好，可以实现 对乙醛的有限测定。
[0021]本专利技术中使用的检测波长为200～400nm。可以事先采用紫外分光确定检测波 长，也可以采用全波段扫描最终挑选最佳波长，本专利技术选择的检测波长包括但不 限于355、356、357、358、359、360、361、362、363、364、365nm等。
[0022]本专利技术中柱温可以选自20～30℃，包括但不限于20、21、22、22、23、24、 25、26、27、28、29、30℃等，可以根据检测情况适度调整。
[0023]流动相流速，参照常规高效液相色谱流速选择即可，例如可以选自0.8
‑
1.2ml， 包括但不限于0.8、0.9、1.0、1.1、1.2ml等，可以根据检测情况适度调整。
[0024]本专利技术方法专属性、灵敏度良好，具有可信的精密度和准确度，是一个合适 的有关物质分析方法，可用于克拉维酸钾中乙醛的日常检测。
附图说明
[0025]图1冰水浴衍生时间与溶液稳定性结果趋势图(0.2～1小时)；
[0026]图2本专利技术供试品、对照品、空白溶液检测图谱。
具体实施方式
[0027]实施例1
[0028]照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定。
[0029]溶剂冰水
[0030]衍生试剂：取2，4
‑
二硝基苯肼约16mg，置20ml量瓶中，用流动相溶解，加 入0.3ml磷酸，用流动相稀释至刻度，摇匀。(临用新制，避光操作)
[0031]空白溶液：移取5ml的冰水，置10ml量瓶中，加入0.3ml衍生试剂，冰水浴2 小时后，用冰水稀释至刻度，摇匀。
[0032]供试品溶液取本品约25mg，精密称定，置10ml量瓶中，加5ml冰水溶解后加 入0.3ml衍生试剂，冰水浴2小时本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.克拉维酸钾中乙醛的检测方法，其特征在于：包括如下内容：衍生反应后，再用高效液相色谱法进行检测；所述衍生反应中，以2，4
‑
二硝基苯肼为衍生试剂，水为溶剂，在0～5℃下反应，反应时间在1～5小时。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：反应时间为2小时。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：在冰水浴条件下反应。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：溶剂所用水为冰水。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述衍生试剂采用如下方式配置：取2，4
‑
二硝基苯肼、酸、流动相混匀；进一步地，所述酸选自磷酸；更进一步地，2，4
‑
二硝基苯肼与酸的用量比例为16mg：0.1～1ml，流动相稀释定容后，2，4
‑
二硝基苯肼浓度为16mg/10～30ml。6.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡登稳，余泉毅，辛家华，罗鸣，黄浩喜，苏忠海，
申请(专利权)人：四川仁安药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：