一种薄荷醇半抗原、人工抗原及其制备方法、抗体和应用技术

本申请适用于质量检测技术领域，提供了一种薄荷醇半抗原、人工抗原及其制备方法、抗体和应用，本申请提供的薄荷醇半抗原既最大程度保留了薄荷醇特征结构，又具有可以与载体蛋白发生偶联的羧基；用本申请的薄荷醇半抗原与载体蛋白偶联后得到的薄荷醇人工抗原，能更好制备特异性强、灵敏度高的抗体，为后续建立薄荷醇的各种免疫分析方法提供基础；同时，采用本申请的薄荷醇人工抗原得到的薄荷醇抗体的效价、灵敏度、亲和力都较好，为建立快速、简便、价廉、灵敏的薄荷醇检测方法提供了新手段，并可应用于食品特别是烟草制品中薄荷醇的免疫检测。测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种薄荷醇半抗原、人工抗原及其制备方法、抗体和应用


[0001]本申请属于质量检测
，尤其涉及一种薄荷醇半抗原、人工抗原及其制备方法、抗体和应用。

技术介绍

[0002]薄荷醇(CAS:89
‑
78
‑
1)，又名薄荷脑，因其特殊的强烈薄荷香气和凉爽味道，广泛应用于香烟、化妆品、牙膏、口香糖、涂擦剂等中，可发挥局部清凉、止痒及轻微局麻等作用。特别是在卷烟和电子烟中，烟丝、滤棒、烟用包装纸、电子烟烟液等中添加薄荷醇，成为生产薄荷型口味烟草制品的重要方式。作为常规香料和食品添加剂，如何实现薄荷醇简单、有效分析，对于薄荷醇的安全监管具有重要意义。
[0003]目前，食品、烟草制品中薄荷醇的检测方法很多，如气相色谱法、气质联用法、旋光度法、液相色谱法、液质联用法和近红外光谱法等。但上述方法不同程度存在样品前处理较为复杂，仪器设备较为昂贵，有机溶剂消耗多等缺点，限制了薄荷醇快速筛查，满足不了现场、快速、低成本、大批量检测要求。

技术实现思路

[0004]本申请实施例的目的在于提供一种薄荷醇半抗原，旨在解决现有检测食品中香料成分薄荷醇的方法普遍存在样品前处理繁琐、有机试剂用量多、仪器贵重的问题。
[0005]本申请实施例是这样实现的，一种薄荷醇半抗原，所述薄荷醇半抗原的结构式如下所示：
[0006][0007]本申请实施例的另一目的在于一种上述的薄荷醇半抗原的制备方法，包括：
[0008]将薄荷醇与第一琥珀酸酐溶解于吡啶中进行反应，得混合液；
[0009]向所述混合液中加入第二琥珀酸酐进行搅拌，得到薄荷醇半抗原。
[0010]本申请实施例的另一目的在于一种薄荷醇人工抗原，所述薄荷醇人工抗原是由上述的薄荷醇半抗原或者上述的薄荷醇半抗原的制备方法制备得到的薄荷醇半抗原与载体蛋白进行偶联反应得到的偶联物。
[0011]本申请实施例的另一目的在于一种上述的薄荷醇人工抗原的制备方法，包括：
[0012]将薄荷醇半抗原、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐、N
‑
羟基琥珀酰亚胺分别溶解于N,N
‑
二甲基甲酰胺中进行搅拌活化处理，得到溶液I；
[0013]将钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白分别溶解于PBS缓冲液中，经预冷后进行搅拌处理，得到溶液II；
[0014]将所述溶液I缓慢滴加至所述溶液II中，经搅拌、透析处理，得到薄荷醇人工抗原。
[0015]本申请实施例的另一目的在于一种薄荷醇抗体，所述薄荷醇抗体是由上述的薄荷醇人工抗原或由上述的薄荷醇人工抗原的制备方法制备得到的薄荷醇人工抗原经动物免疫得到。
[0016]本申请实施例的另一目的在于一种上述的薄荷醇人工抗原或者上述的薄荷醇人工抗原的制备方法制备得到的薄荷醇人工抗原或者上述的薄荷醇抗体在薄荷醇免疫检测中的应用或者在制备薄荷醇免疫试剂盒、或胶体金免疫层析试纸条、或时间分辨荧光试纸条中的应用。
[0017]本申请实施例提供的薄荷醇半抗原既最大程度保留了薄荷醇特征结构，又具有可以与载体蛋白发生偶联的羧基；用本申请的薄荷醇半抗原与载体蛋白偶联后得到的薄荷醇人工抗原，能更好制备特异性强、灵敏度高的抗体，为后续建立薄荷醇的各种免疫分析方法提供基础；同时，采用本申请的薄荷醇人工抗原得到的薄荷醇抗体的效价、灵敏度、亲和力都较好，为建立快速、简便、价廉、灵敏的薄荷醇检测方法提供了新手段，并可应用于食品特别是烟草制品中薄荷醇的免疫检测。
附图说明
[0018]图1为本申请实施例提供的薄荷醇包被抗原的紫外吸收图；
[0019]图2为本申请实施例提供的薄荷醇人工抗原的紫外吸收图；
[0020]图3为本申请实施例提供的薄荷醇ELISA标准曲线。
具体实施方式
[0021]为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。
[0022]以抗原抗体特异性识别反应为核心的免疫学方法，具有操作简便、检测快速、准确性高、灵敏度高、检测成本低、对操作者的要求低等优势，逐渐成为农药、兽药、抗生素、食品添加剂等物质大批量样本初步筛查的有力工具。而目前尚未有应用免疫分析方法进行薄荷醇检测的报道。因此，利用免疫分析原理，制备薄荷醇半抗原、人工抗原和抗体，并开展应用，实现薄荷醇的快速、灵敏、简单易操作检测，对加强食品安全监管、保障食品安全具有重要意义。
[0023]在本申请实施例中，所述薄荷醇半抗原的结构式如下所示：
[0024][0025]本申请提供的薄荷醇半抗原保留了薄荷醇所有的特征基团和结构，同时引入羧基基团，可与载体蛋白偶联，为后续动物免疫应答和高特异性灵敏度抗体制备奠定了基础。
[0026]本申请实施例还提供了一种上述薄荷醇半抗原的制备方法，包括：
[0027]步骤S1，薄荷醇与琥珀酸酐溶解于溶剂吡啶中，进行反应。
[0028]步骤S2，向步骤S1中反应后的溶液中再次加入琥珀酸酐，进行搅拌，得到薄荷醇半抗原。
[0029]在一些实施例中，所述步骤S1中薄荷醇和琥珀酸酐的摩尔比为1：1～1.1，优选1:1.1。
[0030]在一些实施例中，所述步骤S1中反应温度为40～70℃，所述反应的时间为12～24h，优选在70℃下反应24h。
[0031]在一些实施例中，所述步骤S2中，琥珀酸酐与薄荷醇的摩尔比为0.1～0.2:1，优选0.1:1。
[0032]在一些实施例中，所述步骤S2中搅拌时间为6～12h。
[0033]在一些实施例中，所述步骤S2中搅拌结束后于通风橱中氮吹，形成褐色结晶，无须纯化。
[0034]本申请中薄荷醇半抗原的制备方法，反应步骤及操作简单，反应条件温和并易于控制，制备的薄荷醇半抗原的纯度和产率较高。
[0035]本申请实施例还提供了一种薄荷醇人工抗原，所述薄荷醇人工抗原为上述的薄荷醇半抗原与载体蛋白反应得到的偶联物。所述薄荷醇人工抗原可以作为薄荷醇免疫抗原，也可以作为薄荷醇包被抗原。
[0036]其中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)和钥孔血蓝蛋白中任几种，优选载体蛋白为BSA和OVA。
[0037]其中，所述薄荷醇半抗原与所述载体蛋白的偶联摩尔比约为10：1。
[0038]其中，薄荷醇半抗原和载体蛋白的偶联方法可采用活泼酯法或混合酸酐法。具体的，薄荷醇半抗原与
‑
牛血清白蛋白(BSA)通过碳二亚胺法偶联制备薄荷醇免疫抗原，薄荷醇半抗原与
‑
卵清蛋白(OVA)通过混合酸酐法形成薄荷醇包被抗原。
[0039]上述薄荷醇半抗原分子量小于一千，虽然具有免疫反应性，但不具有免疫原性。通过薄荷醇半抗原与载体蛋白偶联结合，能本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种薄荷醇半抗原，其特征在于，所述薄荷醇半抗原的结构式如下所示：2.一种权利要求1所述的薄荷醇半抗原的制备方法，其特征在于，包括：将薄荷醇与第一琥珀酸酐溶解于吡啶中进行反应，得混合液；向所述混合液中加入第二琥珀酸酐进行搅拌，得到薄荷醇半抗原。3.根据权利要求2所述的薄荷醇半抗原的制备方法，其特征在于，所述薄荷醇与第一琥珀酸酐的摩尔比为1:(1～1.1)；所述薄荷醇与第二琥珀酸酐的摩尔比为(0.1～0.2):1。4.根据权利要求2所述的薄荷醇半抗原的制备方法，其特征在于，所述的将薄荷醇与第一琥珀酸酐溶解于吡啶中进行反应，得混合液的步骤，包括：将薄荷醇与第一琥珀酸酐溶解于吡啶中，于反应温度为40～70℃的条件下进行反应12～24h，得混合液。5.根据权利要求2所述的薄荷醇半抗原的制备方法，其特征在于，所述向所述混合液中加入第二琥珀酸酐进行搅拌，得到薄荷醇半抗原的步骤，包括：向所述混合液中加入第二琥珀酸酐进行搅拌6～12h，得到薄荷醇半抗原。6.一种薄荷醇人工抗原，其特征在于，所述薄荷醇人工抗原是由权利要求1所述的薄荷醇半抗原或者权利要求2
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5任一所述的薄荷醇半抗原的制备方法制备得到的薄荷醇半抗原与载体蛋白进行偶联反应得到的偶联物。7.根据权利要求6所述的薄荷醇人工抗原，其特征在于，所述薄荷醇人工抗原是由权利要求1所述的薄荷醇半抗原或者权利要求2
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【专利技术属性】
技术研发人员：方松，黄建，林卿，孔凡玉，邱军，杨金广，郭永峰，刘雪，
申请(专利权)人：江西中烟工业有限责任公司福建省烟草公司南平市公司，
类型：发明
国别省市：