一种降钙素原测定试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种降钙素原测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和参考校准品一种降钙素原测定试剂盒的制备方法：按如下步骤进行(1)试剂R1混合均匀；(2)试剂R2混合均匀，然后离心取上清液，得到半成品试剂R2，调整浓度为0.25％，得到成品试剂R2；(3)参考校准品根据浓度混合均匀后冻干即可得到成品参考校准品。该发明专利技术使用方便，测定结果可靠，节约检测时间。节约检测时间。节约检测时间。

【技术实现步骤摘要】
一种降钙素原测定试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医学检验
，具体涉及一种降钙素原测定试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]降钙素原(PCT)是降钙素的前体，生理情况下由甲状腺C细胞分泌，许多器官受到促炎症反应刺激后都会分泌PCT。一般在机体受到细菌、真菌、寄生虫感染特别是受到细菌引起的刺激时，PCT在血中的水平升高。PCT在临床上一般用于感染和不明原因发热的诊断，PCT是全身感染和脓毒症早期诊断和确认指标；是反映全身感染严重程度、脓毒症治疗监测的量化指标；是唯一用于指导临床抗生素的合理应用、减少细菌耐药性产生、抗生素应用时间及停用抗生素客观指标。
[0003]目前PCT的检测费用要相对低于血培养，患者的血液采集量亦少。因此，无论是从预测感染的及时性，还是从费用、减少病人痛苦的角度来看，PCT对预测细菌感染均有较高的临床价值，能做到早期、快捷诊断。但是现有的试剂盒灵敏度不够高，检测速度也不高，导致检测精度不够，并且稳定性不够好，导致有效期降低。因此，针对上述问题，本专利技术进行创新改进。

技术实现思路

[0004]为克服现有技术的上述缺陷，本专利技术提出一种抗体效价高、亲和力好、灵敏度高、检测精度高、应用范围广、重复性好、特异性强、稳定性好、批间差小、具有良好的抗干扰性，有效期长的一种降钙素原测定试剂盒及其制备方法。
[0005]本专利技术的具体实施方案如下：
[0006]本申请提供了本申请提供了一种降钙素原测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和参考校准品，其特征在于：
[0007]所述试剂R1包括下述原料:
[0008][0009]以及纯化水；
[0010]所述试剂R2包括下述原料:
[0011][0012]以及纯化水；
[0013]所述参考校准品包括下述原料:
[0014]三羟甲基氨基甲烷缓冲液5
‑
200mmol/L乙二胺四乙酸二钠160
‑
180mmol/L广谱杀菌剂2
‑
5mmol/L，以及重组降钙素原纯品和纯化水。
[0015]优选为：所述试剂R1包括下述原料:
[0016][0017][0018]以及纯化水；
[0019]所述试剂R2包括下述原料:
[0020][0021]以及纯化水；
[0022]所述参考校准品包括下述原料:
[0023]三羟甲基氨基甲烷缓冲液
ꢀꢀꢀ
20
‑
150mmol/L
[0024]乙二胺四乙酸二钠
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
165
‑
170mmol/L
[0025]广谱杀菌剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ2‑
4mmol/L，
[0026]以及重组降钙素原纯品和纯化水。
[0027]优选为：所述结合有抗人降钙素原抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒直径为50
‑
150nm。
[0028]优选为：试剂盒的制备方法包括以下步骤:
[0029](1)试剂R1的制备：将5
‑
300mmol/L磷酸盐缓冲液、50mmol/L的聚乙二醇6000、0.5
‑
16mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、浓度为1％的牛血清白蛋白、50
‑
70mmol/L的海藻糖、浓度为0.9％的叠氮化钠和纯化水混合均匀得到成品试剂R1；
[0030](2)试剂R2的制备：在5
‑
300mmol/L磷酸盐缓冲液中依次加入质量比为10:2
‑
10:4的聚苯乙烯胶乳颗粒和抗人降钙素原抗体多克隆抗体，混合均匀，并在室温下振荡1小时，形成第一胶乳，此间配制好封闭液，在第一胶乳中加入封闭液封闭1小时，然后离心取上清液，得到半成品试剂R2，配制好第二胶乳，用第二胶乳稀释半成品试剂R2至浓度为0.25％，得到成品试剂R2；
[0031](3)参考校准品的制备：根据浓度将5
‑
200mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液、160
‑
180mmol/L乙二胺四乙酸二钠、2
‑
5mmol/L广谱杀菌剂、重组降钙素原纯品和纯化水混合均匀并用0.22μm微孔滤膜过滤，过滤后进行冻干，形成冻干粉即可得到成品参考校准品。
[0032]优选为：步骤(2)封闭液原料包括:5
‑
300mmol/L磷酸盐缓冲液和1％的牛血清白蛋白。
[0033]优选为：步骤(2)第二胶乳包括下述原料:5
‑
300mmol/L磷酸盐缓冲液、0.5
‑
16mmol/L的乙二胺四乙酸二钠、浓度为0.1％的脱脂奶粉、浓度为0.9％的叠氮化钠和纯化水。
[0034]优选为：步骤(2)中的离心条件为2000
‑
3000rpm/min，离心20min。
[0035]优选为：步骤(3)中的冻干温度为
‑
55～
‑
30℃，时间持续5
‑
30小时。
[0036]优选为：所述磷酸盐缓冲液PH为7.2。
[0037]优选为：所述抗人降钙素原抗体多克隆抗体包括羊抗抗人降钙素原抗体多克隆抗体或兔抗抗人降钙素原抗体多克隆抗体或鼠抗抗人降钙素原抗体多克隆抗体。
[0038]本专利技术的有益效果为：抗原降钙素原和特异性抗体抗人降钙素原抗体多克隆抗体胶乳颗粒相结合，发生抗原抗体反应，使反应液出现浊度，其浊度高低即吸光度减少、吸光度增加反映样本中降钙素原的浓度，参照标准曲线即可计算出样本中降钙素原的含量。操作简单，适用于各类全自动生化分析仪。采用多浓度校准品，定值可靠，使用方便，测定结果更可靠，精质量浓度好。
附图说明
[0039]图1为本专利技术具体实施方式中实施例一测定值线性回归分析示意图；
[0040]图2为本专利技术具体实施方式中实施例二测定值线性回归分析示意图；
[0041]图3为本专利技术具体实施方式中实施例三测定值线性回归分析示意图；
[0042]图4为本专利技术具体实施方式中实施例四测定值线性回归分析示意图。
具体实施方式
[0043]下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0044]本申请的说明书和权利要求书中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便本申请的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施，且“第一”、“第二”等所区分的对象通常为一类，并不限定对象的个数，例如第一对象可以是一个，也可以是多个。此外，说明书以及权利要求中“和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降钙素原测定试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和参考校准品，其特征在于：所述试剂R1包括下述原料:以及纯化水；所述试剂R2包括下述原料:磷酸盐缓冲液
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ5‑
300mmol/L乙二胺四乙酸二钠
ꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5
‑
16mmol/L结合有抗人降钙素原抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒0.05
‑
5g/L牛血清白蛋白
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1％(W/V)脱脂奶粉
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1％(W/V)叠氮化钠
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.9％(W/V)，以及纯化水；所述参考校准品包括下述原料:三羟甲基氨基甲烷缓冲液
ꢀꢀꢀꢀ5‑
200mmol/L乙二胺四乙酸二钠
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
160
‑
180mmol/L广谱杀菌剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ2‑
5mmol/L，以及重组降钙素原纯品和纯化水。2.根据权利要求1所述的一种降钙素原测定试剂盒，其特征在于：所述试剂R1包括下述原料:以及纯化水；
所述试剂R2包括下述原料:磷酸盐缓冲液
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
30
‑
150mmol/L乙二胺四乙酸二钠
ꢀꢀꢀꢀꢀ
10
‑
15mmol/L结合有抗人降钙素原抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒0.1
‑
2g/L牛血清白蛋白
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1％(W/V)脱脂奶粉
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1％(W/V)叠氮化钠
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.9％(W/V)，以及纯化水；所述参考校准品包括下述原料:三羟甲基氨基甲烷缓冲液
ꢀꢀꢀ
20
‑
150mmol/L乙二胺四乙酸二钠
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
165
‑
170mmol/L广谱杀菌剂
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ2‑
4mmol/L，以及重组降钙素原纯品和纯化水。3.根据权利要求1或2所述的一种降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述结合有抗人降钙素原抗体多克隆抗体的聚苯乙烯胶乳颗粒直径为50
‑
150nm。4.根据权利要求3所述的一种降钙素原测定试剂盒，其特征在于，试剂盒的制备方法包括以下步骤:(1)试剂R1的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄益峰，
申请(专利权)人：浙江爱康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：