SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞及其制备方法和应用，所述骨髓间充质干细胞内含有SP7基因或与SP7基因核苷酸序列中具有同源性、同等功能的核苷酸序列。SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞对缺氧的耐受性强，对活性氧有较强的抵抗性。动物实验也证实了，实验组小鼠显著改善了肺组织肺泡塌陷、炎细胞浸润情况，降低肺组织的纤维化。降低肺组织的纤维化。降低肺组织的纤维化。

【技术实现步骤摘要】
SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]随着我国核能的广泛开发、利用和涉核医学的飞速发展，人们暴露于电离辐射下的机会日益增多。放射性肺损伤(Radiation
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induced lung injury,RILI)是核与辐射突发事故中造成人员死亡的重要原因，也是临床上胸部肿瘤患者放疗常见的副反应。据报道胸部肿瘤放疗时有14.6％
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37.2％病人伴有放射性肺损伤发生，这严重限制了肿瘤的治疗效果，也影响了患者的生活质量。RILI 起病急、病程长，尤其是后期的纤维化，对患者的健康造成了严重的损害，同时也为家庭带来了沉重的生活、经济负担。因此，放射性肺损伤的防治研究不论对医学健康还是社会发展都具有重要的现实意义。
[0003]由于RILI发生机制复杂，且病程缓慢、迁延，临床上一直未有有效的防治方法。而现有的措施，也主要针对于RILI的预防，包括活性氧清除剂、蛋白酶抑制剂、细胞因子拮抗剂等。这些药物针对RILI的某一环节起作用，能在一定程度上缓解RILI，但对整个肺炎—肺纤维化的进程却未能起到良好的阻滞作用。相比于预防，临床上对RILI的治疗措施更为有限，目前仍以糖皮质激素为主。虽然，激素可有效减轻RILI的早期炎症情况，但带来副作用则严重限制了其广泛和长期的应用。
[0004]近年来，间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的研究为RILI的防治提供了新的思路和策略。MSC是来源于发育早期中胚层的一类具有高度自我更新、多向分化潜能的多能干细胞。其广泛存在于骨髓、外周血、脐带血、胚胎肝脏、胰腺、脾、脂肪等多种组织中，其中以骨髓来源多见。MSC免疫原性低，能通过“归巢”作用定植于受损组织，分化为相应组织细胞，从而修复组织损伤；另一方面，MSC还能通过表面分子接触以及外分泌细胞因子来抑制免疫激活，减轻局部炎症。截至目前，MSC在多种疾病中已显示了良好的治疗效果，如心衰、肝损伤、皮肤损伤等，甚至在一些罕见病如多发性硬化、肺囊性纤维化等的治疗中也凸显出较大的优势。但对于放射性肺损伤，由于受照后肺部缺氧和高活性氧环境，从而限制了外源性MSC在受照射肺组织长时间存活，弱化了MSC对放射性肺损伤的治疗作用。

技术实现思路

[0005]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞及其制备方法和应用，解决了现有的间充质干细胞移植体内后在受照射肺组织存活时间有限，治疗放射性肺损伤效果差的技术问题。
[0006]本专利技术提供了一种SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSC)，所述骨髓间充质干细胞内含有SP7基因或与SP7基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列。
[0007]本专利技术提供了一种SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞的制备方法，所述方法为将
SP7基因或与SP7基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列转染至骨髓间充质干细胞获得。将基因片段转染至细胞，可以采用现有技术中的任意一种方法。具体地，可以构建含有SP7基因或与SP7基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列的重组载体，然后将重组载体转染至干细胞中。可以采用现有技术已知的各种载体，例如慢病毒。所述骨髓间充质干细胞为可稳定传代的骨髓间充质干细胞。
[0008]进一步地，所述方法包括，对转染后的骨髓间充质干细胞继续培养，选取转染成功的目的细胞。
[0009]本专利技术的另一方面提供了上述SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞在制备放射性肺损伤药物中的应用。
[0010]所述放射性肺损伤可以为来自意外事故中的损伤，或者放疗病人所遭受的损伤。一般而言，本文所指的损伤一般是指胸部局部照射剂量低于25Gy。
[0011]本专利技术的另一方面提供了一种治疗放射性肺损伤药物，所述药物含有治疗有效量的如上所述的SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞。
[0012]进一步地，所述药物中还含有人体可接受的辅料。
[0013]所示药物的使用方法可以在医生的指导下使用，例如可以将上述SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞注入患者体内，其注射剂量根据损伤情况而定。
[0014]本专利技术的另一方面提供了一种药物组合物，所述药物组合的有效成分之一为SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞。其他药物成分可以为治疗其他症状的药物，例如癌症治疗药物。
[0015]如上所述，本专利技术的SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞，具有以下有益效果：
[0016]对缺氧的耐受性强，对活性氧有较强的抵抗性。动物实验也证实了，实验组小鼠显著改善了肺组织肺泡塌陷、炎细胞浸润情况，降低肺组织的纤维化。
附图说明
[0017]图1显示为骨髓间充质干细胞形态图。
[0018]图2A显示为72h后，流式结果图。
[0019]图2B显示为SP7蛋白的Western blotting图。
[0020]图3A显示为实验组和对照组的细胞活力曲线图。
[0021]图3B显示为缺氧的环境中实验组和对照组的细胞活力流式检测图。
[0022]图3C显示为H2O2处理后实验组和对照组的细胞凋亡流式检测图。
[0023]图4显示为对小鼠进行肺组织局部照射示意图。
[0024]图5A显示为照射后小鼠肺组织H&E染色图。
[0025]图5B显示为照射后小鼠肺组织Masson染色图。
具体实施方式
[0026]以下通过特定的具体实例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点与功效。本专利技术还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本专利技术的精神下进行各种修饰或改变。须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置
均采用本领域内的常规设备或装置。此外应理解，本专利技术中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明；还应理解，本专利技术中提到的一个或多个设备/装置之间的组合连接关系并不排斥在所述组合设备/装置前后还可以存在其他设备/装置或在这些明确提到的两个设备/装置之间还可以插入其他设备/装置，除非另有说明。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本专利技术可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更
技术实现思路
的情况下，当亦视为本专利技术可实施的范畴。
[0027]实施例1SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSC
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SP7)制备
[0028]1.1制备方法：
[0029](1)将雄性，6
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8周龄，C57BL/6小鼠，取骨髓后，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞，其特征在于：所述骨髓间充质干细胞内含有SP7基因或与SP7基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列。2.一种SP7基因修饰的骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在于：所述方法为将SP7基因或与SP7基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列转染至骨髓间充质干细胞获得。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述方法包括1)将SP7基因或与SP7基因核苷酸序列中具有至少90％同源性、同等功能的核苷酸序列插入质粒中；2)将质粒转染至骨髓间充质干细胞。4.根据权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘虎，刘入菱，林裕汉，张澄，杨亚杰，夏鹏林，吴润琳，肖宁，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学，
类型：发明
国别省市：