竹红菌乙素在制备抗结肠癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种竹红菌乙素在制备抗癌药物中的应用，所述的抗癌药物用于治疗或者预防结肠癌；所述的抗癌药物以竹红菌乙素作为活性成分。试验结果表明，竹红菌乙素能抑制CRC细胞增殖，促进CRC细胞凋亡或者抑制CRC细胞的迁移，为结肠癌的治疗提供了新的可能的药物。为结肠癌的治疗提供了新的可能的药物。

【技术实现步骤摘要】
竹红菌乙素在制备抗结肠癌药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物制药领域，具体涉及一种竹红菌乙素在制备抗结肠癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是实体癌中发病率和死亡率最高的肿瘤之一，且发病率呈稳步上升趋势，约占全球新发癌症病例的10％。全球每年报告有120万新增病例和60万死亡病例。其恶性程度极高，转移性强，治愈率较低且预后差，并且出现越来越年轻化的趋势。目前临床上结肠癌的常规治疗仍旧以手术和化学疗法为主。手术治疗具有很大的局限性，复发率高，依从性差。化学疗法可通过诱导DNA损伤或启动多种信号传导途径来诱导癌细胞死亡。对于I期和III期结肠癌患者，虽然辅助化疗已成为常规治疗方法，但是化疗仍会出现强烈的副作用，且患者容易复发，因此迫切需要寻求高效低毒的抗肿瘤药物来靶向治疗结肠癌。
[0003]竹红菌乙素(Hypocrellin B，HB)是分布于我国云南丽江这一特定地域的竹红菌的主要成分，其分子结构式如图1A，现在民间用作药物治疗胃痛和关节炎并且是治疗皮肤病、抗肿瘤、抗艾滋病的潜在的有效光敏药物。由于其能在特定波长激发下与肿瘤细胞底物酶产生高水平的R OS诱导细胞凋亡，HB作为一种天然的苝醌类色素且在正常组织中快速代谢并且毒性低，而被用作光敏剂广泛用于多种人类癌细胞的光动力治疗。HB的声动力作用可诱导HepG2细胞线粒体损伤、存活抑制和凋亡。此外，其他亚细胞细胞器，如内质网、高尔基体和溶酶体，也都是下HB介导的声动力作用的靶点。
专利技术内容
[0004]本专利技术提供了一种竹红菌乙素在制备抗结肠癌药物中的应用，为结肠癌的治疗提供了新的可能的药物。
[0005]一种竹红菌乙素在制备抗癌药物中的应用，所述的抗癌药物用于治疗或者预防结肠癌；
[0006]所述的抗癌药物以竹红菌乙素作为活性成分。
[0007]试验结果表明，竹红菌乙素可以抑制RKO细胞、h116细胞和DLD1 细胞的增殖，作为优选，所述的抗癌药物用于抑制肠癌细胞的增殖。
[0008]试验结果表明，竹红菌乙素可以促进肠癌细胞株的凋亡，作为优选，所述的用于促进结肠癌肿瘤的缩小。
[0009]试验结果表明，所述的竹红菌乙素可以抑制RKO细胞和DLD1细胞的迁移，作为优选，所述的抗癌药物用于抑制结肠癌的转移。
附图说明
[0010]图1为实施例1中竹红菌乙素抑制CRC细胞增殖的结果示意图；
[0011]图2为实施例2中竹红菌乙素促进CRC细胞凋亡的结果示意图；
[0012]图3为实施例3中竹红菌乙素抑制CRC细胞迁移能力的结果示意图。
具体实施方式
[0013]实施例1
[0014]本实施例通过MTT实验检测HB对三种肠癌细胞(RKO,h116和 DLD1)的抗增殖作用。结果如图1B所示，HB在RKO,h116和DLD1 三种细胞中的半数抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration， IC50)分别是0.258μM、0.4067μM和0.268μM。而且我们展开细胞克隆实验考察HB对上述三肿瘤细胞集落形成能力的影响，以细胞集落形成率与集落形成大小表示细胞独立生存能力，结果如图1C所示，不同浓度梯度(0.5μM，1μM和2μM)药物处理后的集落形成结果显示，HB 可以抑制肠癌细胞株的克隆形成能力，并呈浓度依赖性。这些结果表明 HB可抑制CRC细胞增殖。
[0015]MTT实验：在96孔板中铺入细胞(3000
‑
5000个/孔)，待细胞贴壁后分别加入不同浓度的Hypocrellin B(0，0.01μM，0.1μM，1μM，2.5 μM，5μM，10μM，50μM，100μM)药物作用48h后加入5mg/mLMTT溶液(25μL/孔)。避光孵育4h后，小心吸弃孔内上清液，加入二甲基亚砜溶液(150ul/孔)溶解结晶，应用酶标仪在490nm波长上测定各孔吸光度，计算半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)，结果如图1B所示。
[0016]克隆形成实验：肿瘤细胞具有独立生存能力，形成细胞集落，通过集落形成实验可以了解细胞增殖情况。在6孔板中铺入细胞(800
‑
1000 个/孔)，待细胞贴壁后分别加入不同浓度的Hypocrellin B(0,0.5μM,1 μM,2μM)，作用24h后撤去药物，加入新鲜培养基继续培养1周，待细胞形成肉眼可见的集落；用4％多聚甲醛固定后应用结晶紫溶液染色，比较各处理组集落的大小和数量，结果如图1C所示。结果显示，HB处理明显抑制CRC细胞的克隆形成数量和大小。
[0017]实施例2
[0018]进一步探究HB对CRC细胞株凋亡情况的影响。使用Hoechst 33342 对经过不用浓度梯度(0.5μM，1μM和2μM)的HB处理过的肠癌细胞进行染色，结果如图2所示，细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，荧光强度越强。荧光显微镜观察发现随着浓度增加，凋亡的细胞增多。
[0019]Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察，试验过程如下：
[0020]将CRC细胞铺于6孔板，待密度长到80
‑
90％，加入，加入不用浓度梯度(0.5μM，1μM和2μM)的HB处理，12小时后弃掉培养基，用 PBS洗1
‑
2次，然后加入少量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可，室温放置3
‑
5分钟。吸除Hoechst 33342染色液，用PBS洗涤2
‑
3次，每次3
‑
5分钟。直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。
[0021]实施例3
[0022]同时，运用划痕实验发现HB处理RKO和DLD1两种细胞，发现可抑制细胞的迁移能力(图3)。
[0023]划痕愈合实验：划痕愈合实验模拟了细胞在体内的迁移过程，可反映细胞的迁移
能力。当细胞生长融合成单层状态时，人为创建“划痕”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合，在划痕创建开始和定期捕获图像以比较空白区域的大小，细胞迁移速率。在6孔板中铺入RKO,DLD1细胞(1
×
106个/孔)，待细胞融合至80
‑
90％时，用200ul 黄枪头划出划痕，用磷酸盐缓冲液洗去漂浮细胞后加入含2％FBS的新鲜血清以及不用浓度梯度(0.5μM，1μM和2μM)，于药物作用0h、36h 分别显微镜镜下拍摄划痕区域，结果如图3所示。结果显示HB处理明显抑制了CRC细胞的迁移能力。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种竹红菌乙素在制备抗癌药物中的应用，其特征在于，所述的抗癌药物用于治疗或者预防结肠癌；所述的抗癌药物以竹红菌乙素作为活性成分。2.根据权利要求1所述的竹红菌乙素在制备抗癌药物中的应用，其特征在于，所述的抗癌药物用于抑制肠癌细胞的增殖。3.根据权利要求2所述的竹红菌乙素在制备抗癌药物中的应用，其特征在于，所述的肠癌细胞为RKO细胞、h116细胞和DLD1细胞。4.根据权利要求1所述的竹红菌乙素在制备抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨乐和，黄晓颖，朱文静，盛珏琦，谢梦瑶，吕烁烁，程佳韵，张璐瑶，赵承光，王良兴，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：